方案27.12脂質體介導的瞬時轉染
方案27.12 脂質體介導的瞬時轉染 實驗材料 靶細胞 DNA 試劑、試劑盒 陽離子脂質 D-PBSA緩沖鹽溶液 NaCl 0.25%胰蛋白酶 儀器、耗材 細胞培養基 還原的血清培養基 無血清培養基 多孔培養板 實驗步驟 ......閱讀全文
脂質體介導的瞬時轉染
? ? ? ? ? ? 實驗材料 靶細胞 DNA 試劑、試劑盒 陽離子脂質 D-PBSA緩沖鹽溶液 Na
脂質體介導的瞬時轉染
實驗材料靶細胞DNA試劑、試劑盒陽離子脂質D-PBSA緩沖鹽溶液NaCl0.25%胰蛋白酶儀器、耗材細胞培養基還原的血清培養基無血清培養基多孔培養板實驗步驟A . 貼壁細胞的轉染1. 將 1.3X105?個細胞/孔接種到 6 孔培養板，加 3 ml 培養基。2. 于 37°C 的 CO2?孵箱培養至
脂質體介導的瞬時轉染
實驗材料?靶細胞DNA試劑、試劑盒?陽離子脂質D-PBSA緩沖鹽溶液NaCl 0.25%胰蛋白酶儀器、耗材?細胞培養基還原的血清培養基無血清培養基多孔培養板實驗步驟 A . 貼壁細胞的轉染1. 將 1.3X105 個細胞/孔接種到 6 孔培養板，加 3 ml 培養基。2. 于 37°C 的 CO2
脂質體介導DNA轉染法
脂質體（LR）試劑是陽離子脂質體DOTMA和DOPE的混合物（1：1）。它適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中，是目前條件下最方面的轉染方法之一。轉染率高，優于磷酸鈣法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA轉染到各種細胞。用LR進行轉染時，首先需要優化轉染條件，應找出該批LR對轉染某一特定細胞
脂質體介導的細胞轉染實驗
實驗概要學習和掌握外源基因導入真核細胞的主要方法—脂質體介導的轉染。了解外源基因進入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白），為染色準備實驗材料。實驗原理外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質體介導法和病毒介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入；磷酸鈣法和脂
脂質體介導的優勢有哪些？
脂質體是由脂雙分子層組成的顆粒，可介導基因穿過細胞膜。通過脂質體介導比利用病毒轉導進行基因轉移具有以下明顯的優勢： ①脂質體與基因的復合過程比較容易； ②易于大量生產； ③脂質體是非病毒性載體，與細胞膜融合將目的基因導入細胞后，脂質即被降解，無毒，無免疫原性； ④DNA或RNA可得到保護
脂質體介導的真核細胞轉染實驗——質體介導短暫表達
用脂質體將DNA導人各種真核細胞的效率比其他轉染方法更高，重復性更好。實驗材料哺乳動物細胞試劑、試劑盒質粒DNA完全培養基氯化銫DMEM儀器、耗材培養皿培養箱聚苯乙烯管實驗步驟1. ?按5×105細胞/孔的量在六孔板中接種指數期生長的細胞，在37℃ 5%CO2培養箱中 培養過夜，直至細胞80%匯片。
脂質體介導的真核細胞轉染實驗——脂質體進行穩定轉染
實驗材料哺乳動物細胞試劑、試劑盒DMEM儀器、耗材培養箱離心管實驗步驟1. ?接種細胞（見“脂質體介導短暫表達”步驟1）長至50%匯片。?2. ?制備DNA/脂質體混合物，轉染細胞（見“脂質體介導短暫表達”步驟2和3）。3. ?每孔細胞加入1 ml DMEM-20完全培養液，37℃ 培養箱培養48
方案27.12－脂質體介導的瞬時轉染
方案27.12 脂質體介導的瞬時轉染 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 靶細胞 DNA
脂質體介導的真核細胞轉染實驗
脂質體介導短暫表達 脂質體進行穩定轉染 哺乳動物細胞的選擇標記 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 哺乳動物細胞
脂質體介導的真核細胞轉染實驗
實驗材料 哺乳動物細胞試劑、試劑盒 質粒DNA完全培養基氯化銫DMEM儀器、耗材 培養皿培養箱聚苯乙烯管實驗步驟 1. ?按5×105細胞/孔的量在六孔板中接種指數期生長的細胞，在37℃ 5%CO2培養箱中 培養過夜，直至細胞80%匯片。（如果用100 mm 培養皿代替六孔扳，則培養細胞至80%匯片
脂質體介導的真核細胞轉染實驗——哺乳動物細胞選擇標記
哺乳動物細胞的選擇標記實驗材料哺乳動物實驗步驟一、腺苷脫氨酶（ADA）?1. ?選擇條件：培養液中加10 μg/ml?胸腺嘧啶脫氧核苷，15 μg/ml?次黃嘌呤，4 μmol/l 腺嘌呤-9-β-D-呋喃木糖苷（Xyl-A），及0.01~0.3 μmol/l 2‘-脫氧助間型霉索（dCF）。胎牛血
脂質體簡介
脂質體（liposome）是一種人工膜。在水中磷脂分子親水頭部插入水中，脂質體疏水尾部伸向空氣，攪動后形成雙層脂分子的球形脂質體，直徑25~1000nm不等。脂質體可用于轉基因，或制備的藥物，利用脂質體可以和細胞膜融合的特點，將藥物送入細胞內部 生物學定義：當兩性分子如磷脂和鞘脂分散于水相時，分
什么是脂質體？
脂質體(Liposomes)是由卵磷脂和神經酰胺等制得的脂質體(空心)，具有的雙分子層結構與皮膚細胞膜結構相同，對皮膚有優良的保濕作用，尤其是包敷了保濕物質如透明質酸、聚葡糖苷等的脂質體是更優秀的保濕性物質。
脂質體的特點
1、靶向性和淋巴定向性：肝、脾網狀內皮系統的被動靶向性。用于肝寄生蟲病、利什曼病等單核-巨噬細胞系統疾病的防治。如肝利什曼原蟲藥銻酸葡胺脂質體，其肝中濃度比普通制劑提高了200～700倍。2、緩釋作用：緩慢釋放，延緩腎排泄和代謝，從而延長作用時間。3、降低藥物毒性：如兩性霉素B脂質體可降低心臟毒性。
脂質體的分類
脂質體的分類1.脂質體按照所包含類脂質雙分子層的層數不同，分為單室脂質體和多室脂質體。小單室脂質體(SUV)：粒徑約0.02～0.08um；大單室脂質體 (LUV）為單層大泡囊，粒徑在0.1～lum。多層雙分子層的泡囊稱為多室脂質體 (MIV)，粒徑在1～5um之間。2.按照結構分：單室脂質體，多室
脂質體的分類
1.脂質體按照所包含類脂質雙分子層的層數不同，分為單室脂質體和多室脂質體。 小單室脂質體(SUV)：粒徑約0.02～0.08um；大單室脂質體 (LUV）為單層大泡囊，粒徑在0.1～lum。 多層雙分子層的泡囊稱為多室脂質體 (MIV)，粒徑在1～5um之間。 2.按照結構分：單室脂質體，
脂質體的簡介
脂質體（liposome）是一種人工膜。在水中磷脂分子親水頭部插入水中，脂質體疏水尾部伸向空氣，攪動后形成雙層脂分子的球形脂質體，直徑25~1000nm不等。脂質體可用于轉基因，或制備的藥物，利用脂質體可以和細胞膜融合的特點，將藥物送入細胞內部 生物學定義：當兩性分子如磷脂和鞘脂分散于水相時，分
脂質體的分類
脂質體的分類1.脂質體按照所包含類脂質雙分子層的層數不同，分為單室脂質體和多室脂質體。小單室脂質體(SUV)：粒徑約0.02～0.08um；大單室脂質體 (LUV）為單層大泡囊，粒徑在0.1～lum。多層雙分子層的泡囊稱為多室脂質體 (MIV)，粒徑在1～5um之間。2.按照結構分：單室脂質體，多室
脂質體的分類
1.脂質體按照所包含類脂質雙分子層的層數不同，分為單室脂質體和多室脂質體。小單室脂質體(SUV)：粒徑約0.02～0.08μm；大單室脂質體 (LUV）為單層大泡囊，粒徑在0.1～lμm。多層雙分子層的泡囊稱為多室脂質體 (MIV)，粒徑在1～5μm之間。2.按照結構分：單室脂質體，多室脂質體，多囊
脂質體的特點
1、靶向性和淋巴定向性：肝、脾網狀內皮系統的被動靶向性。用于肝寄生蟲病、利什曼病等單核-巨噬細胞系統疾病的防治。如肝利什曼原蟲藥銻酸葡胺脂質體，其肝中濃度比普通制劑提高了200～700倍。 2、緩釋作用：緩慢釋放，延緩腎排泄和代謝，從而延長作用時間。 3、降低藥物毒性：如兩性霉素B脂質體可降
脂質體的優勢
脂質體是由脂雙分子層組成的顆粒，可介導基因穿過細胞膜。通過脂質體介導比利用病毒轉導進行基因轉移具有以下明顯的優勢：①脂質體與基因的復合過程比較容易；②易于大量生產；③脂質體是非病毒性載體，與細胞膜融合將目的基因導入細胞后，脂質即被降解，無毒，無免疫原性；④DNA或RNA可得到保護，不被滅活或被核酸酶
靶敏感脂質體定義
靶敏感脂質體(target-sensitive liposomes, TS-liposomes)是脂質體在與靶部位結合后能自動去穩定，將內容物釋放出來。對于內吞能力比較弱或沒有內吞能力的靶細胞來說，普通的免疫脂質體通常不能有效地釋放藥物。這時，靶敏感脂質體可能更有效，釋放的藥物通過跨膜轉運進入靶
脂質體轉染的定義
脂質體是磷脂分散在水中時形成的脂質雙分子層，又稱為人工生物膜。
關于脂質體的簡介
脂質體（liposome）是一種人工膜。在水中磷脂分子親水頭部插入水中，脂質體疏水尾部伸向空氣，攪動后形成雙層脂分子的球形脂質體，直徑25~1000nm不等。脂質體可用于轉基因，或制備的藥物，利用脂質體可以和細胞膜融合的特點，將藥物送入細胞內部 生物學定義：當兩性分子如磷脂和鞘脂分散于水相時，分
脂質體的組成結構
脂質體的組成：類脂質（磷脂）及附加劑。1、磷脂類：包括天然磷脂和合成磷脂二類。磷脂的結構特點為一個磷酸基和一個季銨鹽基組成的親水性基團，以及由兩個較長的烴基組成的親脂性基團。 天然磷脂以卵磷脂（磷脂酰膽堿，PC）為主，來源于蛋黃和大豆，顯中性。 合成磷脂主要有DPPC（二棕櫚酰磷脂酰膽堿）、
脂質體轉染技術特征
陽離子脂質體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用將DNA分子包裹入內，形成DNA一脂復合體，也能被表面帶負電荷的細胞膜吸附，再通過膜的融合或細胞的內吞作用，偶爾也通過直接滲透作用，DNA傳遞進入細胞，形成包涵體或進入溶酶體?其中一小部分DNA能從包涵體內釋放，并進入細胞質中，再進一步進入核內轉
脂質體的作用特點
1、靶向性和淋巴定向性:肝、脾網狀內皮系統的被動靶向性。用于肝寄生蟲病、利什曼病等單核-巨噬細胞系統疾病的防治。如肝利什曼原蟲藥銻酸葡胺脂質體，其肝中濃度比普通制劑提高了200~700倍。2、緩釋作用:緩慢釋放，延緩腎排泄和代謝，從而延長作用時間。3、降低藥物毒性:如兩性霉素B脂質體可降低心臟毒性。
脂質體的功能特點
1、靶向性和淋巴定向性：肝、脾網狀內皮系統的被動靶向性。用于肝寄生蟲病、利什曼病等單核-巨噬細胞系統疾病的防治。如肝利什曼原蟲藥銻酸葡胺脂質體，其肝中濃度比普通制劑提高了200～700倍。2、緩釋作用：緩慢釋放，延緩腎排泄和代謝，從而延長作用時間。3、降低藥物毒性：如兩性霉素B脂質體可降低心臟毒性。
脂質體的化學特性
(1)磷脂氧化指數：氧化指數=A233nm/A215nm；一般規定磷脂氧化指數應小于0.2。(2)磷脂量的測定：基于每個磷脂分子中僅含1個磷原子，采用化學法將樣品中磷脂轉變為無機磷后測定磷摩爾量（或重量），即可推出磷脂量。