ICC用細胞抗原的制備
一、材料和試劑1、0.01M PBS(pH7.4)： NaCl 8.0g； KCl 0.2g； Na2HPO4 1.44g； KH2PO4 0.24g； ddH2O至1000ml ； 高壓滅菌,分裝。2、0.25%胰酶：稱取EDTA 0.02g NaCl 0.8g KCl 0.04g 加三蒸水100ml溶解后加0.25g 胰酶,輕輕攪動,使胰酶溶解,不要產生泡沫,加酚紅少許,調PH值到8.2-8.6,過濾除菌,分裝10ml/管,-20℃保存,臨用前預溫到37℃。3、誘導液(TPA)：12-鄰-十四酰-佛波醇-13-乙酸酯(12-O-tetradecanoyl-phorbol-13-acetate,TPA)溶于丙酮，配成20mg/ml。 ......閱讀全文
免疫酶細胞化學實驗技術
免疫酶細胞化學免疫酶細胞化學是免疫細胞化學（Immunocytochemistry,ICC）中最常用的方法之一，它是在抗原抗體特異反應存在的前提條件下，借助于酶細胞化學的手段，檢測某種物質（抗原/抗體）在組織細胞內存在部位的一門新技術：即預先將抗體與酶連結，再使其與組織內特異抗原反應，經細胞化學染色
抗原呈遞細胞的外源性抗原
外源性抗原經吞噬或吞飲作用，被APC攝入胞內形成吞噬體，后者與溶酶體融合形成吞噬溶酶體。抗原在吞噬溶酶體內酸性環境中被蛋白水解酶降解為小分子多肽，其中具有免疫原性的稱為抗原肽。內質網中合成的MHC-Ⅱ類分子進入高爾基體后，由分泌小泡攜帶，通過與吞噬溶酶體融合，使抗原肽與小泡內MHC-Ⅱ類分子結合
IHC全攻略2：如何制備樣品
對于每一項IHC/ICC研究，組織和細胞樣本的制備都不可掉以輕心。為了方便孵育，整個組織必須被切成超薄(5-10 μm)的切片，或切成小塊用于整體免疫組化(whole mount IHC)。對于ICC實驗，在開始染色步驟之前，細胞必須附著在顯微鏡載玻片或蓋玻片上。樣本制備也與固定方法密切
抗原特異性T細胞克隆的制備——間歇循環刺激法
實驗概要本實驗利用間歇循環刺激法制備了抗原特異性T細胞克隆。實驗原理間歇循環刺激法是制備抗原特異性T細胞克隆的傳統方法，原理是經抗原間隔刺激多個循環。主要試劑1. 含10％人AB型血清的完全RPMI 1640培養液。主要設備1.?24孔培養板；2.?CO2?溫箱；3.?高速離心機；4.?96孔板；5
抗原與免疫血清的制備實驗
將抗原注射于動物體，可刺激動物的 B 淋巴細胞轉化為漿細胞而產生特異性抗體，待動物血清中累積大量抗體時，采集其血液，分離析出血清，此即含抗體的免疫血清，或稱抗血清。制備特異性強、效價高的免疫血清對于微生物的鑒定，傳染病的診斷與治療，抗原分析，免疫球蛋白的鑒定及其他蛋白質的鑒定與研究均有很大的用途。
抗原和免疫血清的制備實驗
實驗材料 家兔試劑、試劑盒 普通培養基甲醛鹽水石灰酸鹽水生理鹽水儀器、耗材 標準比濁管離心機實驗步驟 1. 抗原的制備：標準菌株的選擇：所用的菌種傷寒桿菌H901和傷寒桿菌O901應具有典型形態菌落及生化反應。在生理鹽水中不發生自身凝集，與特異血清有高度凝集者可作為菌種。2. 菌液的制備（1）原液制
抗原與免疫血清的制備實驗
將抗原注射于動物體，可刺激動物的 B 淋巴細胞轉化為漿細胞而產生特異性抗體，待動物血清中累積大量抗體時，采集其血液，分離析出血清，此即含抗體的免疫血清，或稱抗血清。制備特異性強、效價高的免疫血清對于微生物的鑒定，傳染病的診斷與治療，抗原分析，免疫球蛋白的鑒定及其他蛋白質的鑒定與研究均有很大的用途。實
大腸桿菌O抗原，傷寒桿菌O抗原等的制備
大腸菌群并非細菌學分類命名，而是衛生細菌領域的用語，它不代表某一個或某一屬細菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關的細菌，這些細菌在生化及血清學方面并非完全一致，其定義為：需氧及兼性厭氧、在37℃能分解乳糖產酸產氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。一般認為該菌群細菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產氣克
首次用干細胞制備人類心臟早期發育模型
近期，加州大學伯克利分校的研究人員，與Gladstone研究所的科學家合作，開發出一種模板，利用干細胞制備跳動的心臟組織，從而創建了一種系統，可以作為早期心臟發育模型，以及讓懷孕更安全的一種藥物篩選工具。延伸閱讀：PNAS：多能干細胞來源的體外心臟組織模型。 相關研究結果發表在七月十四日的《N
間歇循環刺激法制備抗原特異性T細胞克隆
間歇循環刺激法 是制備抗原特異性T細胞克隆的傳統方法，即經抗原間隔刺激多個循環。[材料和試劑]（1）抗原致敏供者的單個核細胞(MNC)和經過3300rad照射的自身MNC（2）抗原（3）含10％人AB型血清的完全RPMI 1640培養液（4）細胞分離及T細胞培養增殖所需的其他試劑和器材。[操作步驟
免疫組化實驗方法
一、免疫組化（Immunohistochemistry,IHC/ Immunocytochemistry, ICC）原理免疫組化是應用免疫學基本原理--抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑 （熒光素、酶、金屬離子、同位素） 顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質
人工抗原的制備是什么樣的
半抗原與載體蛋白的耦聯物稱之為人工抗原。載體不僅是簡單地增加半抗原的分子質量，更重要的是利用其強的免疫原性誘導機體產生免疫應答，對半抗原發生載體效應的作用。蛋白質結構越復雜，免疫原性越好。常用的載體蛋白有牛血清白蛋白（BSA）、卵清蛋白（OVA）、兔血清白蛋白（RSA）、人血清白蛋白（HSA）、人γ
免疫細胞：抗原遞呈細胞
1.抗原遞呈細胞的概念 在機體的免疫應答過程中，能攝取、加工、處理抗原并將抗原信息提呈給T淋巴細胞的輔佐細胞，稱為 抗原提呈細胞（APC）。 2.抗原遞呈細胞的種類 抗原提呈細胞分專職性遞呈細胞和非專職性遞呈細胞兩類。單核/巨噬細胞、樹突狀細胞（DC）和B淋巴細胞等能表達MHC Ⅱ類分子的
抗原遞呈細胞的功能
1抗原遞呈作用 將病原體等大顆粒攝入胞內，經處理后把抗原表達于細胞表面，激發免疫應答。 2吞噬作用 主要是單核吞噬細胞系統和樹突狀細胞，在細胞內將依靠酶殺滅病原體。 3免疫調節 （1）正向調節 IL-1,IL-6,IL-8,IL-12，TNF-α等介導免疫細胞的活化，增殖并產生免疫效
抗原遞呈細胞的分類
1 專職抗原提呈細胞：單核吞噬細胞系統、樹突狀細胞。 2 非專職抗原提呈細胞：包括血管內皮細胞、上皮細胞、間質細胞、皮膚成纖維細胞、活化的T細胞等，通常與炎癥反應的發生和某些自身免疫性疾病的發病機制有關。 3 機體有核細胞 能將內源性蛋白抗原降解成多肽片段，多肽片段與MHC-1類分子結合為復
抗原特異性T細胞克隆制備實驗——間歇循環刺激法
實驗方法原理T淋巴細胞來源于骨髓的多能干細胞（胚胎期則來源于卵黃囊和肝）。在人體胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干細胞或前T細胞遷移到胸腺內，在胸腺激素的誘導下分化成熟，成為具有免疫活性的T細胞。實驗材料MNC抗原試劑、試劑盒RPMI 1640培養液儀器、耗材24孔培養板37℃恒溫箱96孔培養板實
抗原和免疫血清的制備實驗——抗人血清抗體的制備
實驗材料家兔試劑、試劑盒羊毛脂石蠟油卡介苗生理鹽水儀器、耗材研缽離心機培養箱實驗步驟1. ?弗氏佐劑的制備將羊毛脂與石蠟油按1：5比例混合，高壓滅菌。2. ?人血清—弗氏完全的制備將滅菌佐劑一份置研缽中，邊研磨邊滴加等量的含卡介苗3—4毫克/毫升的抗原液，使成油色水乳劑，研磨要充分，使乳劑滴入冰水中
可溶性抗原的制備及鑒定2
1、超速離心法?此法分離和純化抗原的原理是利用各顆粒在梯度液中沉降速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度梯度層內，達到彼此分離的目的。常用的密度梯度介質有蔗糖、甘油、CsCl等。?用超速離心或梯度密度離心分離和純化抗原時，除個別成分外，極難將某一抗原成分分離出來，故只用于少數大分子抗原的分
半抗原性免疫原的制備
半抗原指只具有抗原性而無免疫原性的物質。多見于分子量小于4000的有機物質。半抗原與載體相結合具有免疫原性。（一）載體1.?蛋白質：以牛血白蛋白最常見。2.?多肽聚合物：常用多聚賴氨酸。3.?大分子聚合物和某些顆粒。（二）半抗原與載體的連接方法1.?物理方法：通過電荷和微孔吸附半抗原。2.?化學方法
可溶性抗原的制備及鑒定1
蛋白質、糖蛋白、脂蛋白、酶類、補體、脂多糖、細菌外毒素和核酸等均為可溶性抗原，它們有相當部分來源于組織和細胞，成分復雜。制備這類免疫原時，首先須將組織和細胞破碎，然后再從組織和細胞勻漿中提取目的蛋白或其他抗原，提純的抗原需鑒定后才能用做免疫原。?一、組織勻漿的制備?用于制備免疫原的材料必須是新鮮或低
實驗選多肽還是蛋白作為抗原更加合適？
1.實驗過程中蛋白處于天然狀態，這時使用的抗體識別的一般是蛋白的構象表位和線性表位；這樣的實驗主要有CO-IP、FACS、Neutralizing/Blocking以及Elisa法檢測天然蛋白等。2.實驗過程中蛋白處于變性或半變性狀態，這時大部分的構象表位已被破壞，抗體識別的一般都是線性表位；這樣的
抗肽的抗血清制備及從多肽庫篩選B細胞和T細胞抗原表位
使用雙功能團試劑將合成肽偶聯至載體蛋白實驗步驟基 本 方 案 使用雙功能團試劑將合成肽偶聯至載體蛋白材 料家兔肽-載體的連接體（單 元 13. 1)P B S , p H 7. 5弗 氏 完 全 佐 劑（F C A ; Pierce Biotechnology)弗氏不完全佐劑1 . 收 集 血 樣（
抗肽的抗血清制備及從多肽庫篩選B細胞和T細胞抗原表位
采用合成肽組合庫鑒定 B 細 胞 和 T 細胞的表位實驗步驟?基 本 方 案 1 采 用 PS-SCL 篩選抗體抑制劑材 料肽或蛋白質抗原目的抗原的單克隆抗體（M A b )1 % (m/V) BS A / P B S (見附錄 1PBS)六 肽 的 PS-SCL ( 表 13. 3.1): 5 m
抗原呈遞細胞的內源性抗原
內源性抗原是指細胞自身合成的抗原，如腫瘤抗原和病毒蛋白抗原等。內源性抗原在細胞內生成后，可被存在于胞質中的蛋白酶體，即小分子聚合多肽體（LMP）降解成小分子多肽；小分子多肽與熱休克蛋白70/90在胞質內結合后，經抗原肽轉運體（TAP）轉運到內質網中，通過加工修飾成為具有免疫原性的抗原肽；抗原肽與
抗原呈遞細胞的抗原呈遞作用
? 細胞在其表面以能被T細胞受體（TcR)特異性識別的方式表達抗原的過程稱為抗原呈遞。APC以MHC-Ⅱ分子限制的方式將抗原遞給輔助性T細胞（TH)；各種靶細胞心以MHC-Ⅰ限制的方式將抗原呈遞給細胞毒性T細胞（TC)。APC的抗原呈遞作用是一個涉及抗原攝取、處理與呈遞的復雜過程。各類APC呈遞抗原
免疫細胞抗原提呈細胞
（一）抗原提呈細胞的概念 抗原提呈細胞（APC）指能夠攝取、加工處理抗原，并將抗原信息以和MHC分子結合形式提呈給T細胞的一類細胞。T細胞不能識別游離抗原，只能識別被APC加工提呈并與MHC分子結合的抗原肽。樹突細胞和單核-巨噬細胞能夠通過MHC Ⅱ分子提呈外源性抗原肽，被稱為專職APC，所有有
免疫酶細胞化學實驗技術4
三、ICC在細胞功能研究中的應用 形態學研究目的之一是揭示組織細胞結構特征及其功能意義。利用ICC顯示給與細胞增殖標記物，是組織細胞學研究中形態和功能相結合的重要手段之一。目前常用的細胞增殖標記物有4種，Brdu (5—bromo—2--deoxyuridine), DNA polymerase
抗原遞呈細胞之激活的巨噬細胞
巨噬細胞也是守衛機體暴露于外界部位的哨兵細胞。它們是適應能力非常強的細胞,根據所接受的來自其定居微環境的信號而具有多種功能,如垃圾收集、 抗原提呈或強大的殺傷功能。在靜息狀態,巨噬細胞擅于清理保潔,而不十分擅于提呈抗原,這是因為巨噬細胞只有被戰斗性細胞因子如 IFN-γ等激活后,才表達足夠水平的 M
挑戰教條－用非卵細胞制備胚胎并誕健康小鼠
最近，科學家們首次用非卵細胞制備出了動物胚胎，這一發現對于過去兩個世紀的教條觀念提出了挑戰。 卵子可以被“誘騙”發展成一個胚胎，無需受精，但由此產生的胚胎——稱為孤雌囊胚，在幾天后會死亡，因為沒有發生關鍵的發育過程，而這些過程需要來自精子的信息。 然而，來自英國巴斯大學生物與生物化學系的科學
抗原抗體反應的人單克隆抗體的制備
小鼠的單克隆抗體蛋白應用于人體后，作為抗原能引起人的免疫應答，大大降低其生物活性，并可能導致變態反應。因此人源單克隆抗體在臨床治療上有廣泛應用前景，引起人們的普遍興趣。但是人單克隆抗體制備存在許多技術上和倫理上的障礙，如人雜交瘤細胞系不穩定，有些抗原不能對人進行人工免疫，人B細胞只能從外周血中分