HLA基因分型方法：PCR－SSP法
PCR－SSP法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR擴增操作方法基本同PCR-RFLP，但引物是根據各等位基因的核苷酸序列設計的特異性引物，主要是針對第二外顯子區域的多態性，用SSP擴增出來的產物具等位基因特異性。 3）凝膠電泳取PCR擴增的產物與上樣緩沖液混合，加入2％瓊脂糖凝膠加樣孔中，其內加入溴化乙錠，在電壓15V/cm凝膠條件下電泳20min，然后在紫外燈下照相分析結果。......閱讀全文
HLA基因分型方法：PCR－SSP法
PCR－SSP法1）提取DNA同前RFLP法?2）PCR擴增操作方法基本同PCR-RFLP，但引物是根據各等位基因的核苷酸序列設計的特異性引物，主要是針對第二外顯子區域的多態性，用SSP擴增出來的產物具等位基因特異性。?3）凝膠電泳取PCR擴增的產物與上樣緩沖液混合，加入2％瓊脂糖凝膠加樣孔中，其內
HLA基因分型方法：RFLP法
RFLP法1）常規制備DNA鹽析法1．用淋巴細胞分離液從抗凝血中分離出白細胞。2．每3ml細胞懸液加10ml紅細胞裂解液溶解紅細胞兩次，再加2ml白細胞裂解液溶解白細胞。3．加50μl 10％?SDS和70μl蛋白酶K消化蛋白質，37℃過夜或55℃?3h。4．加0.25體積飽和醋酸鈉溶液，劇烈搖動1
HLA基因分型方法：PCR－RFLP法
PCR－RFLP法1）提取細胞總DNA方法同前。?2）PCR擴增引物的設計1．引物長度一般為15～30bp，G＋C含量應在45％～55％之間。2．應避免連續出現4個以上的單一堿基。3．不能含有自身互補序列。4．兩個引物之間不應有多于4個的互補或同源堿基，不然會形成引物二聚體。5．與非特異擴增序列的同
HLA基因分型方法：PCR－SSCP法
PCR－SSCP法1）提取DNA同前RFLP法?2）PCR擴增同前PCR-RFLP，也可加入1μCi32P-dCTP標記產物。?3）非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳1．取PCR的擴增產物，加凝膠加樣液3μl，95℃加熱變性2min，冰浴驟冷。同位素摻入的DNA取1μl稀釋10倍，加樣3μl。2．取樣品用微量
HLA分型方法
1.淋巴細胞毒試驗 為HLA抗原分型常用方法。2.混合淋巴細胞培養試驗本方法多用于組織相容性方面的研究，臨床上主要用于器官移植。3.分子生物學技術一類是PCR為基礎的基因分型。另一類是以測序為基礎的基因分型。
HLA基因分型方法：PCR－指紋圖法
PCR－指紋圖法1）提取DNA同前RFLP法?2）PCR擴增同前PCR-RFLP法?3）凝膠電泳取PCR產物10μl，加2μl的6×上樣緩沖液，經12％聚丙烯酰胺凝膠電泳，200V，2～3h。再用溴化乙錠染色30min，照相分析結果。
HLA分型的方法
①淋巴細胞毒試驗：為HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴細胞膜上的HLA抗原與相應抗體結合后，在補體作用下，細胞膜損傷，細胞溶解破裂被染色，計算顯微鏡下觀察著色細胞的百分率（＞20%為陽性反應）。Ⅰ類抗原分型時可用T淋巴細胞或外周血淋巴細胞；進行Ⅱ類抗原分型時需用B淋巴細胞。②混合淋巴細胞培養試驗：多
HLA的分型方法
HLA的分型方法是檢驗主管技師考試要求掌握的內容，醫學教育網搜集整理相關內容供大家參考。 1.淋巴細胞毒試驗：為HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴細胞膜上的HLA抗原與相應抗體結合后，在補體作用下，細胞膜損傷，細胞溶解破裂被染色，計算顯微鏡下觀察著色細胞的百分率（>20%為陽性反應）。Ⅰ類抗原
HLA細胞法分型試驗簡介
HLA-D和DP位點的抗原須用細胞法分型進行鑒定，所以又稱LD抗原（lymphocytedefinedantigen），其鑒定方法普遍采用混合淋巴細胞培養（mixedlymphocyteculture，MLC），也稱混合淋巴細胞反應（mixedlymphocytereaction，MLR）。1.試驗
HLA細胞法分型試驗簡介
HLA-D和DP位點的抗原須用細胞法分型進行鑒定，所以又稱LD抗原（lymphocytedefinedantigen），其鑒定方法普遍采用混合淋巴細胞培養（mixedlymphocyteculture，MLC），也稱混合淋巴細胞反應（mixedlymphocytereaction，MLR）。
HLA細胞法分型試驗介紹
HLA細胞法分型試驗介紹： HLA-D和DP位點的抗原須用細胞法分型進行鑒定，所以又稱LD抗原，其鑒定方法普遍采用混合淋巴細胞培養，也稱混合淋巴細胞反應。 1.試驗方法將分離的反應細胞（通常是患者的淋巴細胞）與刺激細胞（通常是供者或已知的標準淋巴細胞）配制成1×106/ml濃度的懸液，各加0.
HLA細胞法分型試驗介紹
HLA細胞法分型試驗介紹：HLA-D和DP位點的抗原須用細胞法分型進行鑒定，所以又稱LD抗原，其鑒定方法普遍采用混合淋巴細胞培養，也稱混合淋巴細胞反應。1.試驗方法將分離的反應細胞（通常是患者的淋巴細胞）與刺激細胞（通常是供者或已知的標準淋巴細胞）配制成1×106/ml濃度的懸液，各加0.2ml到反
HLA有哪些分型方法？
①淋巴細胞毒試驗：為HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴細胞膜上的HLA抗原與相應抗體結合后，在補體作用下，細胞膜損傷，細胞溶解破裂被染色，計算顯微鏡下觀察著色細胞的百分率(>20%為陽性反應)。Ⅰ類抗原分型時可用T淋巴細胞或外周血淋巴細胞；進行Ⅱ類抗原分型時需用B淋巴細胞。②混合淋巴細胞培養試驗：多
關于HLA分型的DNA分型方法介紹
DNA分型主要分為兩種方法：基于核酸序列識別的方法和基于序列分子構型的方法，常用的方法大致可分為大類： ①限制性片段長度多態性分析(restriction fragment length polymorphism，RFP)。其原理是不同的DNA膜板山于序列的差異在限制性內切酶作用下將被切成大小
HLA分型技術
HLA分型技術主要組織相容性復合物（MHC）是脊椎動物體內最復雜且具有高度多態性的基因群。1984年George Snell 首次發現小鼠MHC即H－2，1958年Dausset 發現了人的MHC即HLA基因。MHC的表達產物稱為主要組織相容性抗原，MHC抗原是有核細胞表面膜蛋白分子，對抗原遞呈和免
HLA的分型方法有什么？
①淋巴細胞毒試驗：為HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴細胞膜上的HLA抗原與相應抗體結合后，在補體作用下，細胞膜損傷，細胞溶解破裂被染色，計算顯微鏡下觀察著色細胞的百分率（>20%為陽性反應）。Ⅰ類抗原分型時可用T淋巴細胞或外周血淋巴細胞；進行Ⅱ類抗原分型時需用B淋巴細胞。 ②混合淋巴細胞培養
HLA基因分型方法：PCR－SSO（ASO）探針法
PCR－SSO（ASO）探針法1）常規提取DNA參見RFLP法?2）PCR擴增參見PCR-RFLP法?3）斑點雜交1．將5～20μl擴增產物，加變性液100～200μl室溫處理5～15min。2．在尼龍濾膜（預先用2×SSC浸濕2min）上真空點樣，每孔以10×SSPE 200μl沖洗，抽干，80℃
HLA分型技術（二）
? （二)PCR/SSO技術 此法乃用人工合成的HLA型別特異的寡核苷酸序列作為探針，與待檢細胞經PCR擴增的HLA基因片段雜交，從而確定HLA型別，PCR技術可將HLA復合體上指定基因片段特異性地擴增5～6個數量級；而專門設計的SSO（序列特異的寡核苷酸sequencedpecific ol
HLA分型技術（一）
? HLA分型并不只是一種應用性的臨床檢測指標，免疫遺傳學研究的發展，很大程度上依賴于以分型為主要手段的HLA多態性分析。60年代建立的并不斷完善的血清學及細胞學分型技術主要側重于分析HLA產物特異性；80年代起建立的DNA分型方法則側重于基因的分型。 一、血清學分型技術 （一)HLA-Ⅰ類抗原
HLA分型的常用方法有哪些？
1.分子生物學技術： 一類是PCR為基礎的基因分型，一類是以測序為基礎的基因分型。2.淋巴細胞毒試驗： 為HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴細胞膜上的HLA抗原與相應抗體結合后，在補體作用下，細胞膜損傷，細胞溶解破裂被染色，計算顯微鏡下觀察著色細胞的百分率（＞20%為陽性反應）。Ⅰ類抗原分型時可用T
sbt做hla基因分型分析怎么做
sbt做hla基因分型分析怎么做HLA系統研究從70年代到80年代末期主要是血清學研究；90年代以來，HLA進入了分子水平研究階段。HLA分型技術同樣走過了這一歷程。建立于60年代的血清學及細胞學分型技術主要側重于分析HLA產物特異性。1991年第11屆國際HLA專題討論上提出了HLA的DNA分型方
HLA分型的血清學方法介紹
1964Terasaki建立了HLA微量淋巴胞毒實驗方法來分析受試者的HLA型別，其主要過程是從全血或淋巴組織中分離出淋巴細胞，與HLA-特異性抗體包被的微孔板孵育，加入補體，使能與淋巴細胞表面HA抗原結合的特異性抗體通過經典途徑激活補體，導致靶細胞水解(淋巴細胞毒性)。多年來這種血清學方法是確
關于HLA分型高分辨分型應用的介紹
1、地中海貧血治療 2、造血干細胞移植異基因造血干細胞移植是現能根治重型Β地貧的方法。如有HLA相配的造血干細胞供者，應作為治療重型Β地貧的首選方法。 3、急性白血病，骨髓移植。 4、對ANLL療效較好。 ①同基因骨髓移植，供者為同卵孿生子。 ②同種異基因骨髓移植，供者為患者的兄弟姐妹
PCRSSP在造血干細胞移植配型中的應用
人類白細胞抗原(HLA)系統是一組組成和結構都非常復雜的基因復合體。HLA分型首先采用血清學方法，現在DNA分型是常規方法。我們采用序列特異性引物(PCR-SSP)技術對HLA-Ⅰ類基因進行分型，現報告如下。? 1? 材料與方法? 1.1? 樣本?? 青島地區擬進行造血干細胞移植的20例惡
關于HLA基因復合體的分型技術介紹
HLAⅠ類抗原的DQ、DR用血清學檢測法進行分型，因此在方法學上稱為血清學鑒定的抗原（serologicallydefinedantigen，SD抗原）；DP和D特性需用細胞學方法進行檢測，因此稱為淋巴細胞鑒定的抗原（lymphocytedefinedantigen，LD抗原）。雖然HLA的基因
PCRSSP法在HLAB27檢測中的應用
摘要 應用序列特異引物聚合酶鏈反應（PCR-SSP）技術對181例臨床標本進行HLA-B27檢測，同時作血清學試驗。結果：PCR方法和血清學方法分析結果基本相符，PCR分型無假陽性及假陰性，血清學方法1例假陽性及1例假陰性，表明PCR方法靈敏度高、特異性好、準確、較之血清學方法更適合于臨床。 關健
PCRSSP法在HLAB27檢測中的應用
人類白細胞抗原B27（HLA-B27），是診斷強直性脊柱炎的指標之一，對強直性脊柱炎的早期診斷和預后以及對類風濕關節炎的鑒別診斷起著極其重要的作用。以前國內大多采用血清學方法對HLA-B27進行檢測，近來國內外有報道應用PCR技術對HLA-B27進行檢測，具有簡便快速，靈敏度高，特異性好，準確等特點
基因芯片技術在腎移植組織配型中的應用
為了比較基因芯片和特異性聚合酶鏈反應(PCR-SSP)兩種HLA-DR分型方法，探討適用于腎移植供、受者分型的新方法。研究者對60份腎移植供、受者的DNA樣本同時采用基因芯片和PCR-SSP進行HLA-DR分型，并進行分析比較。結果60例樣本的兩種分型方法結果完全一致56份，相同率達93%。結果不相
PCRSSP法在HLAB27檢測中的應用
人類白細胞抗原B27（HLA-B27），是診斷強直性脊柱炎的指標之一，對強直性脊柱炎的早期診斷和預后以及對類風濕關節炎的鑒別診斷起著極其重要的作用。以前國內大多采用血清學方法對HLA-B27進行檢測，近來國內外有報道應用PCR技術對HLA-B27進行檢測，具有簡便快速，靈敏度高，特異性好，準確等特點
HLAB27檢測方法的分析與對比
王向東江蘇南通良春中醫醫院隨著網絡及媒體的發展，強直性脊柱炎（AS）也越來越多地出現在我們的視野中。從一些著名的演藝明星，到一些普通的患者，都在經歷著病痛的折磨。HLA-B27（人類白細胞抗原B27），是強直性脊柱炎（AS）實驗室檢查的重要指標，在強直性脊柱炎患者中陽性率高達90%。今天，我們從檢驗