用于外源蛋白質生產的細菌表達系統
實驗方法原理 實驗步驟 一、使用大腸桿菌生產外源蛋白 有越來越多的細菌表達系統可用于外源蛋白的生產。影響選擇某個表達系統的因素包括目標蛋白質的天然性質、使用者的經驗及產品的預期用途。大腸桿菌是表達外源蛋白最常用的細菌表達系統。經過對大腸桿菌一個多世紀的廣泛研究，在調控機制和可能影響表達結果的宿主輔助蛋白的功能方面，研究人員已經獲得了大量的信息。此外，實驗室和商業蛋白質生產所需的方法和技術有著廣泛的來源。對許多蛋白質制備項目來說，這些可用的資源和極低的技術要求使得大腸桿菌成為初步進行蛋白質表達與篩選的首選宿主。因此，我們將用大腸桿菌作為模型，介紹蛋白質生產的具體方法和技術。在介紹使用大腸桿菌進行蛋白質表達的具體技術之后，我們還將探討其他......閱讀全文
酵母表達外源蛋白（foreign－protein）（1）
1、 菌株用GS115表達不出蛋白，換KM71H后，大部分克隆能表達。2、溫度： 在28度和室溫下誘導表達，表達水平可能都不低。3、pH手冊上用6.0，pH提高到6.8，不表達的蛋白可能就表達出來。BMMY的pH7.0-7.5比較合適。國內外做的最好的rHSA，最適pH大概 5-6左右。pH3的時候
簡述外源凝集素的功能
1、有助機體Ca2+、糖輸運、維系共生功能。在機體的Ca2+和糖輸運中起作用。在貝類中，為它們同一些植物共生起維系作用。 2、共扼接合功能。與其他糖蛋白或糖發生共扼接合，就如高等動物中抗體與抗原體系中的相互作用。 3、清除雜物功能。在甲殼動物變態期間，參與清除機體不必要的細胞，組織片段或殘余
酵母表達外源蛋白（foreign－protein）（3）
12、蛋白降解分泌表達的目標蛋白比胞內蛋白確實容易被降解。可以嘗試以下幾種辦法：1、盡可能降低培養液的pH值減少酶活，酵母生長pH值比較廣，4～7都可以試一下；2、多試幾種蛋白添加劑，充當酶解底物（比如酵母酸）；3、摸索最適下罐（搖瓶也一樣），寧可少表達點也別給降解光了。實在沒辦法，只好換菌株或做p
酵母表達外源蛋白（foreign－protein）（4）
15、菌體密度：菌體是在BMMY中培養的，可以不用BMMY做對照，在600nm處測OD值，培養基和PBS光吸收都很低，PBS更方便。麥芽浸提液培養酵母（不換液，補料），生長階段結束后，密度可達到10-12，誘導培養結束后，密度可達到18左右。如果用1體積的BMGY，在生長階段結束后，換液時，加入1/
外源基因進入細胞主要方法介紹
外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法、脂質體介導法和病毒介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入；磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞；病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染細胞的方法使得其進入細胞。但是由于電擊法和
概述外源凝集素的作用
凝集素中一大類動植物乃至微生物起源的多價非免疫蛋白或糖蛋白，一般被認作為外源凝集素—Lectins。它是Boyd于1963年提出，后被大家認可的。外源凝集素是非免疫起源的熱敏蛋白質或糖蛋白，由于其多價構型及對特定細胞多糖具結合親和力，它們選擇凝集某些細胞(包括脊椎動物血球及一些病原微生物)和沉淀
細菌胞外蛋白含量測定實驗
(一)實驗原理這種蛋白質測定法是最ling敏的方法之一.過去此法是應用最廣泛的一種方法,由于其試劑乙的配制較為困難(現在已可以訂購),近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代.此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加入了第二種試劑,即Folin—酚試劑,以增加顯色量,從而提高了檢測蛋白質的靈敏度.這兩種顯色
關于外源凝集素的基本介紹
外源凝集素又稱植物性血細胞凝集素，是一類可使紅血球凝集的非免疫來源的多價糖結合蛋白或蛋白質。例如，類凝集素僅存在于豆科作物中，它們對糖結合的專一性較寬。
關于外源凝集素的應用介紹
1)分離和純化含糖高分子； 2)分離和純化細胞； 3)鑒定微生物； 4)選擇突變株細胞； 5)研究細胞表面的結構特征； 6)鑒定糖鏈的結構； 7)探索免疫反應的機理； 8)作為組織化學和細胞化學的試劑； 9)作為腫瘤細胞鑒定試劑和治療劑； l0)臨床上的其他用途。
關于外眼源性眩暈的原因分析
外眼源性眩暈的原因： 如眼肌麻痹產生復視，注意飛快行車或站立于懸崖等，引起頭暈眼花及眩暈。 引起眩暈的疾病種類很多，大約有上百種病可以引起眩暈，不同的疾病的原因也是不一樣的。按照病變部位的不同，大致可以分為周圍性眩暈和中樞性眩暈兩大類。中樞性眩暈是由腦組織、腦神經疾病引起，比如聽神經瘤、腦血
學者闡述外源注意不同階段神經機制
近日，華南師范大學腦科學與康復醫學研究院副研究員王本馳應邀在《認知科學趨勢》（Trends in Cognitive Sciences）發表Spotlight短文，介紹了基于顯著干擾的外源性注意的神經加工機制。外源性注意對人類的影響會隨著注意發生時間的變化而變化。從最初的注意捕獲，到后期的返回抑制，
外源基因人工轉化轉染的方法
將外源基因導入生物體的過程稱為轉化。這可以自然發生，也可以人為發生。人工轉化轉染方法包括：（a）化學方法，有磷酸鈣沉淀法、DEAE -葡聚糖絡合和脂質介導的DNA轉化法；（b）物理方法，包括電穿孔、微注射和基因槍法；（c）重組法，比如利用病毒作為載體。
外源消化酶－的特性和應用
飼料中淀粉、蛋白質等大分子化合物是禽畜的營養來源，動物體內可以分泌相應的內源性消化酶，比如淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等等，但是由于動物生理上的差異，不同的動物消化道中的酶系不同，特別是幼齡動物或動物處于病態和應激情況下，酶的分泌較弱，此時，在飼料中添加消化酶可以起到對內源性消化酶補充的作用，并且也可以促
簡述外源凝集素的毒性機制
外源凝集素產生毒性的機制尚在爭論中.實驗動物食用生的大豆脫脂粉會導致其生長遲緩，一半原因應歸于其中的外源凝集素.研究表明，外源凝集素攝入后與腸道上皮細胞結合，減少了腸道對營養素的吸收，從而造成動物營養素缺乏和生長遲緩.但去除外源凝集素的生大豆粉脫脂粉，其營養價值只有輕微的提高.生大豆粉除外源凝集
關于外源凝集素的組成介紹
外源凝集素由結合多個糖分子的蛋白質亞基組成，分子量為91000～130000u(道爾頓），為天然的紅細胞抗原.外源凝集素比較耐熱，80℃數小時不能使之失活，但100℃溫度下1h可破壞其活性.外源凝集素對實驗動物有較高的毒性.在小鼠的食物中加入0.5%的黑豆凝集素可引起小鼠生長遲緩.大豆凝集素的毒
外源消化酶的種類和作用
外源消化酶主要包括微生物蛋白酶(如枯草桿菌蛋白酶)、a一淀粉酶、支鏈淀粉酶等。外源消化酶主要用于補充幼畜、幼禽內源酶的不足。外源消化酶同時還能激活內源酶的分泌，從而有利于幼畜、幼禽對淀粉和蛋白質的吸收和利用。此外，由于玉米淀粉中含有一定數量的支鏈淀粉。畜禽內源a一淀粉酶不能消化支鏈淀粉，而枯草桿菌支
有機質譜儀中，除電子電離源外還有什么電離源
有機質譜儀，常見的電離源，一類是“硬電離”方式，主要是EI電子轟擊，還有一類是“軟電離”，有ESI電噴霧離子化、MALDI基質輔助激光解析電離、FAB快原子轟擊等。
細菌胞外蛋白含量的測定方法！
一、實驗原理這種蛋白質測定法是的方法之一.過去此法是應用泛的一種方法,由于其試劑乙的配制較為困難,近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代.此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加入了第二種試劑,即Folin—酚試劑,以增加顯色量,從而提高了檢測蛋白質的靈敏度.這兩種顯色反應產生深蘭色的原因是:在堿性條件下
耳源性硬腦膜外膿腫的診斷依據
1.本病常無典型癥狀，多在乳突術中發現鼓室、鼓竇、天蓋骨質缺損。缺損區溢膿而確診。 2.中耳炎病人突然耳流膿量增多，搏動性排膿。 3.難用單純性中耳炎解釋的頭痛、低熱。 4.膿腫較大可有顱內壓增高癥狀。 5.神經系統檢查：常無典型癥狀。根據膿腫大小部位和范圍，可有肢體偏癱、感覺性失語、巖
關于外眼源性眩暈的檢查診斷介紹
1.應明確眩暈的性質：周圍性眩暈，眼球震顫多有固定方向；陣發的、偶發的或嚴重的眩暈發作，間歇期無異常者提示周圍性病因；單側耳聾伴耳鳴是周圍性病因；單側耳聾伴耳鳴是周圍神經病變的可靠標志。中樞性眩暈，眼球震顫方向不固定；持續的眩暈或失平衡狀態，伴有眼球震顫與步態障礙者，提示中樞神經系統疾病；復視、
關于外眼源性眩暈的鑒別診斷介紹
1、腦血管性眩暈：夏冬季節由于血液粘稠度增加，容易發生各種腦血管意外，導致腦血管性眩暈的發生。應注意多飲水，不要突然改變體位，如夜晚上廁所時猛起，都容易引發腦血管性眩暈。一旦發生，應盡快到醫院就診，經確診后可以適當給以擴血管藥物、抗血小板聚集藥物(如阿司匹林)、抗凝藥物等。 2、腦腫瘤性眩暈：
關于外眼源性眩暈的緩解方法介紹
外眼源性眩暈的預防： 眩暈癥臨床表現復雜多樣，涉及到多種學科，幾十種疾病。患者應積極預防，控制原發病；一旦出現癥狀應盡快到醫院診治，以免耽誤病情。
外源DNA和質粒載體的連接反應
外源ＤＮＡ片段和線狀質粒載體的連接，也就是在雙鏈ＤＮＡ５'磷酸和相鄰的3'羥基之間 形成的新的共價鏈。如質粒載體的兩條鏈都帶5'磷酸，可生成４個新的磷酸二酯鏈。但如果質粒ＤＮＡ已去磷酸化，則吸能形成２個新的磷酸二酯鏈。在這種情況下產生的兩個雜交體分子帶有２個單鏈切口，當雜本導
外源DNA和質粒載體的連接反應
外源ＤＮＡ片段和線狀質粒載體的連接，也就是在雙鏈ＤＮＡ５'磷酸和相鄰的3'羥基之間 形成的新的共價鏈。如質粒載體的兩條鏈都帶5'磷酸，可生成４個新的磷酸二酯鏈。但如果質粒ＤＮＡ已去磷酸化，則吸能形成２個新的磷酸二酯鏈。在這種情況下產生的兩個雜交體分子帶有２個單鏈切口，當雜本導
關于外源凝集素的檢測方法介紹
1、直接凝集法：可溶性的Lectin結合在微生物的表面。 2、間接凝集法：用Lectin被動致敏乳膠微球。 3、酶聯Lectin吸附檢測：Lectin結合于塑料或Lectin用來與塑料附著的微體或抗原形成復合物。 4、WELLA法：改良印跡法使Lectin結合在凝膠的大分子上。
質粒載體和外源DNA的連接反應
實驗概要掌握DNA體外連接的基本技能，了解連接反應的注意事項。實驗原理DNA片段之間的連接是通過DNA連接酶的催化實現的。DNA連接酶催化具有平末端或互補粘性末端的DNA片段間相鄰堿基通過3’,5’磷酸二酯鍵連接起來，該反為需能反應，通常需要加入ATP或NADH，DNA連接酶對粘性末端的連接效率要遠
外源基因在真核細胞中的表達系統
1. 真核生物表達的優越性和必要性① 真核生物具有轉錄后加工系統，可識別并刪除基因中的內含子，剪切加工為成熟mRNA.②具備完善的翻譯后加工系統，可進行糖基化、乙酰化等修飾，使蛋白形成正確的天然構型，因而真核生物表達系統產生的蛋白更接近天然狀態，有利于其功能、生物活性的研究。③某些真核細胞可將基因表
外源基因在原核細胞中的表達系統
外源基因在原核細胞中表達是基因工程操作中最初取得成功的途徑。1 原核生物基因表達的特點同所有的生命過程一樣，外源基因在原核細胞中的表達包括兩個主要過程:即 DNA轉錄成mRNA和 mRNA翻譯成蛋白質。與真核細胞相比，原核細胞的表達有以下特點:①原核生物只有一種RNA 聚合酶(真核細胞有三種)識別原
質粒載體和外源DNA的連接反應
實驗原理DNA片段之間的連接是通過DNA連接酶的催化實現的。DNA連接酶催化具有平末端或互補粘性末端的DNA片段間相鄰堿基通過3’,5’磷酸二酯鍵連接起來，該反為需能反應，通常需要加入ATP或NADH，DNA連接酶對粘性末端的連接效率要遠高于對平末端的連接效率。在基因基因工程實驗中，最常用的來源于T
細胞外液中蛋白質濃度最低
四個當中細胞內液蛋白質濃度最高，這個不需多說了吧，畢竟蛋白質是在細胞內產生的，只有一小部分被分泌出去。第二應該是血漿，血漿中蛋白質含量大概是7%~9%，在其中也同樣需要進行各種生物反應，含有各種酶。再者就是組織液和淋巴了，組織液主要是其中間橋梁的作用，幫助細胞運輸營養物質，并接受細胞產生的代謝廢物，