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實驗材料線粒體懸液試劑、試劑盒蔗糖溶液Tris-HClEDTA儀器、耗材Bockman SW28 號轉頭實驗步驟1. 在用于 Bockman SW28 號轉頭（或與其等同的產品）的 Uitradear 離心管中，小心地在 15 ml 1.5 mol/L 的蔗糖溶液上加一層 15 ml 1.5 mol/L 的蔗糖溶液，形成 30 ml 的梯度：1.0 mol/L 蔗糖和 1.5 mol/L 蔗糖溶液中含：10 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.5)1 mmol/L EDTA，pH 7.52. 小心加入線粒體懸液（總體積 7 ml），60000 g（22000 r/min）離心 20 分鐘。線粒體會在 1 mol/L 和 1.5 mol/L 界面處形成一薄層。3. 移去樣品層及其與 1.0 mol/L 層的交界。4. 用一巴斯德吸管輕柔的在 1.5 mol/L 層頂部吸出線粒體。5. 稀釋蔗糖溶液，17000 g 離心 ......閱讀全文
在實驗過程中，由于樣品的各種性質差異，只有選擇了正確的離心方法，才能獲得預期的分離純化結果。常用的離心方法主要有差速離心法、密度梯度離心法。其中密度梯度離心法又可細分為速率區帶離心和等密度梯度離心法。小貝離心學堂將對這三種常用的離心分離方法分別進行專題介紹。 離心方法——差速離心 &nb
*章離心機及轉子的分類：一．離心機的分類：國際上對離心機的分類方法有三種：按用途分、按轉速分和按結構分。按用途分類：分為制備型離心機和制備分析離心機。制備型離心機：僅供分離濃縮，提純試樣的離心機。制備分析離心機：不但能分離濃縮、提純試樣，而且可以通過光學系統對試樣的沉降過程進行觀察、拍照、測量、數字
一）簡介：用簡易的差分離心結合各種型式的密度梯度離心可以分離和純化各種亞細胞器。研究者也可以根據自己的設備情況對實驗參數做一定的改動，也可以更多地利用速率-區帶密度梯度離心或等密度離心來簡化實驗過程和提高分離純度。二）實驗：ⅰ）勻漿制備： 鼠肝12克加入0.25M蔗糖與5mM Tris-H
離心技術的類型最大速度方法 (1)移動界面超速離心法 含幾個組分的樣品在足夠高的離心場中離心時，每種顆粒都達到其最大沉降速度，這時樣品開始分離。離心管的上層逐漸形成透明的上清液，并形成對應于樣品各組分的一系列濃度界面，界面的移動相對于每種組分來說是特征的。雖然利用這種方法不一定能實現組分的純化分離，
離心技術的類型 最大速度方法 (1)移動界面超速離心法 含幾個組分的樣品在足夠高的離心場中離心時，每種顆粒都達到其最大沉降速度，這時樣品開始分離。離心管的上層逐漸形成透明的上清液，并形成對應于樣品各組分的一系列濃度界面，界面的移動相對于每種組分來說是特征的。 雖然利用
離心技術的類型 最大速度方法 (1)移動界面超速離心法 含幾個組分的樣品在足夠高的離心場中離心時，每種顆粒都達到其最大沉降速度，這時樣品開始分離。離心管的上層逐漸形成透明的上清液，并形成對應于樣品各組分的一系列濃度界面，界面的移動相對于每種組分來說是特征的。 雖然利用
最大速度方法(1)移動界面超速離心法含幾個組分的樣品在足夠高的離心場中離心時，每種顆粒都達到其最大沉降速度，這時樣品開始分離。離心管的上層逐漸形成透明的上清液，并形成對應于樣品各組分的一系列濃度界面，界面的移動相對于每種組分來說是特征的。雖然利用這種方法不一定能實現組分的純化分離，但可以通過監測界面
一、破碎細胞的方法 1.桿狀玻璃勻漿器法 ?該勻漿器由一根端部表面磨砂的玻璃桿和一個內壁磨砂的玻璃套管組成。使用時，先用鋒利的刀片把組織塊切碎，然后把碎塊加入套管中，用力使玻桿移動使組織細胞破碎。 2.高速組織搗碎機法 ?使用時將4℃預冷的組織碎塊或細胞懸液加入搗碎機的梅
實驗步驟一、膜的制備從細胞或組織中分離質膜是純化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分離去污劑增溶的膜蛋白的生化方法，因此在質膜成分純化上投人一些時間會對后續步驟的結果有利。大多數膜蛋白的含量較低, 因此選擇易于大量獲取并能高表達目的膜蛋白的組織或細胞系就很重要。最近，人們對于將細胞表面蛋白質作為鑒定不同
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實驗步驟 一、膜的制備 從細胞或組織中分離質膜是純化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分離去污劑增溶的膜蛋白的生化方法，因此在質膜成分純化上投人一些時間會對后續步驟的結果有利。 大多數膜蛋白的含量較低, 因此選擇易于大量獲取并能
實驗材料黃化苗試劑、試劑盒勻漿緩沖液清洗緩沖液Percoll 梯度溶液儀器、耗材分光光度計實驗步驟在選好植物材料和勻漿緩沖液后，接下來關鍵的因素包括勻漿方法、緩沖液的 pH、使用的緩沖液與植物組織之間的比例、研磨時間及溫度等（見注釋 5) 。3.1 勻漿根據植物組織的不同可以采取不同的勻漿方法，或者
抗血清的制備 【原理】：用抗原刺激機體可以產生抗體，抗原的性質、純度和活性影響其免疫動物后獲得的抗體的的特異性和效價。在體外有目的的制備抗原，經初次、再次免疫的過程可以獲得高質量的抗體。 【注意事項】 ①制備佐劑時，一定要順著同一方向用勁磨。 ②檢查油包水的方法：培養皿內加水，滴入混勻液
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。 本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術: 一、原理 二、分類
用體外或體內試驗對機體的各種參與免疫應答的細胞進行鑒定、計數和功能測定，藉以了解機體的免疫狀態，并對某些臨床疾病的診斷，預后及療效觀察等也具有一定意義。一、免疫細胞的分離體外測定免疫細胞首先要從外周血或淋巴組織中分離所需的細胞。其主要方法是根據細胞的表面標記、理化性狀及功能等方面的差別進行設計。
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被
蛋白質組學研究已經成為后基因組時代的研究熱點，是生命科學研究領域又一個新的突破口。本文從對疏水性強的蛋白質、極性蛋白質、高豐度蛋白的處理、低豐度蛋白的富集和對樣品溶液中干擾性物質的去除以及對不同染色后質譜前處理等方面綜述了蛋白質樣品的一般處理方法。 1. 不溶性蛋白質的處理 天然狀態的蛋白質
現代生物學研究常常需要提取和純化細胞及組織中的亞細胞構造（細胞核、質膜、內笪綱、高爾基體、線粒體、溶酶體、微粒體等等）。在經過選擇的最合適的生物體勻漿制備后，用離心法提取和純化亞細胞構造是最常用、也是最有效的實驗手段。 （一）勻漿制備： 將生物體組織剪切成2~3毫米小塊或小片，以每100毫升加濕重