定量PCR原理、材料與實驗方法
一．原理應用定量PCR技術，用一種標準作對照能夠估計出一種特異性靶DNA或RNA分子的相對含量。參照物：在定量 PCR 中必須加入參照物，用來作為擴增系統的陽性對照，并作為未知樣本定量的標準，且通過競爭性作用校正擴增系統內管間的擴增效率，使其具有可比性。參照物按其性質不同可分為內參照和外參照。內參照和外參照均是在定量PCR 過程中一種含量已知的標準品模板。根據參照物的不同，定量PCR分為競爭性定量PCR和非競爭性定量PCR。內參照是與待檢樣本加于同一反應管中，與樣本共用或不共用同一對引物的標準模板。共用同一對引物者，兩個模板的擴增存在競爭性，稱競爭性內參照，這種條件下進行的定量PCR屬競爭性定量PCR；相反，不共用同一對引物時則不存在競爭性，為非競爭性內參照，屬非競爭性定量PCR。外參照則是參照物與待檢樣本的擴增分別在不同的管間進行。采用外參照進行的定量PCR屬非競爭性定量PCR。非競爭性對照基因定量法：即是靶基因與參照基因的同......閱讀全文
Troubleshooting for PCR and multiplex PCR
Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles.COMPONENTVOLUMEFINALCONCE
多重PCR（Multiplex PCR）
一般PCR僅應用一對引物，通過PCR擴增產生一個核酸片段，主要用于單一致病因子等的鑒定.多重PCR(multiplex PCR)，又稱多重引物PCR或復合PCR，它是在同一PCR反應體系里加上二對以上引物，同時擴增出多個核酸片段的PCR反應，其反應原理，反應試劑和操作過程與一般PCR相同.??? 多
PCR簡介/PCR儀
PCR的要素基本的PCR須具備PCR儀圖冊1.要被復制的DNA模板 Template2.界定復制范圍兩端的引物Primers.3.DNA聚合酶Taq. Polymearse4.合成的原料（四種脫氧核苷酸）及水。 PCR儀工作原理利用升溫使DNA變性，在聚合酶的作用下使單鏈復制成雙鏈，進而達到基因復制
多重PCR（Multiplex PCR）
一般PCR僅應用一對引物，通過PCR擴增產生一個核酸片段，主要用于單一致病因子等的鑒定.多重PCR(multiplex PCR)，又稱多重引物PCR或復合PCR，它是在同一PCR反應體系里加上二對以上引物，同時擴增出多個核酸片段的PCR反應，其反應原理，反應試劑和操作過程與一般PCR相同.??? 多
重疊PCR—overlap PCR
1、簡介?重疊PCR也是基本的PCR原理：變性-退火-延伸。不同的是在重疊PCR過程是兩個或者幾個片段重疊延伸之后，再進行指數擴增的PCR過程。 ?2、基本原理*步：PCR產生兩個或者幾個片段，這幾個片段之間必須有重疊區。?第二步：以兩個片段為例，見上圖，*步產生的兩個片段，A D鏈之間有互補，B
普通PCR梯度PCR 原位PCR 熒光定量PCR儀的區別
普通PCR儀： 一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀，稱之為普通PCR儀，也就是傳統的PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。如；（ABI 2720） 梯度PCR儀： 一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件（通常12種溫度梯度）的稱
反轉錄PCR（RT-PCR, Reversed Transcript PCR）
1 原理 RT—PCR是一種將cDNA合成與PCR技術結合分析基因表達的快速靈敏的方法，主要用于對表達信息進行檢測或定量分析,還可以用來檢測基因表達差異而不必構建cDNA文庫克隆cDNA。RT-PCR的模板可以為總RNA或poly(A)+選擇性RNA。逆轉錄反應可以使用逆轉錄酶，以隨機引物、ol
直接原位PCR（In situ PCR）
原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進。此技術是在細胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。一、組織切片和細胞樣品的制備試劑與配置10%福爾馬林；二甲苯；PBS操
反向PCR（inverse PCR）簡介
反向PCR是一種多聚合酶鏈式反應（PCR）應用的方法，可使已知序列的核心區邊側的未知DNA成幾何級數擴增。用適當的限制性內切裂解含核心區的DNA，以產生適合于PCR擴增大小的片段，然后片段的末端再連接形成環狀分子。PCR的引物同源于環上核心區的末端序列，但其方向可使鏈的延長經過環上的未知區而不是分開
反向PCR （inverse-PCR）
實驗方法原理 反向PCR是克隆T-DNA插入位點側翼DNA序列非常有效的方法。?1. ?選擇合適的限制性內切酶位點。并在T-DNA的邊界（左邊界、右邊界均可）和酶切位點附近設計引物P1、P2；2. ?回收DNA，T4連接酶連接，使酶切后的DNA片段環化；3. ?回收連接后的DNA，用引物P1、P2做