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簡 介 這個方法是應用最早也是最常用的突變篩查方法之一，在過去的十年中經歷了很大的改進，并被診斷室所廣泛使用，最近有篇關于該問題的綜述（Fodde>和 Losekoot 1994 年）。原 理 如果 DNA 雙鏈分子全長不斷增加溫度或用化學變性劑處理，兩條鏈就會開始分開（解鏈）。首先解鏈的區域由解鏈溫度較低的堿基組成。 G.C 堿基對比 A.T 堿基對結合得要牢固，因此 G. C 含量高的區域具有較高的解鏈溫度。同時影響解鏈溫度的因素還有相鄰堿基間的吸引力（稱作“堆積”）。解鏈溫度低的區域，通常位于端部稱作低溫解鏈區（ lower melting domain ）。如果端部分開，那么雙螺旋就由未解鏈部分束在一起，這一區域便稱作高溫解鏈（ high melting domain ） ( 圖 1) 。如果溫度或變性劑濃度繼續升高，兩條鏈就會完全分開。變性梯度凝膠電泳法依據首要的一點是： DNA 雙鏈......閱讀全文
【實驗目的】 1．了解PCR-DGGE技術的原理。 2．了解并熟悉PCR-DGGE技術的步驟。 【實驗原理】 變性梯度凝膠電泳（DGGE）是一種根據DNA片段的熔解性質而使之分離的凝膠系統。核酸的雙螺旋結構在一定條件下可以解鏈，稱之為變性。核酸50%發生變性時的溫度稱為熔解溫度（Tm
變性梯度凝膠電泳(DGGE) 實驗方法原理 1. 變性梯度凝膠電泳（DGGE）是一種根據DNA
變性梯度凝膠電泳（DGGE）是一種根據DNA片段的熔解性質而使之分離的凝膠系統。（1）將凝膠設置在雙重變性條件下，可以檢測DNA分子中的任何一種單堿基的替代、移碼突變以及少于10個堿基的缺失突變，被廣泛應用于基因突變檢測及相關研究。（2） 用于癌癥和遺傳病的篩查及診斷,而且,在癌癥(殘存性病灶、突變
實驗原理 DNA 雙鏈分子在全長不斷增加溫度或用化學變性劑條件處理下，兩條鏈就會開始分開（即解鏈）。首先解鏈的區域由解鏈溫度較低的堿基組成。GC堿基對比AT堿基對結合得要牢固，因此GC含量高的區域具有較高的解鏈溫度。同時影響解鏈溫度的因素還有相鄰堿基間的吸引力。解鏈溫度低的區域，通常位于端
相關專題1 甲基化敏感性限制性內切酶 (methylation-sensitive restriction Endonuclease，MS-RE)-PCR/Southern法這種方法利用甲基化敏感性限制性內切酶 對甲基化區的不切割的特性，將DNA消化為不同大小的片段后再進行分析。常使用的甲基化敏感的
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
基因突變(gene mutation)是遺傳病和腫瘤發生的根本原因，檢測與遺傳病及惡 性腫瘤發生有關的突變基因(mutant gene)是分子生物學，醫學遺傳學及腫瘤學研究 的熱點，它對闡明遺傳病和腫瘤發生的分子生物學基礎及其診斷和早期診斷具有重要 ＼意義，分子生物學技術的發展，尤其是PCR技術的出
基因突變(gene mutation)是遺傳病和腫瘤發生的根本原因，檢測與遺傳病及惡 性腫瘤發生有關的突變基因(mutant gene)是分子生物學，醫學遺傳學及腫瘤學研究 的熱點，它對闡明遺傳病和腫瘤發生的分子生物學基礎及其診斷和早期診斷具有重要 ＼意義，分子生物學技術的發展，尤其
PCR-SSCP法 PCR-SSCP法是在非這性聚丙烯酰胺凝膠上，短的單鏈DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同構象，一個堿基的改變將影響其構象而導致其在凝膠上的移動速度改變。其基本原理為單鏈DNA在中性條件下會形成二級結構，這種二級結構依賴于其堿基組成，即使一個堿基的不同，也會形成不同的二
多態性（polymorphism）是指處于隨機婚配的群體中，同一基因位點可存在2種以上的基因型。在人群中，個體間基因的核苷酸序列存在著差異性稱為基因（DNA）的多態性(gene polymorphism)。這種多態性可以分為兩類，即DNA位點多態性(site polymorphism)和長度多態性
在自然界中存在大量豐富的微生物資源，但目前被人們所培養利用的僅僅占1%～10%，還有大量的微生物沒有被人們所了解和利用。隨著基因組學在生物技術領域的不斷發展，微生物基因組學的研究憑借基因組研究(TIGR)所利用鳥槍法成功地對流感嗜血菌(Haem ophilus influenzae)的全基因組序
多態性（polymorphism）是指處于隨機婚配的群體中，同一基因位點可存在2種以上的基因型。在人群中，個體間基因的核苷酸序列存在著差異性稱為基因（DNA）的多態性(gene polymorphism)。這種多態性可以分為兩類，即DNA位點多態性(site polymorphism)和長度多態性
【實驗目的】掌握變性梯度凝膠電泳檢測新的突變，以及測定高度多態基因的基因型的技術方法。【實驗原理】在現代遺傳學中DNA 序列突變的分析占有十分重要的地位。由于在較大DNA 序列中檢測一個細微的突變非常困難，因而現在人們建立了幾種方法來解決這一難題。變性梯度凝膠電泳(DGGE)能把
【實驗目的】掌握變性梯度凝膠電泳檢測新的突變，以及測定高度多態基因的基因型的技術方法。 【實驗原理】在現代遺傳學中DNA 序列突變的分析占有十分重要的地位。由于在較大DNA 序列中檢測一個細微的突變非常困難，因而現在人們建立了幾種方法來解決這一難題。變性梯度凝膠電泳(D
DGGE、CGGE和TGGE三種方法是基于相同的原理而設計的突變檢測方法，它仍均是根據DNA的解鏈特性而設計。對于同一定序列組成或的DNA片段來說，它具有恒定的解鏈溫度（Tm），但若其序列發生改變時，Tm值亦發生改變，在含有變性因素（變性劑，高溫）的凝膠半進行電泳，當其比鏈解開形成分叉時，電泳遷
凝膠電泳被廣泛用于分子生物學、遺傳學和生物化學：1.大的DNA或者RNA分子通常利用瓊脂糖凝膠電泳（agarose gel electrophoresis）分離，也可以使用聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）。2.蛋白質的凝膠電泳通常在加入十二烷基硫酸鈉的聚丙烯酰胺凝膠中進行（SDS-PAGE），或者非變
凝膠電泳的基本原理及應用凝膠電泳的原理比較簡單。當一種分子被放置在電場當中時，它們就會以一定的速度移向適當的電極，這種電泳分子在電場作用下的遷移速度，叫做電泳的遷移率。它同電場的強度和電泳分子本身所攜帶的凈電荷數成正比。也就是說，電場強度越大、電泳分子所攜帶的凈電荷數量越多，
在自然界中存在大量豐富的微生物資源，但目前被人們所培養利用的僅僅占1%～10%，還有大量的微生物沒有被人們所了解和利用。隨著基因組學在生物技術領域的不斷發展，微生物基因組學的研究憑借基因組研究(TIGR)所利用鳥槍法成功地對流感嗜血菌(Haem ophilus influenza
7．等位基因特異性擴增 在設計引物時，根據已知突變位點的特征，在引物3’端或中間設計一錯配堿基，使之僅能與突變型或野生型基因互補，而只擴增相對應的突變型或野生型基因。主要用于點突變導致的遺傳病的檢測。其優點是只需一步PCR，而無需電泳和標記，擺脫了分子生物學方法中必經電泳的現象。在相互競爭的突變
作者：劉勇1,2 王榮*1,2 高 嵐2 賈正平1 辛曉婷1,2 謝 華1 馬 駿1 作者單位：1(蘭州軍區蘭州總醫院臨床藥理基地，蘭州 730050) 2(蘭州大學生命科學學院，蘭州 730000) 【摘要】 p53基因點突變在肺癌的發生過程
DGGE，CGGE及TGGE三種方法是基于相同的原理而設計的突變檢測方法，它仍均是根據DNA的解鏈特性而設計.對于同一定序列組成或的DNA片段來說，它具有恒定的解鏈溫度(Tm)，但若其序列發生改變時，Tm值亦發生改變，在含有變性因素(變性劑， 高溫)的凝膠半進行電泳，當其比鏈解開形成分叉時，電泳遷移
DGGE、CGGE及TGGE三種方法是基于相同的原理而設計的突變檢測方法，它仍均是根據DNA的解鏈特性而設計。對于同一定序列組成或的DNA片段來說，它具有恒定的解鏈溫度（Tm），但若其序列發生改變時，Tm值亦發生改變，在含有變性因素（變性劑，高溫）的凝膠半進行電泳，當其比鏈解開形成分叉時，電泳遷移的
凝膠電泳的原理比較簡單。當一種分子被放置在電場當中時，它們就會以一定的速度移向適當的電極，這種電泳分子在電場作用下的遷移速度，叫做電泳的遷移率。它同電場的強度和電泳分子本身所攜帶的凈電荷數成正比。也就是說，電場強度越大、電泳分子所攜帶的凈電荷數量越多，其遷移的速度也就越快，反之則較慢。由于在電泳
DGGE，CGGE及TGGE三種方法是基于相同的原理而設計的突變檢測方法，它仍均是根據DNA的解鏈特性而設計.對于同一定序列組成或的DNA片段來說，它具有恒定的解鏈溫度(Tm)，但若其序列發生改變時，Tm值亦發生改變，在含有變性因素(變性劑， 高溫)的凝膠半進行電泳，當其比鏈解開形成分叉時，電泳遷移
DNA序列分析（DNA sequencing） 應用各種突變檢測技術檢測到的基因突變，最后都需用序列分析才能確定突變類型及突變位置，其效率可以達到100％。現在的測序方法已與經典的方法有了很大的不同，其基本原理雖仍是雙脫氧終止法，但自動化程度大為提高，操作更簡便，測序時間也大大縮短。隨著PCR技術與
SNP 是指基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA 序列多態性，在群體中的發生頻率不小于1 %。包括單個堿基的轉換、顛換、插入和缺失等。所謂轉換是指同型堿基之間的轉換，如嘌呤與嘌呤( G2A) 、嘧啶與嘧啶( T2C) 間的替換；所謂顛換是指發生在嘌呤與嘧啶(A2T、A2C、C2G、G
實驗原理：1、SNP的概念及意義單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphism，SNP），主要是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態性。它是人類可遺傳的變異中最常見的一種。占所有已知多態性的90%以上。SNP在群體中的發生頻率不小于1%。SNP在
1)土壤理化性質及微生物數量測定 土壤微生物（細菌、真菌和放線菌）數量測定采用稀釋平板法；土壤酶活性指標測定參照關松蔭(1986)《土壤酶及其研究方法》的方法進行。土壤脲酶活性的測定采用苯酚鈉比色法；土壤磷酸酶活性的測定采用磷酸苯二鈉比色
原理：變性梯度凝膠電泳（Denaturing Gradient Gel Electrophresis，DGGE）是一種實用價值較高研究DNA突變的分析方法。本質是一類電泳（電泳定義：帶電顆粒在電場作用下，向著與其電性相反的電極移動，稱為電泳(electrophoresis, EP)。利用
原理：變性梯度凝膠電泳（Denaturing Gradient Gel Electrophresis，DGGE）是一種實用價值較高研究DNA突變的分析方法。本質是一類電泳（電泳定義：帶電顆粒在電場作用下，向著與其電性相反的電極移動，稱為電泳(electrophoresis, EP)。利用帶電粒子