重組病毒的蛋白質分析實驗
實驗材料 Sf細胞試劑、試劑盒 胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制劑裂解緩沖液儀器、耗材 培養瓶培養箱離心機轉子水浴鍋實驗步驟 1. 接種2.5×108 Sf9細胞于含5 ml 完全培養液/10%胎牛血清的25 cm2 培養瓶中，27℃溫育≥ 2 h。從含無血清完全培養液和重組蝕斑的1 ml 病毒貯液中取0.5 ml 分別加入各個培養瓶。4℃保存剩余的0.5 ml 重組病毒，待以后用于蝕斑試驗。2. 培養瓶置27℃溫育4~5天，毎天檢查感染跡象。4~5天后，將培養液轉移至15 ml 離心管中，收獲病毒。 3. 于4℃1 000 g 離心10 min，將含有擴增病毒的上清轉移至一支無菌15 ml 聚丙烯離心管中。 4. 接種2.5×106 Sf9細胞于含5 ml 完全培養液/10%胎牛血清的25 cm2 培養瓶中。為每 ......閱讀全文
重組病毒的蛋白質分析實驗
實驗材料?Sf細胞試劑、試劑盒?胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制劑裂解緩沖液儀器、耗材?培養瓶培養箱離心機轉子水浴鍋實驗步驟 1.? 接種2.5×108 Sf9細胞于含5 ml 完全培養液/10%胎牛血清的25 cm2 培養瓶中，27℃溫育≥ 2 h。從含無血清完全培養液和重組蝕斑的1 ml
重組病毒的蛋白質分析實驗
實驗材料Sf細胞試劑、試劑盒胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制劑裂解緩沖液儀器、耗材培養瓶培養箱離心機轉子水浴鍋實驗步驟1. ?接種2.5x108?Sf9細胞于含5 ml 完全培養液/10%胎牛血清的25 cm2?培養瓶中，27℃溫育≥2 h。從含無血清完全培養液和重組蝕斑的1 ml 病毒貯液中取0.5
重組病毒噬斑篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 轉染細胞溶解產物 BS-C-1／HuTK-143B／BHK-21／CEF 貼壁生長匯片的細胞 試劑、試劑盒
重組病毒噬斑篩選實驗
實驗材料 轉染細胞溶解產物BS-C-1／HuTK-143B／BHK-21／CEF 貼壁生長匯片的細胞試劑、試劑盒 完全 2 × 噬斑培養基-5完全MEM-2.5培養基篩選試劑LMP 瓊脂糖溶液5-溴脫氧尿苷溶液中性紅溶液X-gal溶液X-gluc溶液干冰／乙醇儀器、耗材 6孔 35 mm 組織培養板
重組病毒噬斑篩選實驗
實驗材料轉染細胞溶解產物BS-C-1／HuTK-143B／BHK-21／CEF 貼壁生長匯片的細胞試劑、試劑盒完全 2 × 噬斑培養基-5完全MEM-2.5培養基篩選試劑LMP 瓊脂糖溶液5-溴脫氧尿苷溶液中性紅溶液X-gal溶液X-gluc溶液干冰／乙醇儀器、耗材6孔 35 mm 組織培養板杯狀超
重組桿狀病毒的純化實驗
實驗材料?桿狀病毒試劑、試劑盒?瓊脂牛血清儀器、耗材?培養瓶凍存管實驗步驟 1.? 制備病毒上清的系列稀釋液，該病毒上清獲得自在無血清完全培養液中轉染 pAC360β-gal DNA的細胞。在含150 μg/ml X-gal 的瓊脂糖頂層覆蓋物下病毒形成蝕斑。?2.? 當蝕斑形成后，用滅菌巴斯德吸管
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——重組蛋白的代謝標記
實驗方法原理由于重組蛋白表達的時候，宿主蛋白質的合成基本終止，因此體內代謝標記是檢測重組蛋白的敏感方法。所有的標記氨基酸都摻入到晚期病毒特異的蛋白質（包括目的蛋白）的合成。35S 標記的甲硫氨酸和半胱氨酸是常用的放射標記的氨基酸。為了獲得更好的結果，在標記之前細胞內的這兩種氨基酸應當被清除：將細胞在
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——重組蛋白大規模生產
實驗材料草地夜蛾細胞（Sf 9）高滴度重組病毒儀器、耗材無血清昆蟲細胞培養基1～10 L 旋轉培養瓶10.16 cm 管索張力器多旋轉瓶攬拌臺27℃ 培養箱供氣泵實驗步驟1. 在懸浮培養液中培養 Sf 9 細胞，并使之適應無血清培養液（基本方案 1）。2. 準備旋轉培養瓶，用于按比例擴增 Sf 9
重組腺相關病毒載體的生產實驗
瞬時轉染 293 細胞制備無腺病毒重組腺相關病毒載體實驗材料293組織培養細胞系pSub201質粒pXX2質粒pXX6質粒試劑、試劑盒完全DMEM 10%FBS培養基完全IMDM 10%FBS培養基CaCl2純DMEM 2%FBS 培養基干冰 乙醇浴硫酸銨飽和硫酸銨乙醇PBS儀器、耗材組織培養板—次
重組蛋白質的代謝標記實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑、試劑盒
重組蛋白質的大規模生產實驗
基本方案 堿處理法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 重組蛋白質 儀器、耗材
重組蛋白質的代謝標記實驗
由于重組蛋白質表達的時候，宿主蛋白質的合成基本終止，因此體內代謝標記是檢測重組蛋白質的敏感方法。實驗材料蛋白質試劑、試劑盒胎牛血清甲硫氨酸半胱氨酸儀器、耗材培養瓶離心機轉子實驗步驟1. ?接種2.5×106細胞于盛有4 ml 含10%胎牛血清的完全培養液的60 mm 肌組織培養皿中。對每一假定重組病
重組蛋白質的代謝標記實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 胎牛血清甲硫氨酸半胱氨酸儀器、耗材 培養瓶離心機轉子實驗步驟 1. ?接種2.5×106細胞于盛有4 ml 含10%胎牛血清的完全培養液的60 mm 肌組織培養皿中。對每一假定重組病毒分別準備一個平皿供感染用，并準備一個對照平皿供野生型桿狀病毒感染。于27℃溫育
裸眼篩選重組桿狀病毒實驗
實驗材料 桿狀病毒試劑、試劑盒 瓊脂糖儀器、耗材 解剖顯微鏡倒置顯微鏡實驗步驟 解剖顯微鏡下篩選?1. ?倒轉蝕斑平皿，使其處于顯微鏡的黑色背景下，以銳角向平皿照射一束亮光。2. ?檢查野生型病毒感染的細胞中含有包涵體的蝕斑，這種蝕斑看上去折光性強，帶有輕微的黃色。3. ?檢查β-gal 重組病毒感
裸眼篩選重組桿狀病毒實驗
桿狀病毒是一類在自然界中專一性感染節肢動物的DNA病毒，病毒粒子呈桿狀，基因組為雙鏈環狀DNA分子，DNA以超螺旋形式壓縮包裝在桿狀衣殼內，大小在90~180 Kb 之間。目前桿狀病毒作為高效、安全的無公害生物蟲劑廣泛應用于害蟲防治。實驗材料桿狀病毒試劑、試劑盒瓊脂糖儀器、耗材解剖顯微鏡倒置顯微鏡實
菌落－PCR－分析克隆的重組體實驗
菌落 PCR 分析克隆的重組體實驗試劑、試劑盒溴化乙錠Taq 延伸 PCR 添加劑Tween2010% 溶液dNTP 溶液PCR 緩沖液熱穩定 DNA 聚合酶引物儀器、耗材無菌槍頭瓊脂糖凝膠電泳設備和試劑實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑溴化乙錠Taq 延伸 PCR 添加劑（Stratagen
菌落－PCR－分析克隆的重組體實驗
試劑、試劑盒 溴化乙錠Taq 延伸 PCR 添加劑Tween2010% 溶液dNTP 溶液PCR 緩沖液 熱穩定 DNA 聚合酶引物儀器、耗材 無菌槍頭瓊脂糖凝膠電泳設備和試劑實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑溴化乙錠Taq 延伸 PCR 添加劑（Stratagene)Tween20，10%
菌落－PCR－分析克隆的重組體實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。使用載體上的通用引物，進行重組體的篩選或者DNA測序分析。最后的PCR產物大小是載體通用
重組蛋白質的定義
根據其定義，重組蛋白質的產生是應用了重組DNA或重組RNA的技術從而獲得的蛋白質。
重組蛋白質的大規模生產實驗——基本方案
蛋白質（protein）是生命的物質基礎，沒有蛋白質就沒有生命。因此，它是與生命及與各種形式的生命活動緊密聯系在一起的物質。實驗材料重組蛋白質儀器、耗材培養瓶過濾器實驗步驟1. ?在懸浮培養液中培養Sf9細胞，并使之適應無血清培養液。?2. ?準備旋轉培養瓶，用于按比例擴增Sf9細胞，將合適大小的兩
有絲分裂重組和隨機孢子分析實驗
實驗材料酵母菌株儀器、耗材YPD 平板無菌接種環實驗步驟展開
重組桿狀病毒的純化實驗——編碼β半乳糖苷酶
桿狀病毒是一類在自然界中專一性感染節肢動物的DNA病毒，可用于（1）作為基因工程病毒殺蟲劑 ,提高害蟲防治效率（2）作為超高效的真核基因表達載體 ,生產有用的工程蛋白（3）研究桿狀病毒基因組的結構與功能（4）研究真核基因表達的調控機制。實驗方法原理由于昆蟲桿狀病毒環狀雙鏈DNA基因組很大 (約 13
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗
基本方案 小規模表達 輔助方案1 蛋白質生產高峰期的確定 輔助方案2重組蛋白的代謝標記 基本方案2 重組蛋白大規模生產 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗
實驗方法原理 分析方案依賴于表達蛋白的天然特性。實驗材料 草地夜蛾（Sf9）細胞高滴度的重組桿狀病毒儲液試劑、試劑盒 PBS1×SDS樣品緩沖液儀器、耗材 含 10% 胎牛血清（FBS）的TNM-FH昆蟲培養基60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱（濕度可選）15 ml 聚丙烯離心管帶有 GH-3.7
蛋白質濃度分析實驗
BRADFORD分析（BIORAD)BCA分析(PIERCE)三氯乙醇沉淀實驗材料標準蛋白質 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒BSA ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
蛋白質濃度分析實驗
BRADFORD分析（BIORAD) BCA分析(PIERCE) 三氯乙醇沉淀 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 標準蛋白質
蛋白質的微量測序分析實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 凝膠緩沖液谷胱甘肽疏基乙酸考馬斯亮藍儀器、耗材 電泳儀微量注射器實驗步驟 1. ?制備分離膠和積層膠溶液灌制變性微型凝膠。?2. ?組裝垂直凝膠電泳裝置。?3. ?將80 ml 4×凝膠緩沖液稀釋至320 ml。將200 ml 1×凝膠緩沖 液倒入下層緩沖液槽。4. ?
蛋白質的微量測序分析實驗
本方案1 測定N-末端封閉蛋白質的內部序列 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑、試劑盒
蛋白質的微量測序分析實驗
基本方案1 測定N-末端封閉蛋白質的內部序列 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質
重組蛋白質的合成方法
其獲得途徑可以分為體外方法和體內方法。兩種方法的前提都是應用基因重組技術，獲得連接有可以翻譯成目的蛋白的基因片段的重組載體，之后將其轉入可以表達目的蛋白的宿主細胞從而表達特定的重組蛋白分子。當前主要應用的重組蛋白的表達載體包括原核細胞如大腸桿菌、真核細胞如酵母、昆蟲細胞以及CHO細胞等，重組蛋白的產