RNA抽提經驗
對大部分實驗人員來說，RNA 抽提比基因組 DNA 抽提要困難得多。事實上，現有的 RNA 抽提方法/試劑，如果用于從培養細胞中抽提 RNA，比抽提基因組 DNA 更方便，成功率也更高。那為什么同樣的方法用于組織 RNA 的抽提，總會碰到問題呢？ 組織 RNA 抽提失敗的兩大現象是： RNA 降解和組織內雜質的殘留。關于降解問題，首先看一下為什么從培養細胞中抽提 RNA 不容易降解。現有的 RNA 抽提試劑，都含有快速抑制 Rnase 的成分。在培養細胞中加入裂解液，簡單的混勻，即可使所有的細胞與裂解液充分混勻，細胞被徹底裂解。細胞被裂解后，裂解液中的有效成分立即抑制住細胞內的 Rnase，所以 RNA 得以保持完整。也就是說，培養細胞由于很容易迅速與裂解液充分接觸，所以其 RNA 不容易被降解；反過來講，組織中的 RNA 之所以容易被降解，是因為組織中的細胞不容易迅速與裂解液充分接觸所致。因此，......閱讀全文
裂解辦法抽提核酸
裂解辦法抽提核酸含蛋白酶的裂解辦法，還是可以覺得是抽提基因組DNA?的首選。裂解涵蓋膜蛋白的游離和與基因組DNA?銜接接的氨基酸的游離。蛋白酶的效用是使氨基酸變小，因而對氨基酸的游離有很大的增進效用；同時，很大的基因組DNA?是很容易“纏”住大分子的物品的，氨基酸被蛋白酶克化變小后，則不由得易被基因
細菌的核酸抽提
DNA Extraction·?????????DNA Extraction from Bacteria?(Julie B. Wolf,UMBC)Phenol/chloroform method·?????????DNA Extraction From Bacteria (Triton Method
抽提萃取的概念
利用化合物在兩種互不相溶（或微溶）的溶劑中溶解度或分配系數的不同，使化合物從一種溶劑內轉移到另外一種溶劑中。經過反復多次萃取，將絕大部分的化合物提取出來。萃取時如果各成分在兩相溶劑中分配系數相差越大，則分離效率越高、如果在水提取液中的有效成分是親脂性的物質，一般多用親脂性有機溶劑，如苯、氯仿或乙
DNA抽提指南(TRIZOL)
按照RNA 分離操作方案在完全移去水樣層后，勻漿中的DNA 存在于中間層和苯酚層中也可以被分離出來。在沉淀和多次洗脫后，DNA 溶解在8 mM NaOH中。用TRIZOL試劑從組織和培養細胞中完全回收的DNA 可以用來做樣品中DNA 含量的測定。同時抽提的基因組DNA 可以用于對Northern a
蛋白抽提指南（TRIZOL）
在用酒精沉淀出DNA（DNA抽提中的步驟一）后剩余的苯酚—乙醇上清中可以抽提出蛋白。沉淀的蛋白可通過蛋白[質]印跡法對樣品中某一特殊的蛋白質進行分析。試劑所需，但沒有隨同提供的物品：* 異丙醇* 0.3M鹽酸胍(用95%酒精配制)* 無水乙醇* 1% SDS1.蛋白質的沉淀用異丙醇從苯酚—乙醇上清中
RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)4
3． 由于與反義RNA探針雜交的樣品RNA僅為該RNA分子的部分片段，因此，部分降解的RNA樣品仍可進行分析。4． 步驟較少，耗時短。與Northern雜交相比，省去了轉膜和洗膜的過程。5． RNA-RNA雜交體穩定性高，無探針自身復性問題，無須封閉。6． 一個雜交體系中可同時進行多個探針雜交，無競
RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)2
關于平臺期和線性期的問題，實際上線性期是指數期，只不過碰巧2的冥和2的倍數是相同的。看上去任何一個時期都可以，實際上是不對的，因為牽涉到酶促動力學的問題，這個我也不懂，有一些專門的文章，好像，涉及到很多化學的東西。我們學醫的，也沒必要知道那些，但是其中主要是因為模板引物酶原料和buffer之間的關系
RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)5
室溫下充分混勻，離心10000g×2min。取上層液置另一0.5 ml離心管中，加入100μl氯仿，混勻，離心10000g×2min。將上層液轉移至另一0.5ml 離心管中，再加入3M NaAc 10μl、預冷無水乙醇250μl，混勻后，-20OC靜置30min。4OC離心13500g×10
RNA－抽提中自備有機溶液的配制及保存問題
看了離心機的配平討論帖，才決定發起該帖的。該帖的問題也比較簡單，但人人都會遇到，所以帖之。實驗者，5 成用心，3+ 成用腦，2- 成用手是也。假定你抽提 RNA 時使用到的有機試劑 - 氯仿、異丙醇、無水乙醇 - 都是國產的 (這是完全可以使用的)。我的問題是：你采取了什么措施來降低或者杜絕 RNa
RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)1
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2+濃度、退火溫
RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)3
4. 配制的溶液應盡可能的用0.1% DEPC，在37℃處理12hr以上。然后用高壓滅菌除去殘留的DEPC。不能高壓滅菌的試劑，應當用DEPC處理過的無菌雙蒸水配制，然后經 0.22μm濾膜過濾除菌。5. 操作人員戴一次性口罩、帽子、手套，實驗過程中手套要勤換。6. 設置RNA操作專用實驗室，所有器
RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)6
可能問題出在標本的保存：一般四小時之內就應處理，分離出細胞說的是套式PCR,可以在你的第一次PCR兩個引物內,再設計一對引物進行第二次PCR就行了如果你的第一次PCR剛好包括目的片段,那只好設計個更長的了第二次的引物設計要求可以低一點以50μl體系為例引物各1μl第一次PCR產物5μl二次PCR和巢
羅氏FFPET組織樣本抽提RNA試劑盒實驗結果分析
High?Pure?FFPET?RNA?Isolation?Kit基于離心柱法的抽提原理，在柱上直接進行高效DNase消化，在整合的實驗流程中方便地去除殘留DNA。圖1：抽提獲得寬泛的RNA片段范圍，FFPET?RNA抽提物片段長度范圍在100-4000bp 使用3中不同的方法從乳腺癌組織的5um?
全自動核酸抽提儀
全自動核酸抽提儀是一種用于基礎醫學、臨床醫學領域的分析儀器，于2016年10月25日啟用。 技術指標 1.采用QIAGEN硅膠膜離心柱技術,2.針對多種生物樣本（包括全血、血漿、血清、尿液、糞便、細胞和FFPE組織或新鮮組織等），可以實現對基因組DNA，病毒核酸，質粒DNA，microRNA
脂肪抽提儀操作須知
??? 傳統的脂肪提取器是由提取瓶、提取管、冷凝器三部分組成，利用的是溶劑回流和虹吸的原理。但是這一儀器有一弊端，各部分連接處容易漏氣，且工作效率不高。今天小編要給大家介紹一下脂肪抽提儀，其根據索氏抽提原理，用重量測定方法來測定脂肪含量，常被用于食品、油密封圈受乙醚變形泄露的問題。脂肪抽提儀在給人們
熱浸提和索氏抽提的區別
粗脂肪含量是糧食、油料、飼料等產品標準中重要質量指標，是評價產品品質，組織生產的重要依據之一。?國內外測定粗脂肪含量方法有十余種之多，索氏抽提法是目前應用廣泛測定方法，是公認的脂肪含量測定的經典方法。?經典索氏提取法原理：測定脂肪是將樣品放在抽提筒內，以水浴蒸餾冷凝的Ether進行回流浸提，一般要十
蛋白質的抽提實驗
實驗材料 轉型菌株pQG11 M15 [pREP] 單一菌落試劑、試劑盒 LB amp kan液體培養基IPTGNa3PO4·12H2ONaClEDTATriton X-100液氮儀器、耗材 恒溫震蕩培養箱高速冷凍離心機離心管冰筒實驗步驟 一、儀器用具恒溫震蕩培養箱37℃；高速冷凍離心機及離心管 （
酵母抽提物的發展情況
最新數據表明, 近年來,中國的酵母抽提物年均需求增長率高于10%,而在美國和歐洲市場的增長速度大約在5%。目前全球酵母提取物的年生產規模在16萬噸左右。 全球現狀 20世紀初,YE產品率先在歐洲國家出現,60年代開始了工業化生產階段,但直到90年代后,隨著YE的優勢發揮、應用領域擴大以及植物
索氏抽提的具體介紹
從固體物質中萃取化合物的一種方法是，用溶劑將固體長期浸潤而將所需要的物質浸出來，即長期浸出法。此法花費時間長．溶劑用量大、效率不高。在實驗室多采用脂肪提取器(索氏提取器)來提取、脂肪提取器(如圖所示)就是利用溶劑回流及虹吸原理，使固體物質連續不斷地被純溶劑萃取，既節約溶利萃取效率又高。萃取前先將固體
奶粉脂肪抽提儀操作步
??? 脂肪是奶粉中重要的營養物質，也是直接反映奶粉質量的重要指標。近幾年來，乳制品安全問題頻頻曝光，使得消費者對乳制品安全憂心忡忡。所以，高效快速地檢測奶粉我品質，控制奶粉質量是解決問題的關鍵。????? 目前，奶粉脂肪含量測定方法大多為化學檢測技術，這類方法雖然精度高，但耗時費力，操作過程相對復
麥胚抽提物的概念
中文名稱麥胚抽提物英文名稱wheat-germ extract定 義用于測定信使核糖核酸(mRNA)活性的一種體外翻譯分析系統。系從小麥胚中制備的無細胞抽提物，須用RNA酶去除其中內源的mRNA。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
酵母抽提物的基本介紹
酵母抽提物是以食品用酵母為主要原料,以酵母自身的酶或外加食品級酶的共同作用下,酶解自溶（可再經分離提取）后得到的產品,并富含氨基酸、肽、多肽等酵母細胞中的可溶性成分。根據需要可添加適量輔料進行調配,也可在生產后期增加美拉德反應工藝,屬于食品配料。 酵母抽提物（又稱酵母提取物、酵母味素）,英文名
蛋白質的抽提實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 蛋白質在細菌中表現后，以反復的冷凍-解凍方法打破細胞，再用硫酸銨把蛋白質沉淀下來，此步驟可以去除大部份核酸、多醣、脂質等雜物。 實驗材料 轉
WB生物樣本總蛋白抽提
一、貼壁細胞蛋白提取A1..將水浴鍋的溫度調至100℃，等水浴鍋達到100℃溫度后，取出需要收樣的細胞的培養皿或者孔板。2.將緩沖液（1Xloading buffer）置于100℃水浴鍋中預熱10min。（loding buffer：?是5Xloding buffer用純水稀釋到1Xlodingbu
質粒DNA的抽提與純化
目的 ： 采用堿變性法，學習小規模制備質粒DNA的技術原理 ： 堿變性抽提質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH值高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會完
RNA抽提過程介紹
? 一，準備工作? ? 1， 實驗器具與材料:? ? RNA 抽提? ? (1) 移液槍:1ml、200ul、10ul? ? (2) 吸頭:1ml、200ul、20ul? ? (3) 吸頭臺:放置1ml吸頭的一個，放置200ul和20ul的吸頭一個 (4) EP管1.5ml、100ul? ? (5)
核酸的抽提mRNA提取分離技巧
與rRNA 和tRNA 不同的是，哺乳動物細胞的絕大部分mRNA 在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纖維素親和層析法從大量的細胞RNA 中分離mRNA dmonds等，1971;At Leder，1972）。在構建cDNA文庫時， 必須經上述純化步驟制備mRNA
瀝青抽提儀的使用方法
一）準備工作??? 1、按T07722-93瀝青混合料含量試驗（離心分離法），在拌和廠從運料卡車取瀝青混合料試樣，施在金屬盤中適當拌和，待溫度降100℃以下時，用大燒杯取混合料試樣質量1000g左右（M）（粗粒式瀝青混合料用高限，細粒式用低限，中粒式用中限）準確至0.1g。??? 2、如從路上用鉆機
抽提質粒的基本原理
現在的質粒抽提一般是利用堿裂解法，是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異達到分離目的。高pH使質粒DNA和染色體DNA變性，同時沉淀蛋白質。再將pH值調至中性，質粒DNA較小，很容易復性成雙鏈。而染色體DNA較大，不會復性，纏結成網狀不溶物質，從而可以通過離心除去。
脂肪抽提儀的完整測定方法
??? 脂肪存在于很多物質，最常見的還是在我們的日常接觸的食品中，比如：牛奶、肉類等，人體中的脂肪含量很大一部分是和我們每天攝入的食品密切相關的，作為一種營養物質，和蛋白質一樣，存留在人體中含量過多過少都不行。飲食我們 可以控制，但食品中的脂肪含量是需要檢測才能得出的，為了人類健康發展，如今，很多食