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在懸浮或單層培養細胞體系中融合細胞，用 PEG 處理細胞的時間應很短，以減少細胞的死亡。通常，在使用選擇性培養基前，需給細胞 24 h 的恢復期。實驗材料PEG試劑、試劑盒完全培養基無血清培養基NaOH儀器、耗材皮氏培養皿通用容器實驗步驟PEG 1000 ( Merck)：(a) 髙壓處理PEG，將其液化及滅菌。(b) 將 PEG 冷卻到 37°C ，然后與預熱至 37°C 的等體積無血清培養基混合。(c) 用 1.0 mol/L NaOH 調整 pH 至約 7.6~7.9。(d) 溶液于 4°C 儲存最長為2 周。A. 單層培養細胞的融合：1. 將兩種等量待融合的細胞分別接種于 50 mm 細胞培養皿。每個親代細胞系接種濃度在 2.5X105~2.5X 106 /皿之間即可。2. 將混合的細胞過夜培養。3. 將 PEG-無血清培養基加溫至 37°C ，此時需要用 NaOH 重新調定 pH。4. 棄凈原培養液，用無血清......閱讀全文
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動
真核生物中，從個體的生長、發育、衰老、死亡，到組織的得化、調亡以及細胞對各種生物、理化因子的應答，本質上都涉及基因的選擇性表達。高等生物大約有30000個不同的基因，但在生物體內任意8細胞中只有10%的基因的以表達，而這些基因的表達按特定的時間和空間順序有序地進行著，這種表達的方式即為基因的差異表達
摘要 蛋白質組學是在后基因組時代出現的一個新興的研究領域, 它的主要任務是識別鑒定細胞、組織或機體的全部蛋白質, 并分析蛋白質的功能及其模式。 因此, 揭示蛋白質組中蛋白質間的相互作用關系也是蛋白質組學的重要內容之一。 酵母雙雜交技術是用來檢測蛋白質間是否相互作用的一
近10年來，現代分子生物學技術越來越廣泛地被用于人類疾病研究的諸領域，為了解病理狀態下基因組DNA的變化積累了新資料。目前認為，人類基因組并非人們想像的那樣穩定，諸如基因重排、擴增、缺失，突變和DNA甲基化類型改變等時有發生，這些改變對于基因表達和調控，以及疾病過程的發展與轉歸等方面均具有重要意義。
作為后基因組時代出現的新興研究領域之一, 蛋白質組學(proteomics)正受到越來越多的關注。 蛋白質組學的研究目標是對機體或細胞的所有蛋白質進行鑒定和結構功能分析。 蛋白質組學的研究不局限任何特定的方法。 高分辨率的蛋白質分離技術如二維凝膠電泳和高效液相
實驗方法原理實驗材料永生化淋巴細胞株試劑、試劑盒青霉素谷氨酰胺胎牛血清植物血球凝集素胸苷秋水仙胺KCl甲醇冰乙酸檸檬酸鈉SSC甘油生物素-16-dUTP地高辛-11- dUTP10 XdNTP 混合物儀器、耗材超凈臺細胞培養瓶Nunc 管培養基相差顯微鏡染色缸加熱板裝有Pinkel濾光片輪的CCD顯
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展，新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展，新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
河南日報退休高級編輯，大河健康報退休總編，河南農大兼職教授，中國新聞獎獲得者。 各位女士、各位先生： 大家好。大家都是經常來圖書館借書、看書的讀者，如今喜歡看書的人真是難能可貴。看年齡，大家多數是60后、50后，少數是70后、40后。大家可能都不是生物專業的大學生，但是大家在中學階段都學過化
一、DNA探針的應用 雖然一般認為DNA探針敏感度不如cRNA探針，但在病毒的檢測等領域中DNA探針仍得到廣泛的應用。 在原位雜交細胞化學的操作步驟方面與cRNA探針基本相同，所不同的是：（1）雜交時需先在高溫80～95℃短時處理，使DNA探針及細胞內靶DNA變性，解離成單鏈，迅置于冰上冷卻。然
實驗方法原理光譜染色體核型分析（SKY)采用24種顏色對所有染色體進行涂染，在一次試驗中可以觀察到每一條染色體。該技術以光譜成像和傅里葉光譜學原理為基礎。對流式分選的染色體進行PCR標記，直接標記熒光素或間接標記半抗原。5種光譜學不同的純色染料進行組合得到獨特的染色體探針混合物。探針混合物與中期染色
基本方案 實驗方法原理 光譜染色體核型分析（SKY)采用24種顏色對所有染色體進行涂染，在一次試驗
（一）一般光學顯微鏡術應用一般光學顯微鏡（簡稱光鏡）觀察組織切片是組織學研究的最基本方法。取動物或人體的新鮮組織塊，先用固定劑（fixative）固定（fixation），使組織中的蛋白質迅速凝固，防止細胞自溶和組織腐敗。常用的固定劑如灑精、甲醛、醋酸、苦味酸、四氧化鋨等，一般常將幾種固定劑配制成混
高等生物遺傳圖譜的構建依賴于選擇性雜交后代的分析或者通過家系分析法來計 算連鎖關系。對人類而言僅后者是可行的。使用長度多態性限制片段（RFLPS）在構 建人連鎖圖譜方面已取得長足的進步。為了對帶有與已知表現型相關的RFLP標記的基 因進行定位，首先得建立間隔約10CM的遺傳標記束（平均1CM等于1％
DNA重組技術（或基因工程）是20世紀生物學的偉大成就，并已滲透到生命科學包括醫學 各個領域，為腫瘤的實驗研究和臨床診斷及治療提供了嶄新的技術和有用的工具。本附錄扼要介紹在分子腫瘤學領域中常用的分子生物學基本技術及其在腫瘤研究中的應用，著重介紹它們的原理和應用。至于具體的技術方法和操作步驟可參閱《分
DNA合成儀的誕生使制造寡核苷酸探針成為可能，與上述探針不同的是寡核苷酸探針不是克隆性DNA探針，它是由DNA合成儀依照所需雜交的靶核苷酸序列合成的。具有制造方便，價格低廉的優點，也可進行放射性與非放射性標記，但其特異性不如克隆性探針強，亦不如其雜交信號高。 原位雜交組織化學技術在近20年的發展
（8）熒光顯示： ①生物素標記DNA探針的熒光顯示。 1）應用PBS含5%無脂干奶（5μl每張蓋片），也可用1%牛血清白蛋白（BSA）-PBS覆蓋孵育5min室溫，以封閉非特異性結合部位。 2）移除多余液體，加抗生素-FITC（5μg/ml在PBS含5%奶粉或1%BSA，5μl/cm2）。在濕
原位雜交（inhybridization,ISH) 的目的是在細胞結構內顯 TKmRNA 分子。在 ISH 步驟中要采用高溫，這就對細胞的固定有特殊要求。如果原位雜交方法不能提供陽性的雜交信號，還可以應用其他的技術，如通過 mRNA 擴增來檢測神經突起微小區域內的低豐度 mRNA 的存在（Miyas
Angerer及其同事們首先應用RNA探針于原位雜交（見Cox et al 1984），核酸探針為單鏈的RNA分子，產生自具有質粒逆轉錄系統的cDNA克隆（圖20-2）。由于它是單鏈的，不像雙鏈的DNA探針，在溶液中不會再退火（reanneal），因此，較大百分比的探針可參與雜交反應，較cDNA探針
熒光原位雜交（FISH) 技術可以對染色體、細胞和組織中的特異核酸序列進行檢測。明確檢測到全染色體或染色體某個特定區域的結構或拷貝數發生改變是人類疾病重要的預兆因子。應用于染色體分析的 FISH 可以分為中期 FISH 和間期 FISH，兩者的主要區別在預處理和雜交前的細胞制備工作。用于中期分析的細
染色體畸變通常在大多數血液腫瘤和各種實體瘤中檢測到，在臨床病理上，經常與判定腫瘤的直接形態和免疫表型特征有關。染色體畸變的檢測為逐條診斷和腫瘤遺傳分類奠定了基礎。尤其在白血病和淋巴瘤中，許多主要的染色體畸變與疾病的臨床分期有關。另外，在腫瘤預后過程中，還將發生其他染色體的畸變。因此，細胞遺傳學結果對
一、實驗原理Lederberg和Tatum（1946）選用典型的大腸桿菌為材料，篩選營養缺陷型。利用雙重和三重缺陷型的菌株，在簡單的合成培養基上混合培養，在此培養基上只有重組子能長，親本不能長，即所謂選擇性培養，使細菌雜交獲得成功。圖12-1說明了細菌的基因重組是不同基因型的細菌經接觸，接合后隨之發
實驗材料 正常鼠血清 鼠單克隆抗地髙辛抗體 鼠抗 FITC 抗體 AMCA-親和素 FITC-親和素
（四）雜交后處理（post hybridisation treatment） 雜交后處理包括系列不同濃度，不同溫度的鹽溶液的漂洗。在原位雜交組織化學的實驗程序中，這也是一個重要的環節 。特別因為大多數的原位雜交實驗是在低嚴格度條件下進行的，非特異性的探針片段粘附在組織切片上，從而增強了背景染色。R
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。 3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單
如前所述，雜交前的準備只是為雜交的成功奠定基礎，要獲得滿意的實驗結果，在雜交這一實驗過程中還須注意以下的環節。1．探針的濃度 很難事先確定每一種實驗探針的濃度，但要掌握一個原則，即探針濃度必須給予該實驗zui大的信/噪比值。背景染色的高低也與探針濃度有關。根據國內外實驗工作者的經驗，認為zui佳原
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解，并且導致了免疫新策略的產生，免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。 一、GST pull-down實驗 GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶，GST pull-down實驗是一個行之有效的驗