免疫組化專題:流式細胞儀檢測技術實驗(二)
⑤主機設定:一般是已設定好的適合測定淋巴細胞的條件,包括探測器的電壓。探測器的電壓是調空光電倍增管所能檢測熒光密度的范圍。⑥選擇檢測的波長和表達方式(plot):如果用一種熒光抗體,一般選直方圖(histogram);如果用兩種熒光抗體,常選點狀二維圖(dot plot)或輪廓線圖(contour plot)表 CD69分子表達檢測直方圖的數值說明 b.abti-CD3(2 ng/ml)檢測結果 c.abti-CD3(10 ng/ml)檢測結果 CD4及CD8細胞點狀二維圖結果 不同的熒光物要求選擇不同的激發波長,參見下表 (2)細胞的吸入:將裝有細胞的FACS測定管放置到機器吸管孔處。先預檢測樣品,然后進行實際檢測。可根據細胞的濃度選擇測定的速度(低、中或高)。所有的數據將自動存入微機。3.使用后的......閱讀全文
免疫學技術專題:雌二醇的免疫膠體金試紙法檢測
雌二醇(17β-Estradiol)是天然雌激素的重要成分,為防止兒童性早熟等問題,食品中尤其是畜禽產品的雌二醇檢測不容忽視。膠體金免疫層析技術(GICA)在檢測小分子有機物方面越來越受到重視。其基本原理是膠體金顆粒能夠穩定吸附蛋白質,而蛋白質的生物活性無明顯變化,所以它可以取代酶標記抗體〔1,2〕
CBIFS-2017專題論壇:-農獸藥殘留檢測技術
2017年4月7日,由中國檢驗檢疫學會、太平洋國際展覽聯合舉辦的“CBIFS2017第十屆中國國際食品安全技術論壇”在杭州國際博覽中心召開。本屆會議邀請了食品行業內著名專家學者和儀器廠商,開展了80余場大會報告和專題報告,其中包括快速檢測、分析方法、食源性微生物、農獸藥殘留、真菌毒素、實驗室建設
免疫組化技術典型實驗案例學習2
7、我做了兩張切片:一張用老試劑盒內還剩下一點的血清而另一張用新試劑盒內的封閉血清,其余試劑(二抗、SP)均用新試劑盒提供的,結果是前一張效果很好,而后一張能夠看到特異性染色,但背景太深,拍照效果不佳。--看來封閉血清也是罪會禍首之一。結果分析顯示:抗體稀釋液的PH值偏低和封閉血清的失效導致了我的免
免疫組化技術典型實驗案例學習3
6、以上原因,都是針對實際中常見原因來進行分析的,前提是排除操作者的操作錯誤而引起陰性結果,這就需要新手還是要設置陽性對照以排除方法的問題。還有抗體稀釋液的PH值過低等其它原因的干擾。總之,要想把免疫組化做好,可能每一個環節都很重要,但也存在主次之分,出現問題了,需要通過先排除主要的,再依次排除次要
免疫組化技術典型實驗案例學習1
案例一:DAB染色后切片著色一片黃/背景深背景:奧運會期間我們課題組研究生都在實驗室做實驗,許多從北京購買的試劑買不到,對我們的許多實驗產生了很大的影響。我以前一直用中杉金橋的Sp三步法染色試劑盒,效果不錯,在奧運會期間我準備做同批實驗分不同批次酶免疫組化實驗,第一批組化實驗結果很好,抗體濃度感覺比
實驗時間_流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
流式細胞儀檢測細胞凋亡可以:鑒定細胞凋亡形態;可以準確的進行凋亡細胞的計數;可以進行特異的定性分析和定量分析。實驗原理細胞凋亡時,在細胞、亞細胞和分子水平上會發生的特征性改變,這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等,其中細胞核的改變最具特征性。通過流式細胞儀檢測這
基因技術專題1
專題一:RNA干擾技術(RNAi)1995年,康奈爾大學的Su Guo博士用反義RNA阻斷線蟲基因表達的試驗中發現,反義和正義RNA都阻斷了基因的表達,他們對這個結果百思不得其解。直到1998年, Andrew Fire的研究證明,在正義RNA也阻斷了基因表達的試驗中,真正起作用的是雙鏈RNA。這些
基因技術專題2
RNAi技術RNA干擾(RNA interference, RNAi)是近年來發現的研究生物體基因表達、調控與功能的一項嶄新技術,它利用了由小干擾RNA(small interfering RNA, siRNA)引起的生物細胞內同源基因的特異性沉默(silencing)現象,其本質是siRNA與對應
細胞技術專題:小鼠腹腔巨噬細胞培養實驗
小鼠腹腔巨噬細胞培可以:(1)吞噬與清除異物;(2)分泌生物活性物質;(3)對仿生全降解材料,降解后的無機產物與生命過程中有機物的合成作用。實驗方法細胞培養技術實驗方法原理取小鼠腹腔巨噬細胞與乳膠顆粒在不同培養條件下混合后定量加入24孔板,37 ℃,5% CO2?培養箱中孵育后,熒光顯微鏡下計數吞噬
細胞技術專題:大鼠肝星狀細胞培養實驗
實驗方法細胞培養技術 實驗方法原理選用Wistar大鼠經消化酶灌注肝臟后,用分離液分離HSC,通過觀察其自發熒光及其顯著特征性結構的脂肪染色、細胞免疫化學染色等方法鑒定。 實驗材料雄性 SD 大鼠 試劑、試劑盒戊巴比妥鈉 小牛血清 DMEM 酶消化液I、Ⅱ Nycodenz D-Hanks’液 HB
細胞凋亡:流式細胞儀檢測實驗
實驗方法原理 實驗材料 要分析的細胞在FACS緩沖液中試劑、試劑盒 FACS緩沖液冰冷的100%乙醇(如果細胞是抗體標記的則用70%乙醇)1 mg ml RNase A含50μg ml 二碘化丙錠(PI)的PBS儀器、耗材 流式細胞儀實驗步驟 1)凋亡刺激后,從培養液中沉淀所要分析的細胞,同樣沉淀一
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
實驗方法原理 其原理主要是根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等,其中細胞核的改變zui具特征性,主要包括以下幾個方面:1. 細胞核的改變由于凋亡細胞核的改變,造成各種染色體熒光染料對凋亡細胞DNA可染性
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
PI單染色法 Heochst 33342/PI雙染色法 Annexin V/PI雙染色法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 主要根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
實驗方法原理 其原理主要是根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等,其中細胞核的改變最具特征性,主要包括以下幾個方面:?1. ?細胞核的改變?由于凋亡細胞核的改變,造成各種染色體熒光染料對凋亡細胞DNA可染
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
PI單染色法 Heochst 33342/PI雙染色法 Annexin V/PI雙染色法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 主要根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
流式細胞儀檢測細胞凋亡可以: 鑒定細胞凋亡形態; 可以準確的進行凋亡細胞的計數; 可以進行特異的定性分析和定量分析。 實驗原理 細胞凋亡時,在細胞、亞細胞和分子水平上會發生的特征性改變,這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等,其中細胞核的改變最具特征
細胞凋亡:流式細胞儀檢測實驗
用次GoZG1 DNA峰值計算細胞凋亡 用TUNEL流式細胞定量凋亡細胞 通過TUNEL組織切面中的凋亡細胞的原位雜交 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
免疫組化實驗
實驗方法原理 免疫組織化學又稱免疫細胞化學,是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應,對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術。它把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起來,借助顯微鏡(包括熒光顯微鏡、電子顯微鏡)的顯像和放大作用,在細胞、亞細胞水
免疫組化檢測技術共識【完整版】(一)
免疫組化檢測技術共識【完整版】
成分輸血專題講座(二)
血小板輸注血小板輸注的適應癥:(1)血小板減少(常
PCR實驗技術(二)
【方法】方法一、基本的PCR方法下面介紹的基本PCR方法可作為任何PCR擴增的一般指導和出發點。由于各種PCR反應條件(如PCR擴增次數、溫度、Taq?DNA聚合酶的濃度、引物、氯化鎂以及模板DNA)變異極大,應根據具體情況,對各種PCR反應條件進行相應調整。1.按以下次序,將各成分加入0.2?ml
實驗室HIV檢測技術概述及進展(二)
?????? 2.1? HIV抗體、抗原檢測?????? HIV抗體一般在人感染后幾周逐漸出現,可延續至終生,血清學試驗分為初篩和確認試驗。最常用的初篩試驗和確認試驗分別是酶聯免疫吸附試驗和免疫印跡試驗(WB)。常規實驗方法:酶聯免疫吸附試驗、免疫印跡試驗(WestBlot)、間接免疫熒光法
細胞技術專題:大鼠星型膠質細胞培養實驗
大鼠星型膠質細胞培養可以:(1)用于神經系統發育、分化及再生等基礎研究;(2)腦缺血預處理上調神經保護蛋白的機制研究;(3)腦損傷和腦疼痛的研究;(4)新蛋白的功能研究。 ?實驗方法酶消化法 胰酶消化法 胰蛋白酶消化法 實驗材料大鼠胚胎 試劑、試劑盒L-15培養基 膠原酶 Dnase D-MEM-B
細胞技術專題:大鼠肝星狀細胞原代培養實驗
大鼠肝星狀細胞原代培養可以:(1)用于細胞保種;(2)用于分子生物學研究;(3)用于基因治療研究。實驗方法胰酶消化法 實驗方法原理將小鼠的肝細胞從機體中取出,經胰酶、螯合劑(常用EDTA)處理,分散成單細胞,置合適的培養基中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖。 實驗材料SD大鼠 試劑、試劑盒戊巴比妥鈉
蛋白質技術專題:蛋白等電聚焦凝膠電泳技術(二)
8.常見問題及解釋1) 若產生模糊條帶則證明聚焦不完全,這可能是由于電泳中的問題或大分子蛋白質限制了其在凝膠中的遷移能力。若聚焦時間過長或過短,條帶的分辨率會下降。增加電壓梯度可以使帶形更加銳利。高分子量蛋白質在瓊脂糖凝膠中可以聚焦的更好。2) 產生歪斜的條帶通常由于不正確的pH梯度,檢查電極是否潔