DNA序列和大規模DNA測序策略的探討（圖）
人類基因組計劃的核心內容之一是基因組測序。隨著人類基因組圖譜趨于完成，人類基因的 定位克隆、鑒定分析直至全基因組測序取得了突破性進展，測序策略的成熟、測序方法的改進、自動測序儀的廣泛應用、計算機數據分析系統的擴展以及測序分析能力的提高， 大大推進了大規模DNA測序的進程。第一節 DNA測序的基本方法一、Maxam-Gilbert的化學降解測序法①先用限制性內切酶把DNA切成10～200bp 的測序材料，②用堿性磷酸化酶處理該片段，消除5′末端上的磷酸，③在5′OH端標記32P，用多核苷酸磷酸激酶催化，④標記片段變性為單鏈，⑤化學試劑在特定堿基位置降解單鏈DNA，產生一組長度不等的DNA片段，⑥經電泳和放射性自顯影后，從4個反應系統統一閱讀，待測DNA的全部核苷酸序列就可直接讀出。二、Sanger的酶降解測序法（鏈終止法）這項技術的關鍵是在DNA的聚合過程中依賴特殊反應底物（2′3′-雙脫氧核苷三磷酸ddNTP）的特異性終止進行D......閱讀全文
electrophoresis－of－DNA
Agarose?Gel?Electroporesis?of?DNA Making?the?gel: 1.? Place?casting?platform?with?well?former?sideways?in?gel?stand?where?you?wish?to? pour?
DNA測序
DNA測序（主要內容如下）·?????????Sequencing Gel Preparation·?????????Preparation of Templates?·?????????DNA Sequencing by the Dideoxy Method·?????????DNA Sequen
DNA－Laddering
I. Protocol1. Harvest cellsOptional: wash plate with 37°C PBS (gently, so as not to lose cells); check on microscope,after aspirate PBS or mediaPlace
DNA轉化
DNA轉化Chemical Transformation·?????????Transformation of Competent Cells (RbCl2 Method)?(Goldberg Lab)Very nice protocol for E. Coli transformation inc
DNA指紋圖譜分析[DNA－Fingerprinting－]
一. 實驗目的1. 掌握DNA指紋圖譜技術的概念、原理和基本操作過程2. 學習DNA的限制性酶切的基本技術3. 掌握瓊脂糖凝膠電泳的基本操作技術，學習利用瓊脂糖凝膠電泳測定DNA片段的長度，并能對實驗結果進行分析。二. 實驗原理1984年英國萊斯特大學的遺傳學家Jefferys及其合作者首次將分離的
DNA凝膠電泳（DNA－agarose－gel－electrophoresis）
實驗原理瓊脂糖凝膠電泳是常用的用于分離、鑒定DNA、RNA分子混合物的方法，這種電泳方法以瓊脂凝膠作為支持物，利用DNA分子在泳動時的電荷效應和分子篩效應，達到分離混合物的目的。DNA分子在高于其等電點的溶液中帶負電，在電場中向陽極移動。在一定的電場強度下，DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應，即分
Quick－Yeast－DNA－Prep:－Isolation－of－Total－DNA－(genomic－and－plasmid)
Grow a 5 ml YPD O/N culture inoculated with a single yeast colony at 30 deg.Transfer culture to a small 13 x 100 glass tube. Spin down cells 2 min. in
高變區DNA與DNA指紋的關系
人的衛星DNA?或稱隨體DNA?是由一些短的DNA 片段（10bp 左右）多次重復所構成的。重復片段的組成和拷貝數在不同的個體及基因組的不同位置上不一樣。提取不同個體的基因組DNA 后，用其切點能識別序列為4 個堿基而又不切割該重復片段的限制性內切酶在重復片段的兩側切割基因組DNA ，然后將樣品進行
可以DNA結合的酶DNA連接酶
DNA連接酶：是能夠使用來自ATP或NAD的化學能將先前切割或斷裂的DNA鏈聚集在一起的酶。連接酶在DNA滯后鏈復制中特別重要，因為它們將岡崎碎片組合成DNA鏈。連接酶在DNA修復和基因重組中也發揮重要作用。
A型DNA與B型DNA的結構差異
A型DNA與B型DNA是在兩種環境下同種物質不同的形式。B型DNA：92%RH，鈉鹽，溶液和細胞中天然狀態中的DNA多以此狀態存在A型DNA：75%RH，鈉鹽A型DNA也是由反向的兩條多核苷酸鏈組成的雙螺旋，為右手螺旋，但螺旋體較寬而短，堿基與中心軸之傾角也不同，呈19度。
DNA的酶切與連接——DNA片段連接
實驗方法原理核酸片段可以通過連接酶的作用連接起來而獲得重組分子。實驗材料λDNA EcoT14I：由11條DNA片段組成試劑、試劑盒T4 DNA連接酶及其配套的10×連接緩沖液 0.5×TBE電泳緩沖液 6×Loading Buffer Goldview 瓊脂糖儀器、耗材電泳儀 水浴鍋 移液器 微波
循環腫瘤DNA比循環正常DNA矮半截
如今，人們開始利用液體活檢技術來診斷癌癥，以及監測治療效果，不過靈敏度是個問題。美國猶他州大學和華盛頓大學的研究人員近日在《PLOS Genetics》上發表文章，稱來源于腫瘤的DNA片段比來源于正常細胞的片段要短，這個特征可用于改善液體活檢。 猶他州大學的Hunter Underhill及其
DNA測序儀
DNA序列測定分手工測序和自動測序，手工測序包括sanger雙脫氧鏈終止法和maxam-gilbert化學降解法。自動化測序實際上已成為當今dna序列分析的主流。美國peabi公司已生產出373型、377型、310型、3700和3100型等dna測序儀，其中310型是臨床檢測實驗室中使用最多的一種型
DNA測序儀
DNA序列測定分手工測序和自動測序，手工測序包括sanger雙脫氧鏈終止法和maxam-gilbert化學降解法。自動化測序實際上已成為當今 dna序列分析的主流。美國pe abi公司已生產出373型、377型、310型、3700和3100型等dna測序儀，其中310型是臨床檢測實驗室中使用最多的一
DNA重組技術
連接反應的策略?? 可以采用幾種策略來進行外源ＤＮＡ片段和質粒載體的連接。對此，可依據外源ＤＮＡ片段未的性質，以及質粒載體與外源ＤＮＡ上限制酸切位點的性質來作出選擇。（一）外源ＤＮＡ片段未的性質帶有各種未的外源ＤＮＡ的克隆方法見下表：────────────────────────────────
DNA指紋法
DNA Fingerprinting?(David F. Betsch)the theory, procedures and applications??·?????????DNA Fingerprinting (Polyarylamide Gel) (Caltech)BAC DNA sample
DNA提取儀
DNA提取儀也叫核酸純化儀，是應用配套的核酸提取試劑來自動完成樣本核酸的提取工作的儀器。
純化DNA實驗
從哺乳動物細胞或組織分離DNA 基因組DNA的快速純化 純化質粒（堿裂解法） ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
DNA抽提
DNA抽提（主要內容如下）·???Working with DNA·???DNA Extraction from Bacteria and Other Organisms·???DNA Extraction from Cell and Tissue·???Mitochondria DNA Isola
DNA的定量
一、 實驗原理核酸分子（DNA或RNA）由于含有嘌吟環和嘧啶環的共軛雙鍵，在260 nm波長處有特異的紫外吸收峰，其吸收強度與核酸的濃度成正比，這個物理特性為測定核酸溶液濃度提供了基礎。1 OD260相當于dsDNA 50 ug/ml，ssDNA 33 ug/ml和ssRNA 40 ug/ml。可以
葉綠體DNA分離
設備：Hitachi CS-150GXL或CS-120GXL微量超速離心機，S100AT6 轉頭，5PA 密封管（如果用4PC管，可接比例減少各層液量）溶液配制：A液：0.35Msorbitol（山梨醇），50mM Tris—Hcl (PH8.0) 25mM EDTA—Na2B液：5％（w/w）So
DNA酶切
一、 DNA酶切反應? 1、 將清潔干燥并經滅菌的eppendorf管(最好0.5ml)編號,用微量移液槍分別加入DNA 1μg和相應的限制性內切酶反應10×緩沖液2μl,再加入重蒸水使總體積為19μl,將管內溶液混勻后加入1μl酶液,用手指輕彈管壁使溶液混勻,也可用微量離心機甩一下,使溶
Gel－Electrophoresis－of－DNA
What is Electrophoresis?Electrophoresis is a technique used in the laboratory that results in the separation of charged molecules. In this CyberLab we
Yeast－DNA－Prep
Protocolgrow up yeast culture to appropriate density (near saturation)spin 1.5 mls of culture for 1 min in microfuge and aspirate off supernatantresus
DNA－isolation－extraction
CTAB TECHNIQUE / Method / Schedule / Protocol FOR DNA ISOLATION / DNA EXTRACTION FROM PLANT LEAF / LEAVES SAMPLES (see also DNA RNA double isolation
Preparing－Lambda－DNA
Preparing Lambda DNA1- Coliphage lambda DNA is a widely used vector for recombinant DNA. The middle third of its 48,000 bp contains no genes required
Fungal－DNA－Isolation
Fungal DNA IsolationSaghai-Maroof MA, Soliman KM, Jorgensen RA, & Allard RW (1984) PNAS 81:8014-8018DNA successfully isolated from fungal species of C
DNA－Sequencing－Gels
DNA Sequencing GelsBuffers and gel solutionsLong Ranger: we started using this in early 1995. Great stuff; the best thing is that the gels are not sti
DNA－mobility－in－gels
1. Migration of marker dyes in native polyacrylamide non-denaturing gels Gel?% Bromophenol?blue?(BP) Xylene?cyanole?(XC) ??3.5 ?100 460 ??5.0
DNA純化實驗
實驗方法原理 硅膠膜可在高鹽條件下結合DNA，又可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物、單核苷酸、酶、礦物油、鹽離子等雜質因為沒有與DNA相似的特性，所以被分離開來。實驗材料?PCR產物試劑、試劑盒?PCR清潔試劑盒儀器、耗材?96孔DNA制備板96孔深孔板96孔V型底板實驗