沙門氏菌回復突變實驗
目的 :學習利用細菌檢測基因突變 的方法 Ames試驗 即鼠傷寒沙門氏菌營養缺陷型回復突變 試驗,是目前檢測基因突變最常用方法之一。 原理 :利用鼠傷寒沙門氏菌突變株,即組氨酸缺陷型,其原始菌株菌體內的組氨酸是通過自身一系列酶催化反應合成的,這種能自身合成所需營養成份的菌株叫做野生型菌株。本試驗用鼠傷寒沙門氏菌為突變株,其不能合成組氨酸,而必須由外界提供這種菌珠被稱為營養缺陷式營養實變型(his-)。當誘變劑作用于菌株后,在菌株遺傳物質的特定位點發生基因回復突變成為野生型(his+),故在缺乏組氨酸的培養基上,只存少數自發回變菌落生長,而能誘發細菌 回變的致突變物可使細菌生長增多,從而可判斷被藥物是否具有致實變性。 材料 :菌株,鼠傷寒沙門氏菌TA97,TA98,TA100,TA102。 器材 :恒溫培養箱,干燥箱,高壓消毒鍋,水溶鍋,紫外線燈(15w),藥物天平,分析天平 酒精燈......閱讀全文
沙門氏菌回復突變實驗
目的 :學習利用細菌檢測基因突變 ?的方法 Ames試驗 即鼠傷寒沙門氏菌營養缺陷型回復突變 ?試驗,是目前檢測基因突變最常用方法之一。 原理 :利用鼠傷寒沙門氏菌突變株,即組氨酸缺陷型,其原始菌株菌體內的組氨酸是通過自身一系列酶催化反應合成的,這種能自身合成所需營養成份的菌株叫做野生型菌株
沙門氏菌回復突變實驗
目的 :學習利用細菌檢測基因突變 ?的方法 Ames試驗 即鼠傷寒沙門氏菌營養缺陷型回復突變 ?試驗,是目前檢測基因突變最常用方法之一。 原理 :利用鼠傷寒沙門氏菌突變株,即組氨酸缺陷型,其原始菌株菌體內的組氨酸是通過自身一系列酶催化反應合成的,這種能自身合成所需營養成份的菌株叫做野生型菌株
鼠傷寒沙門氏菌回復突變試驗簡介
又稱Ames試驗,檢測受試物誘發鼠傷寒沙門氏菌組氨酸營養缺陷型突變株(his-)回復突變成野生型(his+)的能力。試驗菌株都有組氨酸突變(his-),不能自行合成組氨酸,在不含組氨酸的最低營養平皿上不能生長,回復突變成野生型后能自行合成組氨酸,可在最低營養平皿上生長成可見菌落。計數最低營養平皿
Ames試驗(沙門氏菌回復突變試驗)方法及導則(一)
鼠傷寒沙門氏菌回復突變試驗(Ames試驗,Salmonella Typhimurium / Reverse Mutation Assay)于 1975年建立并不斷發展完善,目前已被世界各國廣為采用,已經成為毒理學實驗室必需開展的重要實驗項目。Ames實驗用于檢測待分析物質的致突變作用,該驗靈敏、
Ames試驗(沙門氏菌回復突變試驗)方法及導則(三)
12 ?數據處理和結果判斷記錄受試物各劑量組、空白對照(自發回變)、溶劑對照以及陽性誘變劑對照的每皿回變菌落數,并求平均值和標準差。如果受試物的回變菌落數是溶劑對照回變菌落數的兩倍或兩倍以上,并呈劑量-反應關系者,則該受試物判定為致突變陽性。受試物經上述四個試驗菌株測定后,只要有一個試驗菌株,無論在
Ames試驗(沙門氏菌回復突變試驗)方法及導則(四)
試驗設計及受試物的特殊處理1) 劑量設計 決定受試物最高劑量的原則是受試物對試驗菌株的毒性和受試物的溶解度。對于純的化學物質,一般最低劑量為每平皿0.2 μg,最高劑量為 5 mg,或溶解度允許,或飽和濃度,或對細菌產生最小毒性濃度。對于毒性很低、攝入量很大的定型產品,可根據其溶解度和對細菌
Ames試驗(沙門氏菌回復突變試驗)方法及導則(二)
6.10??菌株鑒定用和特殊用途試劑 6.10.1??組氨酸—生物素平板成分:瓊脂粉 15g蒸餾水 944mL(V-B)培養基E 20mL20%葡萄糖 20mL滅菌鹽酸組氨酸水溶液(0.5g/100mL) 10mL滅菌0.5mmol/L生物素溶液 6mL配制:高壓滅菌瓊脂和水后,將滅菌20%葡萄糖,
Ames檢測法的原理及試驗方法
原理 化學物質引起的誘變往往不是直接的,它要經過生物的消化吸收,特別是高等生物的肝臟中的有關酶的作用再起作用。而且,誘變劑僅僅改變突變頻率,而不直接影響突變方向,所以同樣的誘變劑也能導致回復突變。 實驗方法 首先對一組雄性大鼠進行腹腔注射芳香族化合物,能大大增強鼠肝臟酶系的活性,4天后殺鼠
Ames試驗的目的和原理
鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)的組氨酸營養缺陷型(his-)菌株,在含微量組氨酸的培養基中,除極少數自發回復突變的細胞外,一般只能分裂幾次,形成在顯微鏡下才能見到的微菌落。受誘變劑作用后,大量細胞發生回復突變,自行合成組氨酸,發育成肉眼可見的菌落。某些化學物質需經
基因突變的檢測方法有哪些?
從基因突變的性質來看,檢測方法分為顯性突變法、隱性突變法和回復突變法三類。①顯性致死突變法,用待測物質處理雄性小鼠,使處理的雄鼠和未處理的雌鼠交配,觀察母鼠子宮中的死胎數,死胎數愈多則說明誘發的顯性致死突變愈多。這一方法適用于慢性處理,其優點是可靠性較大,而且測試對象是哺乳動物。缺點是不能區別出藥物