重組腺相關病毒載體的生產實驗
瞬時轉染 293 細胞制備無腺病毒重組腺相關病毒載體實驗材料293組織培養細胞系pSub201質粒pXX2質粒pXX6質粒試劑、試劑盒完全DMEM 10%FBS培養基完全IMDM 10%FBS培養基CaCl2純DMEM 2%FBS 培養基干冰 乙醇浴硫酸銨飽和硫酸銨乙醇PBS儀器、耗材組織培養板—次性聚苯乙烯及聚苯乙烯離心管細胞刮聚苯乙烯離心瓶離心機超聲破碎儀探針高速聚丙烯離心管穿孔透析盒實驗步驟展開......閱讀全文
重組病毒噬斑篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 轉染細胞溶解產物 BS-C-1／HuTK-143B／BHK-21／CEF 貼壁生長匯片的細胞 試劑、試劑盒
關于重組新型冠狀病毒疫苗（5型腺病毒載體）的簡介
重組新型冠狀病毒疫苗（5型腺病毒載體）是由康希諾生物和中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院生物工程研究所陳薇院士團隊合作研發的新型冠狀病毒疫苗。 2021年2月25日，疫苗獲得國家藥品監督管理局批準在國內附條件上市 [1] [7]。5月13日起，上海市各區已陸續開始供應重組新型冠狀病毒疫苗（
病毒包裝技術——腺相關病毒(AAV)包裝（二）
2.3?蛋白質分析?為了分析AAV Rep和Cap蛋白質表達，按照2.2部分所述進行質粒轉染。轉染后48小時，將培養物刮到冷PBS/Mg(PBS含有5mM MgCl2)，細胞低速離心沉淀收獲。細胞沉淀在冰上用200ml STM-NP緩沖液(25mM蔗糖,10mM Tris-HCl，pH8
病毒包裝技術——腺相關病毒(AAV)包裝（一）
摘要:腺相關病毒(AAV)是一種人細小病毒，?因為能作為一種基因治療載體而受到廣泛關注。目前大多數生成rAAV的實驗方案需要共轉染一個載體質粒和一個表達病毒復制和結構基因的包裝質粒到腺病毒(Ad)感染的培養細胞中。但是也可以通過新的輔助質粒(pH3和pH5)，排除了Ad共轉染的需求。輔助質粒表達AA
簡述腺相關病毒的組織嗜性
AAV感染不同組織效果圖 不同AAV血清型的組織親和性 AAV1載體：明顯的骨骼肌嗜性（包括心肌），神經組織也可以感染； AAV2載體：泛嗜性；最早應用的AAV載體。有效轉導肌肉，肝臟，腦組織，對于視網膜的轉導效率和表達水平良好 AAV5載體：視網膜、神經系統、關節滑膜嗜性、肺； AA
腺相關病毒AAV簡介及應用
一、腺相關病毒簡介腺相關病毒（Adreno-Associated Virus, AAV）是微小病毒科（Parvoviridae）家族的成員之一。這一家族成員是一類微小、無被膜及具有二十面體結構的病毒。病毒顆粒的直徑在20～26nm之間，含有大小在4.7~6kb之間的線狀單鏈DNA基因組。它的復制和增
反轉錄病毒載體的制備實驗
實驗材料二個反轉錄病毒包裝細胞株反轉錄病毒載體包含選擇性標記試劑、試劑盒PBS細胞染色液組織培養皿儀器、耗材完全的 Dulbecco 改良 Eagle 培養基低蛋白質結合的纖維素乙酸鹽注射器式濾器克隆形成環實驗步驟展開
病毒載體與埃博拉病毒保護性抗原GP蛋白重組的疫苗
如重組水泡口腔炎病毒(VSV)疫苗，其表面有一個糖蛋白，作用是識別宿主細胞。這個蛋白就相當于一把鑰匙，打開人體細胞那把鎖之后，就可長驅直入了。研究者對這種病毒進行了轉基因，把它原有的糖蛋白用埃博拉病毒表面的糖蛋白替換。改造之后的VSV疫苗既能讓機體產生針對埃博拉病毒的抗體，同時又沒有致病性。
基本方案－運用－AdEasy－方法產生重組腺病毒載體
實驗材料感興趣的基因試劑、試劑盒具有卡那霉素抗性的 LB 培養基限制性內切核酸酶穿梭載體 DNA乙酸銨苯酚 氯仿 異戊醇乙醇電促感受態 BJ5183 細胞感受態 DH10B 細胞HBSS 或滅菌的 PBS儀器、耗材鋪有卡那霉素抗性的 LB 固體培養基皿瓊脂糖凝膠脂質轉染 AMINE 試劑Opti-M
重組桿狀病毒的純化實驗
實驗材料?桿狀病毒試劑、試劑盒?瓊脂牛血清儀器、耗材?培養瓶凍存管實驗步驟 1.? 制備病毒上清的系列稀釋液，該病毒上清獲得自在無血清完全培養液中轉染 pAC360β-gal DNA的細胞。在含150 μg/ml X-gal 的瓊脂糖頂層覆蓋物下病毒形成蝕斑。?2.? 當蝕斑形成后，用滅菌巴斯德吸管
病毒包裝技術7——腺相關病毒(AAV)包裝介紹
銳賽小課堂技術篇0702-113 摘要: 腺相關病毒(AAV)是一種人細小病毒， 因為能作為一種基因治療載體而受到廣泛關注。目前大多數生成rAAV的實驗方案需要共轉染一個載體質粒和一個表達病毒復制和結構基因的包裝質粒到腺病毒(Ad)感染的培養細胞中。但是也可以通過新的輔助質粒(pH
關于重組新型冠狀病毒疫苗（5型腺病毒載體）的疫苗病理介紹
重組新型冠狀病毒疫苗（5型腺病毒載體）的疫苗病理：遺傳基因是病毒進行不斷復制的決定因素，不管病毒的外殼怎么變化，只要基因不變就能復制出同樣的樣子。重組新冠疫苗的腺病毒載體，剔除了腺病毒（這里使用的是人5型腺病毒，Ad5）中與復制相關的基因，這樣病毒就不會在人體中復制。再把新冠病毒刺突蛋白（S 蛋
關于重組新型冠狀病毒疫苗（5型腺病毒載體）的疫苗進程介紹
2020年1月22日 國家科技部“新型冠狀病毒感染的肺炎疫情科技應對”第一批應急攻關項目啟動，快速疫苗研發成為重要研發任務之一 [2]。 2020年1月26日，陳薇院士團隊便抵達武漢，聯合地方優勢企業，在埃博拉疫苗成功研發的經驗基礎上，爭分奪秒開展重組新型冠狀病毒疫苗的藥學、藥效學、藥理毒理等
慢病毒載體相關知識問答大總結
慢病毒包裝技術專題Q:什么是慢病毒 ?A: 慢病毒載體 (Lenti vector)是用于感染細胞以實現穩定導入基因或siRNA的病毒載體系統，其感染效率可以達到100%。慢病毒和細胞結合后通過包裝蛋白將含有目的基因或者干擾序列釋放到細胞內。慢病毒RNA通過逆轉錄酶轉錄為DNA。DNA整合前復合
關于腺相關病毒的基本信息介紹
腺相關病毒（adeno-associated virus，AAV）,也稱腺伴隨病毒,屬于微小病毒科依賴病毒屬,是目前發現的一類結構最簡單的單鏈DNA缺陷型病毒，需要輔助病毒（通常為腺病毒）參與復制。它編碼兩個末端的反向重復序列（ITR）中的cap和rep基因。ITRs對于病毒的復制和包裝具有決定
重組載體疫苗的功能特點
將編碼某一蛋白抗原的基因轉入減毒的病毒或細菌而制成的疫苗。
重組疫苗載體的功能特點
中文名稱重組疫苗載體英文名稱recombined vaccine vector定 義用于攜帶重組疫苗抗原編碼基因的已有病毒或細菌的疫苗株。應用學科免疫學（一級學科），應用免疫（二級學科），免疫預防（三級學科）
重組載體疫苗的功能特點
一種新型疫苗。以減毒活病毒或減毒活細菌為載體，將編碼特定病原體免疫原性蛋白的基因插入載體，作為疫苗輸入機體可預防特定病原體。
重組疫苗載體的基本介紹
中文名稱重組疫苗載體英文名稱recombined vaccine vector定 義用于攜帶重組疫苗抗原編碼基因的已有病毒或細菌的疫苗株。應用學科免疫學（一級學科），應用免疫（二級學科），免疫預防（三級學科）
重組載體疫苗的制備過程
重組載體疫苗?將編碼某一蛋白抗原的基因轉入減毒的病毒或細菌而制成的疫苗.
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——重組蛋白大規模生產
實驗材料草地夜蛾細胞（Sf 9）高滴度重組病毒儀器、耗材無血清昆蟲細胞培養基1～10 L 旋轉培養瓶10.16 cm 管索張力器多旋轉瓶攬拌臺27℃ 培養箱供氣泵實驗步驟1. 在懸浮培養液中培養 Sf 9 細胞，并使之適應無血清培養液（基本方案 1）。2. 準備旋轉培養瓶，用于按比例擴增 Sf 9
重組病毒的蛋白質分析實驗
實驗材料Sf細胞試劑、試劑盒胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制劑裂解緩沖液儀器、耗材培養瓶培養箱離心機轉子水浴鍋實驗步驟1. ?接種2.5x108?Sf9細胞于含5 ml 完全培養液/10%胎牛血清的25 cm2?培養瓶中，27℃溫育≥2 h。從含無血清完全培養液和重組蝕斑的1 ml 病毒貯液中取0.5
重組病毒的蛋白質分析實驗
實驗材料?Sf細胞試劑、試劑盒?胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制劑裂解緩沖液儀器、耗材?培養瓶培養箱離心機轉子水浴鍋實驗步驟 1.? 接種2.5×108 Sf9細胞于含5 ml 完全培養液/10%胎牛血清的25 cm2 培養瓶中，27℃溫育≥ 2 h。從含無血清完全培養液和重組蝕斑的1 ml
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA重組的載體3
在作為載體時，這些噬菌體有一個很大的優點，即克隆到M13mp載體的外源DNA片段（雙鏈），在子代噬菌體便成為了單鏈形式。故應用M13mp進行克隆，可方便地分離到大量含有外源DNA某一單鏈的DNA分子。這種單鏈DNA可在下列工作中作模板：①主要用作雙脫氧鏈終止法進行DNA序列測定的模板；②制備僅有一條
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA重組的載體2
二、噬菌體載體作為細菌寄生物的噬菌體，大多數具有編碼多種蛋白質的基因，能利用宿主細胞的蛋白質合成體系，進行生長和增殖。構建的噬菌體載體，以λ噬菌體、M13和粘粒最為常用。㈠ λ噬菌體載體野生型λDNA是一種基因組為4.8 kb的線性雙鏈DNA，全部序列已知，共編碼50多個基因。其中約一半基因參與
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA重組的載體1
載體（vector）是攜帶靶DNA（目的DNA）片段進入宿主細胞進行擴增和表達的運載工具。常用的載體是通過改造天然的細菌質粒、噬菌體和病毒等構建而成。目前已構建成的載體主要有質粒載體、噬菌體載體、病毒載體和人工染色體等多種類型，亦可根據其用途不同分為克隆載體和表達載體二類。載體的構建和選擇應考慮以下
生物反應器在病毒載體生產中的應用
摘要scale-X 生物反應器是一種新型固定床系統，可用于貼壁和懸浮細胞系的培養。設備單元占地小，而具有相當大的表面積，從而可獲得極高細胞密度。本研究比較了在scale-X hydro生物反應器和標準微載體培養體系中進行的貼壁Vero細胞培養。兩種系統可獲得相似的單位面積細胞濃度。隨后，
腺病毒系統使用指南（一）
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AAV病毒包裝CRO行業研究報告
基因療法是廣受關注的創新治療平臺，而作為遞送基因的有力手段，AAV載體平臺的研發也在出現指數型增長。AAV載體有非常顯著的優勢，如安全性、長效性、多種血清型等，這都使AAV載體在基因治療中迅速崛起。本篇行業研究從AAV載體概述、制備與質控、策略與應用、國內外企業等方面展開，詳細介紹了AAV病毒包裝C
干貨：腺相關病毒（AAV）技術快速入門手冊
腺相關病毒（AAV）作為一種安全、持久、高效、高特異性的基因操作工具，在生物學特別是神經生物學領域中被廣泛使用。許多新手對于AAV的使用往往是知其然而不知其所以然。這篇短文將以圖文結合的形式爭取讓大家在最短的時間內全面了解這種病毒工具。 什么是AAV？ 野生型AAV是一種復制缺陷型微