Western免疫印跡
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理 與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。二、試劑準備1、SDS-PAGE試劑:見電泳實驗。2、勻漿緩沖液：1.0......閱讀全文
Western免疫印跡
?Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理????與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝
Western－免疫印跡
實驗概要Western免疫印跡（Western ? Blotting）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。與Southern或Northern雜交方法類似，但Western ? Blot采用的是聚丙烯
蛋白質免疫印跡（Western－Blot，WB－）——Western印跡法
實驗材料蛋白質樣品試劑、試劑盒裂解液PBSG 250考馬斯亮藍溶液NaClSDS上樣緩沖液電泳緩沖液轉移緩沖液麗春紅染液封閉液TBSTTBS洗脫抗體緩沖液顯影液定影液抗體化學發光試劑儀器、耗材高壓鍋玻璃勻漿器高速離心機分光光度儀-20℃低溫冰箱垂直板電泳轉移裝置恒溫水浴搖床多用脫色搖床實驗步驟一、操
Western免疫印跡的原理
與Southern或Northern雜交方法類似，但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物
Western免疫印跡有哪些分類
western顯色的方法主要有以下幾種： i.放射自顯影 ii.底物化學發光ECL iii.底物熒光ECF iv.底物DAB呈色 現常用的有底物化學發光ECL和底物DAB呈色，體同水平和實驗條件的是用第一種方法，目前發表文章通常是用底物化學發光ECL。只要買現成的試劑盒就行，操作也比較
免疫印跡Western－bloting實驗原理
這種技術是把電泳分離的組分從凝膠轉移到一種固相支持體（NC、PVDF膜），并以特異性抗體作為探針檢測之。抗體與附著于固相支持體的靶蛋白所呈現的抗原表位發生特異性反應。這種技術的作用是對非放射性標記蛋白組成的復雜混合物中的某些特異蛋白進行定性、分析。材料（MATERIALS）：o? 試劑（REAGEN
免疫印跡Western－bloting實驗原理
免疫印跡Western bloting 這種技術是把電泳分離的組分從凝膠轉移到一種固相支持體（NC、PVDF膜），并以特異性抗體作為探針檢測之。抗體與附著于固相支持體的靶蛋白所呈現的抗原表位發生特異性反應。這種技術的作用是對非放射性標記蛋白組成的復雜混合物中的某些特異蛋白進行定性、分析。
Western免疫印跡（Western－Blot）實驗原理和主要試劑
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。實驗原理與Southern或 Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電
電泳做Western免疫印跡操作步驟
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。1、原理與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠
Western－blotting電泳免疫印跡簡單原理
免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。Western Blot是檢測單一細胞蛋白表達量最好的方法；若要對表達蛋白進行細胞定位，confocal應是首選的方
Western印跡法
這種技術是把電泳分離的組分從凝膠轉移到一種固相支持體，并以針對特定氨基酸序列的特異性試劑作為探針檢測之。Western使用的探針是抗體，它與附著于固相支持體的靶蛋白所呈現的抗原表位發生特異性反應。這種技術的作用是對非放射性標記蛋白組成的復雜混合物中的某些特異蛋白進行鑒別和鑒定。儀器：高壓鍋、玻璃勻漿
蛋白質免疫印跡（Western－Blot－）（一）
蛋白質免疫印跡（Western Blot ）可以：（1）從蛋白質混合物中檢出目標蛋白質；（2）定量或定性確定細胞或組織中蛋白質的表達情況；（3）用于蛋白質-蛋白質、蛋白質-DNA、蛋白質-RNA相互作用后續分析。實驗方法底物化學發光ECL法Western印跡法圖解實驗方法原理Western免疫印跡（
蛋白質免疫印跡（Western－Blot，WB－）
蛋白質免疫印跡（Western Blot ）?? ?可以：（1）從蛋白質混合物中檢出目標蛋白質；（2）定量或定性確定細胞或組織中蛋白質的表達情況；（3）用于蛋白質-蛋白質、蛋白質-DNA、蛋白質-RNA相互作用后續分析。實驗方法原理：? ? Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白
蛋白質免疫印跡（Western－Blot，WB－）
實驗方法原理 Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測的方法。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺
Western－免疫印跡實驗原理和操作步驟
[實驗原理]Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠
蛋白質免疫印跡（Western－Blot－）（三）
四、SDS－PAGE電泳?1. ?清洗玻璃板?一只手扣緊玻璃板，另一只手蘸點洗衣粉輕輕擦洗。兩面都擦洗過后用自來水沖，再用蒸餾水沖洗干凈后立在筐里晾干。?2. ?灌膠與上樣?（1）玻璃板對齊后放入夾中卡緊。然后垂直卡在架子上準備灌膠。（操作時要使兩玻璃對齊，以免漏膠。）?（2）按前面方法配10%分離
免疫印跡試驗（western－blot）異常結果分析
? ? ? ? ?? 蛋白質印跡是一種非常適用于蛋白質檢測的技術，因為它允許用戶量化蛋白質表達。本文主要介紹一些該技術結果異常的排除方法。因為研究人員試圖獲得一種非特異性但強烈的信號，蛋白質印跡可以被視為一種錯綜復雜的平衡。即使蛋白質印跡的程序很簡單，也會出現許多問題，導
蛋白質免疫印跡（Western－Blot－）（二）
二、蛋白樣品制備?1. ? 單層貼壁細胞總蛋白的提取?（1） 倒掉培養液，并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養液（或將瓶直立放置一會兒使殘余培養液流到瓶底然后再用移液器將其吸走）。?（2）?每瓶細胞加3 ml 4℃預冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放輕輕搖動1 min洗滌細胞，然后棄
蛋白質免疫印跡（Western－Blot，WB－）
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 Western免疫印跡，是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測的方法。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。 與Southern或Northern雜交方法類似，但We
免疫印跡（Western－Blot）常見問題及建議
? ? ? ? ? 問題? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 可能原因? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 建議電泳條帶成笑臉狀膠不均勻冷切，中間冷卻不好，電泳系統溫度偏高減少電壓減慢電泳速度，在冷室或者冰浴中進行電泳電泳條帶成皺眉狀可能是由于裝置不合適，特別可能是凝膠和玻璃
Western－Blot(免疫印跡法)實驗方法步驟
Western Blot(免疫印跡法)主要包括以下4個基本步驟：n?????樣品制備n??? ?電泳分離n??? ?蛋白的膜轉移n??? ?免疫雜交與顯色――蛋白檢測溶液和試劑n??? 1X 磷酸鹽緩沖液(PBS)n??? Modified RIPA bufferTris-HCl: 50 mM, p
免疫印跡（Western－Blotting）實驗的樣品制備介紹
對于Western Blotting實驗而言,樣品處理是關鍵步驟之一,獲得的蛋白樣品必須均質、可溶,并解離成單個多肽亞基,且盡量減少相互間的聚集,使其最終僅依賴本身的分子量大小進行分離。當目標蛋白的含量很低時,需要選取目標蛋白含量較高的組織或細胞器(如核抽提物),或者通過免疫沉淀等方式進行富集。通常
蛋白質免疫印跡（Western－Blot，WB－）——圖解
實驗材料蛋白質樣品試劑、試劑盒裂解液PBSSDS上樣緩沖液電泳緩沖液轉移緩沖液麗春紅染液TBSTTBS洗脫抗體緩沖液抗體儀器、耗材電泳儀移液器脫色搖床顯影儀實驗步驟一、實驗步驟↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓展開
免疫印跡（Western－Blot）不同蛋白的轉膜條件
蛋白來源:RAW264.7 總蛋白蛋白名稱:一些轉錄因子蛋白分子量:40~70 KDWB 用膜類型、孔徑:0.45 NC轉膜方式(恒壓、恒流):濕轉 恒流 400 mA轉膜時間:60~90 minPS. 其實吧,以我的經驗來看,除非目的蛋白特別小,或者特別大,不然轉膜時間真的不是那么重要, 曾經因為
免疫印跡（Western－blotting）實驗原理、試劑和操作步驟
(一)原理Western blot是一種在PVDF或硝酸纖維素（NC）膜上進行的抗原抗體反應。蛋白電泳后，將蛋白轉移至膜上，再與特異性抗體孵育，洗去游離的抗體，然后和酶標記的二抗孵育，再進行底物顯色。由于抗原抗體反應特異性好，親合力高，Western blot檢測的靈敏度較高，尤其是采用
Western印跡法檢測蛋白
實驗概要Western印跡法檢測蛋白的敏感性約為1-5ng，0.75mm厚的SDS-PAGE板的一個孔可上總蛋白量約為100μg，所以只要被檢蛋白不低于總蛋白量的萬分之一，即可被檢測出來。如果所分析的樣品為未知時，應同時作陽性對照。雜交技術主要有NC膜的封閉，靶蛋白與第一抗體的反應，結合靶蛋白的一抗
Western印跡法檢測蛋白
實驗概要Western印跡法檢測蛋白的敏感性約為1-5ng，0.75mm厚的SDS-PAGE板的一個孔可上總蛋白量約為100μg，所以只要被檢蛋白不低于總蛋白量的萬分之一，即可被檢測出來。如果所分析的樣品為未知時，應同時作陽性對照。雜交技術主要有NC膜的封閉，靶蛋白與第一抗體的反應，結合靶蛋白的一抗
什么是western印跡技術
蛋白質經單向電泳后分離后被轉移到硝酸纖維濾膜上，然后用放射性或酶標記的特異抗體來檢測相應抗原的存在。蛋白質印跡技術是1975年Southern建立了Southern印跡法后，人們用類似的方法對蛋白質進行印跡分析，稱為Western印跡法。Western印跡法是將獲得的蛋白質樣品通過SDS-聚丙烯酰胺
組織印跡的Western雜交
組織印跡的Western雜交 在硝酸纖維素膜上制備組織印跡 1．在塑料板上放置兩層Whatman 1號濾紙，在濾紙上方放上一張普通紙，然后鋪上一層硝酸纖維素膜。 2．用雙面刀片從植物組織如大豆的莖上切取一塊切片（厚度約為 1mm）。如果組織表面是濕的，則在Kimwipes紙上輕輕吸干