ES細胞打靶技術介紹
你聽說過喀邁拉獸（chimera）嗎？沒錯，就是古希臘神話故事中一只會噴火的怪獸，這種怪獸擁有獅頭、羊身、蛇尾，像是由幾種動物拼成的。或許你知道喀邁拉獸，但你是否知道在生物遺傳學中也有一種名為喀邁拉的動物嗎？那這神奇的怪獸與我們生物領域中的ES細胞基因打靶到底有什么關系呢？本期話題，咱們就一起來聊聊遺傳學中的chimera。圖1. 希臘神話中的喀邁拉獸（左）和現代生物遺傳學中的 “Chimera”（右） Chimera在生物學中是一種很常見的現象，一般可以理解為嵌合體，如怪獸是由不同動物組成，在生物中如上圖的老鼠，就是ES細胞打靶技術得到的chimera小鼠。之所以這里談論ES細胞，是因為這項技術已經廣泛應用于基因功能和基礎理論的研究、疾病模型的建立、基因治療和優質育種等。小編現在就帶著大家一步步走入ES細胞這個神奇的世界，把此技術的原理及實驗技巧等心得毫無保留地分享給大家。ES細胞打靶的原理胚胎干細胞( Embryonic S......閱讀全文
ES細胞打靶技術介紹
你聽說過喀邁拉獸（chimera）嗎？沒錯，就是古希臘神話故事中一只會噴火的怪獸，這種怪獸擁有獅頭、羊身、蛇尾，像是由幾種動物拼成的。或許你知道喀邁拉獸，但你是否知道在生物遺傳學中也有一種名為喀邁拉的動物嗎？那這神奇的怪獸與我們生物領域中的ES細胞基因打靶到底有什么關系呢？本期話題，咱們就一起來聊聊
ES打靶和CRISPR/Cas9如何選擇？
近年隨著生物醫藥技術快速迭代，靶向藥物、免疫療法、基因治療等個性化治療方式成為生物藥創新的主要方向。國內企業亦紛紛向生物藥領域挺進或轉型，生物藥市場愈發火熱。 其中，基因編輯嬰兒事件雖然近日被《科學》雜志列入2018年度十大科學突破的負面事件，但從一年前的ZL之爭，到年底基因編輯公司E
ES打靶和CRISPR/Cas9如何選擇？
近年隨著生物醫藥技術快速迭代，靶向藥物、免疫療法、基因治療等個性化治療方式成為生物藥創新的主要方向。國內企業亦紛紛向生物藥領域挺進或轉型，生物藥市場愈發火熱。 其中，基因編輯嬰兒事件雖然近日被《科學》雜志列入2018年度十大科學突破的負面事件，但從一年前的ZL之爭，到年底基因編輯公司Editas人類
ES打靶和CRISPR/Cas9如何選擇？
近年隨著生物醫藥技術快速迭代，靶向藥物、免疫療法、基因治療等個性化治療方式成為生物藥創新的主要方向。國內企業亦紛紛向生物藥領域挺進或轉型，生物藥市場愈發火熱。 其中，基因編輯嬰兒事件雖然近日被《科學》雜志列入2018年度十大科學突破的負面事件，但從一年前的ZL之爭，到年底基因編輯公司E
CRISPR/Cas9和ES打靶選擇的優劣比較
?近年隨著生物醫藥技術快速迭代，靶向藥物、免疫療法、基因治療等個性化治療方式成為生物藥創新的主要方向，這其中離不開基因編輯技術的發展。從一年前的ZL之爭，到基因編輯公司Editas人類基因編輯的臨床試驗獲FDA批準可知，基因編輯技術的發展備受期待。?目前動物模型基因編輯技術大抵分為兩類：ES細胞打靶
如何鑒定CRISPR/Cas9點突變小鼠轉基因鼠以及ES打靶技術...
如何鑒定CRISPR/Cas9點突變小鼠轉基因鼠以及ES打靶技術構建鼠？?基因工程小鼠基因型PCR鑒定的基本原則是利用基因工程小鼠基因組與野生型小鼠基因組的序列差異，以小鼠基因組DNA為模板進行PCR，并以凝膠電泳對比不同基因型特異產物的大小，根據條帶大小來區分小鼠的不同基因型。上期我們講述了CRI
ES細胞分化培養實驗——培養皿ES細胞集落
實驗材料ES 細胞單一胚胎樣體儀器、耗材細菌培養皿ES 分化培養基實驗步驟1. 準備下列試劑和材料：懸滴培養的 ES 細胞單一胚胎樣體100 mm 細菌培養皿ES 分化培養基2. 在 100 mm 細菌培養皿中加 10 ml 預熱的分化培養基。3. 從溫箱中取出培養 2 天的懸滴培養物。小心翻轉培養
基因打靶技術的研究
基因打靶技術是從20世紀80年代發展起來的，是建立在對同源重組不斷了解的基礎之上。首先是以酵母這種較為簡單的真核模式生物為基礎，來對相關技術進行研究。隨著外源DNA導入酵母細胞方法的建立、標記基因有效選擇的利用、同源重組轉化子篩選系統的建立、載體同源序列DNA（靶標）雙鏈斷裂提高同源重組效率的利用，
TetraOne－KO——基因敲除技術進展
TetraOne KO——基因敲除技術的重大突破 近日，賽業生物科技（Cyagen Biosciences）宣布推出其全球ZL技術TetraOne基因敲除，一種不僅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9（把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6個月），而且避免了TALEN、CRISP
將基因轉移至未分化ES細胞實驗——ES細胞電穿孔
實驗材料線性化轉移基因 DNA未分化 ES 細胞儀器、耗材電穿孔儀和電穿孔杯neoR-MEF 滋養板ES 生長培養基實驗步驟1. 準備下列試劑和材料：線性化轉移基因 DNA（1 mg/ml，溶于無菌 TE）未分化 ES 細胞Bio-Rad 電穿孔儀和電穿孔杯100 mm neoR-MEF 滋養板ES
基因打靶技術的原理方法
將外源DNA導入靶細胞后，利用基因重組，將外源DNA與靶細胞內染色體上同源DNA間進行重組，從而將外源DNA定點整合入靶細胞基因組上某一確定的位點。對于不同的生物體，所使用的基因打靶的方法也不用。對于小鼠來說，大致的流程如下：從小鼠胚胎上提取干細胞；同時，構建靶載體，靶載體中含有與靶基因同源的DNA
胚胎中細胞基因打靶方法
胚胎中細胞基因打靶方法置換型設計物的制備1．選擇靶基因的一個部分作為設計物的組成，還包括有靶基因的另一個部分作為Southern雜交探針，以鑒定細胞中是否已發生同源重組之用。2．在質粒載體中構建一個克隆；neo基因能阻斷靶基因的表達，在neo的兩側保持保留同源區；在同源區外的置換型設計物中包含一個胸
如何選擇基因敲除動物模型制備技術？
動物模型是現代生命科學研究的重要工具，特別是基因工程小鼠和大鼠，在基因功能研究、人類生理病理機制研究及新藥研發中起著不可替代的作用。近幾年來，制 備動物模型的基因修飾技術層出不窮，這不僅包括傳統ES打靶、TALEN、CRISPR/Cas9，?還有TetraOne基因敲除新技術。如此繁 多的技
ES細胞分化培養實驗
實驗材料 未分化 ES 細胞試劑、試劑盒 PBS儀器、耗材 ES 分化培養基移液器實驗步驟 1. 準備下列試劑和材料：未分化 ES 細胞無 Ca2+ 和 Mg2+ PBSES 分化培養基8 道微量移液器無菌多道移液器容器2. 收獲未分化 ES 細胞。3. 在 100 mm 組織培養皿中加 10 ml
ES細胞分化培養實驗
懸滴培養 培養皿ES細胞集落 附著ES細胞分化培養 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 未分化 ES 細胞
ES細胞分化培養實驗
實驗材料單一胚胎樣體儀器、耗材組織培養板巴斯德吸管玻璃蓋玻片無菌鑷子ES 分化培養基實驗步驟1. 準備下列試劑和材料：培養懸液中的單一胚胎樣體6 孔組織培養板帶棉塞巴斯德吸管明膠包被的玻璃蓋玻片無菌鑷子ES 分化培養基2. 準備明膠包被的玻璃蓋玻片3. 用無菌鑷子在 6 孔組織培養板的每孔中放一塊明
TetraOne－KO——基因敲除技術的重大突破
近日，賽業生物科技（Cyagen Biosciences）宣布推出其全球ZL技術TetraOne基因敲除，一種不僅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9（把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6個月），而且避免了TALEN、CRISPR/Cas9脫靶效應困擾的革命性技術。TetraO
TetraOne－KO——基因敲除技術的重大突破
TetraOne KO——基因敲除技術的重大突破 近日，賽業生物科技（Cyagen Biosciences）宣布推出其全球ZL技術TetraOne基因敲除，一種不僅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9（把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6個月），而且避免了TALEN、
基于胚胎干細胞的同源重組技術??介紹
基因改造（包括敲除和敲進）小鼠已經成為現代生命科學基礎研究和藥物研發領域不可或缺的實驗動物模型，在生命科學、人類醫藥和健康研究領域中發揮著重要的作用。今天呢，就給大家介紹最傳統最穩定的基因改造技術：基于胚胎干細胞的同源重組技術。Capecchi和Smithies早在在1989年根據同源重組（homo
同源重組技術原理
同源重組技術原理：基因敲除鼠技術是上世紀80年代中后期基于DNA同源重組的原理發展起來的，Capecchi和Smithies在1987年根據同源重組（homologous recombination）的原理，首次實現了ES的外源基因的定點整合（targeted integration），這一技術稱為
基因捕獲技術的優點缺點
用常規方法進行基因打靶研究需耗費大量的時間和人力。研究者必須針對靶位點在染色體組文庫中篩選相關的染色體組克隆，繪制相應的物理圖譜，構建特異性的打靶載體以及篩選中靶ES細胞等。通常一個基因剔除純合子小鼠的獲得需要一年或更長的時間。面對人類基因組計劃產生出來的巨大的功能未知的遺傳信息，傳統的基因剔除方法
研究中常用的兩種小鼠背景品系的選擇C57BL/6與Balb/C
基因編輯鼠的種類很多，在實際應用中，要根據研究的內容和目的來選擇合適的基因編輯鼠才能取得良好的實驗結果。我們通常會根據研究內容從背景品系、修飾的基因、修飾的方式以及構建技術這幾個方面進行考慮來選擇合適的基因編輯鼠。今天我們就先來聊一聊研究中常用的兩種背景品系及構建技術的選擇。?研究中常用的兩種背景品
大鼠ES細胞的實驗相關介紹
IannacconePM等從大鼠PVG近交系分離克隆大鼠ES細胞系-RESC-01，該細胞系對SSEA-1和AKP呈陽性，在大鼠胎兒成纖維細胞飼養層上能很好的增殖，在體內環境能分化形成多種細胞類型。RESC-01細胞系在體外懸浮培養時形成的胚體出現有節律的收縮運動，將其注入囊胚并移植假孕母鼠能生
小鼠多能ES細胞的增殖實驗
試劑、試劑盒PBS胰酶溶液儀器、耗材MEF 滋養板巴斯德吸管ES 生長培養基實驗步驟1. 準備下列試劑和材料：60 mm MEF 滋養板（接種不能超過 7 天）帶棉塞無菌巴斯德吸管無 Ca2+?和 Mg2+?PBSES 生長培養基胰酶溶液2. PBS 沖洗 ES 細胞，巴斯德吸管加胰酶溶液覆蓋培養皿
小鼠多能ES細胞的增殖實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 PBS 胰酶溶液 儀器、耗材 MEF 滋養板 巴斯德吸管 ES 生
小鼠多能ES細胞的增殖實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 PBS 胰酶溶液 儀器、耗材 MEF 滋養板 巴斯德吸管 ES 生
ES細胞的主要用途
（1）可用于研究哺乳動物個體發生和發育的規律，也是在體外條件下研究細胞分化的理想材料。（2）ES細胞通過誘導分化可產生新的組織細胞，用于治療人類的組織損傷和某些頑癥。（3）可通過ES細胞的體外誘導分化，定向培育人造組織器官，用于器官移植，解決供體器官不足和移植后免疫排斥的問題。
日本發明利用電分離篩選iPS、ES細胞的新技術
據日本媒體報道，慶應義塾大學宮田昌悟副教授帶領的研究小組利用給細胞加電壓時其反應各異的特點，發明了可以從飼養層細胞中簡單分離出所需的ES細胞和iPS細胞的新技術。與以往胰蛋白酶分離辦法相比，該技術具有操作簡單，并且不會傷害細胞的優點。 研究人員預先在長10毫米、寬5毫米的電路板上
完全基因剔除轉基因動物
實驗概要本文介紹了完全基因剔除轉基因動物的方法。完全基因剔除(entirely knock-out)：又稱基因敲除、基因打靶，指應用一段與胚胎干細胞染色體上的一段序列具有高度同源性的外源DNA，通過同源重組直接將靶基因在動物個體中的活性完全消除，來觀察靶基因失活、不表達的情況下會對動物個體產
CRISPR/Cas9技術，熱度背后的冷思考
近年來，CRISPR/Cas9基因編輯技術正在給整個科研界帶來革命性變化，該技術使用CRISPR系統將Cas9蛋白和向導RNA注入小鼠受精卵，就能輕松實現基因敲除，同時，注入Donor DNA則可實現基因敲入，甚至國際著名學術期刊Genome Biology有文章指出這項新技術將很快取代使用胚胎