載體構建實驗常見問題大解析
大家是否在實驗中經常遇到載體構建的各種問題，浪費大量的時間和精力，各種各樣的問題讓人頭疼，海創科業小編作為科研老司機特意為各位科研君整理了載體構建實驗常見問題及解決方法，希望能夠幫助到大家。1. PCR載體構建大部分時候都要通過PCR的方法獲取目的片段，擴增PCR的時候大家盡量選用高保真的PCR酶來進行擴增，擴增之前我們首先要了解目的基因序列信息。其次高質量的模板對PCR成功與否也很重要，以質粒作為模板的PCR相對來說最好擴增，基因組DNA和cDNA相對來說較難獲取一些。引物設計工作，一般很多軟件都可以進行引物設計，例如pirmer5之類的軟件。除了常用的酶切連接的方法也可以使用無縫克隆的方法構建，選用哪種方法我們都要在引物設計的時候考慮到，酶切連接的方法和無縫克隆引物設計注意點如下：1） 無縫克隆方法設計引物的時候要加入同源重組臂序列。2） 做酶切連接引物設計要......閱讀全文
質粒載體的載體大小的介紹
大的質粒（大于15kb）不會很好轉化而且DNA產量通常很低。在設計實驗時要考慮到加入插入片段的最終載體大小，盡量用更小的載體。 兼容性 當多于一個質粒載體必須同時存在于同一個細菌細胞中，這兩個質粒的復制子必須是兼容的。當他們不能穩定地共存時，則認為這兩個質粒是不兼容的。 選擇/檢測插入片段
LITMUS39載體載體載體的基本信息和質粒圖譜
LITMUS39載體載體基本信息載體名稱LITMUS39載體抗性Ampicillin載體長度2817 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Evans PD, Cook SN, Riggs PD, Noren CJ.拷貝數High copy number5'引物M13
微載體
實驗方法原理以高濃度接種細胞和微珠，然后按照要求進行稀釋、攪拌和取樣。實驗材料起始培養物儀器、耗材生長培養基微載體攪拌培養瓶磁力攪拌器實驗步驟1. 按照所需最終培養液量的 1/3，以 2~3 g/L 混懸微珠。2. 用胰蛋白酶消化和計數細胞，以正常接種濃度的 3~5 倍將細胞接種到微珠懸液中。3.
微載體
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 以高濃度接種細胞和微珠，然后按照要求進行稀釋、攪拌和取樣。 實驗材料 起始培養物
微載體
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 以高濃度接種細胞和微珠，然后按照要求進行稀釋、攪拌和取樣。 實驗材料 起始培養物
簡述慢病毒載體的載體質粒
載體質粒上HIV-1的順式序列通常包括兩端的LTR、剪切位點及包裝信號Ψ等。此外，研究表明，gag基因5′端的序列可提高載體RNA的包裝效率；Rev蛋白需要與Rev反應元件(RRE)相作用，將未剪切的載體轉錄產物從細胞核轉運到胞漿。因此，Naldini等在載體上保留了gag基因5′端350bp的
微載體實驗
實驗方法原理?以高濃度接種細胞和微珠，然后按照要求進行稀釋、攪拌和取樣。實驗材料?起始培養物儀器、耗材?生長培養基微載體攪拌培養瓶磁力攪拌器實驗步驟 1. 按照所需最終培養液量的 1/3，以 2~3 g/L 混懸微珠。2. 用胰蛋白酶消化和計數細胞，以正常接種濃度的 3~5 倍將細胞接種到微珠懸液中
siRNA表達載體
多數的siRNA表達載體依賴RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段45—50nt的發夾結構RNA（small hairpin RNA, shRNA）在哺乳動物細胞中的表達,shRNA在細胞內會自動被加工成為siRNA，從而引發基因沉默或者表達抑制。這一類啟動子包括大家熟悉的人
生物載體分類
質粒載體質粒載體是一種相對分子質量較小、獨立于染色體DNA之外的環狀DNA(一般有1～200 kb左右，kb為千堿基對)，有的一個細菌中有一個，有的一個細菌中有多個。質粒能通過細菌間的接合由一個細菌向另一個細菌轉移，可以獨立復制，也可整合到細菌染色體DNA中，隨著染色體DNA的復制而復制。噬菌體載體
質粒與載體
一、質粒絕大多數的生物都是以DNA 的形式來儲藏其遺傳信息。遺傳物質要能生生不息地傳給后代的首要條件就是它至少要具有一個復制原(ori, origin of replication，或譯為復制起點)，使整個基因體得以復制。含有復制原的遺傳物質稱為replicon，我們姑且把它譯為為復制體吧！原核性復
克隆載體的功能作用及常見的載體介紹
克隆載體通常采用從病毒、質粒或高等生物細胞中獲取的DNA作為克隆載體，在載體上插入合適大小的 外源DNA片段，并注意不能破壞載體的自我復制性質。將重組后的載體引入到宿主細胞中，并在宿主細胞中大量繁殖。常見的載體有質粒、噬菌粒、酵母人工染色體。
固定化細胞技術載體要求及常用載體介紹
①載體應是親水的，疏水載體與有機溶劑相同的變性影響。②載體也是要求有一定的機械強度和穩定性。③常用的載體包括：1、天然高分子（纖維素、瓊脂糖、淀粉、葡萄糖凝膠、膠原及其衍生物等）2、合成高聚物（尼龍。多聚氨基酸等）3、無機支持物（多孔玻璃、金屬氧化物等）
GPC載體的種類
GPC載體的種類：1. 交聯聚苯乙烯凝膠2. 多孔性玻璃3. 聚乙酸乙烯酯凝膠及聚丙烯酰胺凝膠4. 木質素凝膠等
什么是微載體？
是指直徑在60-250μm，能適用于貼壁細胞生長的微珠。一般是由天然葡聚糖或者各種合成的聚合物組成。
shRNA干擾載體構建
產品技術背景pRI系列載體是基于III類RNA聚合酶啟動子：人類H1啟動子的專用于哺乳動物細胞RNA干擾的載體。H1啟動子在哺乳動物細胞內合成類似siRNA分子的小分子RNA。由于H1啟動子有精確的轉錄起始位點和終止信號，H1啟動子轉錄產物精確生成人工設計的shRNA，shRNA經過RISC剪切后形
shRNA干擾載體構建
產品技術背景pRI系列載體是基于III類RNA聚合酶啟動子：人類H1啟動子的專用于哺乳動物細胞RNA干擾的載體。H1啟動子在哺乳動物細胞內合成類似siRNA分子的小分子RNA。由于H1啟動子有精確的轉錄起始位點和終止信號，H1啟動子轉錄產物精確生成人工設計的shRNA，shRNA經過RISC剪切后形
分子克隆常用載體
分子克隆常用載體 DNA片段的克隆需要合適的載體，載體或是質粒，或是噬菌體，或是病毒，通常大多經過人工改造[地的。作為載體必須具備兩條件：一是該載體在細胞內必須能自主復制，即必須具備復制原點；二是該載體必須具備適合的酶切位點，且這些酶切位點不在復制原點區域內。以上兩條，保證了載體的可繁殖性和可利用
RNAi表達載體構建
近年來的研究表明，一些短片斷的雙鏈RNA可以通過促使特定基因的mRNA降解來高效、特異的阻斷體內特定基因表達，誘使細胞表現出特定基因缺失的表型， 稱為RNA干擾（RNA interference，RNAi）。siRNA（small interfering RNAs）就是這種短片斷雙鏈RNA分子，能夠
簡述siRNA表達載體
多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶Ⅲ啟動子（pol Ⅲ）中的一種，操縱一段小的發夾RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳動物細胞中的表達。這三類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動子和人H1啟動子。之所以采用RNA pol Ⅲ啟動子是由于它可以在哺乳動物細胞
什么是電子載體？
在的物質稱為電子載體。參與傳遞的電子載體有四種(coenzyme Q)，在這四類電子載體中，除了輔酶Q以外，接受和提供電子的氧化還原中心都是與蛋白相連的輔基。在線粒體電子傳遞系統(呼吸鏈)內起接受和提供電子或氫(由質子和電子組成)的物質稱為電子載體，它們分別是各種脫氫酶的輔酶，如NAD+，FMN，F
RNAi表達載體構建
近年來的研究表明,一些短片斷的雙鏈RNA可以通過促使特定基因的mRNA降解來高效、特異的阻斷體內特定基因表達,誘使細胞表現出特定基因缺失的表型, 稱為RNA干擾（RNA interference,RNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是這種短片斷雙鏈RNA分子,能夠
什么是質粒載體？
質粒載體是在天然質粒的基礎上為適應實驗室操作而進行人工構建的質粒。與天然質粒相比，質粒載體通常帶有一個或一個以上的選擇性標記基因（如抗生素抗性基因）和一個人工合成的含有多個限制性內切酶識別位點的多克隆位點序列，并去掉了大部分非必需序列，使分子量盡可能減少，以便于基因工程操作。
藥物載體的介紹
藥物載體，是指能改變藥物進入人體的方式和在體內的分布、控制藥物的釋放速度并將藥物輸送到靶向器官的體系。
腺病毒載體綜述
腺病毒的一般特性??? 腺病毒的形態是特征性的二十面體病毒殼體（Stewart et al., 1993）。其病毒殼體含有三種主要的蛋白：六鄰體（II），五鄰體基底（III）和纖突（IV），還有多種其他的輔助蛋白VI，VIII，IX，IIIa和Iva2（Fig. 1）。腺病毒基因組是一個線性的雙鏈D
pUC質粒載體結構
（1）來自于pBR322的Ori（2）氨芐青霉素的抗性基因(ampr)。 但核苷酸序列發生了變化（3） LacZ′基因編碼β—半乳糖酶的α—肽鏈即氨基末端。（4）MCS區段是一段用于插入外源DNA片段的特定區域，由一系列的緊密相連的限制性內切酶位點組成，而且每個限制性內切酶位點在整個載體中是唯一的。
質粒載體是什么？
質粒載體是基因工程重要的載體之一。它是以質粒 DNA 分子為基礎構建而成，主要用 于原核生物和植物的基因轉移以及建立基因組文庫和cDNA 文庫。現在分子生物學使用的質粒載體都已不是原來細菌或細胞中天然存在的質粒，而是經過了許多的人工改造，從不同的實驗目的出發，人們設計了各種不同類型的質粒載體。近年來
質粒載體的分類
按復制形式分為嚴緊型和松弛型復制。根據質粒DNA復制與宿主之間的關系或在宿主細胞的拷貝數的多少，可以將質粒分為兩種不同的復制類型：嚴緊型和松弛型。嚴緊型質粒復制受宿主染色體DNA復制的嚴格控制，拷貝數較小一般只有1~3個拷貝。疏松型質粒的復制宿主的控制比較松，在宿主中的拷貝數比較多，一般有10~20
pTrcHis2－B載體載體的基本信息和質粒圖譜
pTrcHis2 B載體載體基本信息載體名稱pTrcHis2 B載體抗性Ampicillin載體長度4404 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Invitrogen (Life Technologies)拷貝數High copy numberpTrcHis2 B載體質粒圖
M13噬菌體衍生載體的制備實驗——載體衍生法
M13噬菌體是一種絲狀噬菌體，感染宿主后不裂解細菌細胞，只利用細胞內物質完成自身增殖，組裝成完整病毒顆粒后被宿主細胞分泌而出，宿主細胞仍能繼續生長分裂。為分子生物學中理想的質粒載體。基因間隔區的有些核苷酸序列即使發生突變、缺失活插入外源DNA片段，也不會影響M13DNA的復制，這為M13DNA構建克
LITMUS38i載體載體的基本信息和質粒圖譜
LITMUS38i載體載體基本信息載體名稱LITMUS38i載體抗性Ampicillin載體長度2814 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Evans PD, Cook SN, Riggs PD, Noren CJ.拷貝數High copy number克隆方法Enzym