PPO粗酶液的純化
一、原理1.葡聚糖凝膠SephadexG-200凝膠柱層析利用大分子不能進入凝膠顆粒內部最先流出柱外，而小分子物質進入凝膠顆粒內部，流速慢而最后流出柱外，凝膠層析法能將不同分子大小的物質分離開。（G-200能分離800-80000D分子量的蛋白質）2.利用離子交換法，選取DEAE-陰離子纖維素DE52柱材料，因為PPO是帶有陽離子的蛋白質，在層析時會吸附在柱材料上，而雜蛋白會洗下。后用NaCl梯度洗脫PPO，（NaCl為強離子交換劑，能將弱吸附在柱材料上的PPO置換下來）。粗酶液從而得到純化。二、材料與試劑試劑：0.02MTris-HCL緩沖液Ph7.4(內含0.001MEDTA)配制時配×10倍濃縮液1000ml;NaCL;聚已二醇；DEAE-纖維素DE52；葡聚糖凝膠SephadexG-200;蘭葡萄糖－40、70、100等；實驗器械與儀器設備：試管與試管架、燒杯、玻璃攪棒、移液管、滴管等；試劑瓶、層析柱、pH計和pH試紙、......閱讀全文
植物中的多酚氧化酶及作用
在植物（如蘋果、荔枝、菠菜、馬鈴薯、豆類、茶葉、桑葉、煙草等）組織中，PPO是與內囊體膜結合在一起的，天然狀態無活性，但將組織勻漿或損傷后PPO被活化，從而表現出活性。在果蔬細胞組織中，PPO存在的位置因原料的種類、品種及成熟度的不同而有差異，綠葉中PPO活性大部分存在于葉綠體內[7]；馬鈴薯塊
植物中的多酚氧化酶及作用
在植物（如蘋果、荔枝、菠菜、馬鈴薯、豆類、茶葉、桑葉、煙草等）組織中，PPO是與內囊體膜結合在一起的，天然狀態無活性，但將組織勻漿或損傷后PPO被活化，從而表現出活性。在果蔬細胞組織中，PPO存在的位置因原料的種類、品種及成熟度的不同而有差異，綠葉中PPO活性大部分存在于葉綠體內[7]；馬鈴薯塊莖中
酶標抗體結合物的純化
在酶標記的溶液中，出現的是各種交聯物的混合物，有酶-抗體、酶-抗體-酶、抗體-抗體、酶-酶，甚至還有游離的酶和抗體。在這中間，除了抗體-酶和酶-抗體-酶外，其它都應該給予除去。1、50%飽和硫酸銨沉淀法。此法只能除去游離的酶及酶-酶聚合體。而不能除去其它不需要者。但是此法對酶標抗體的損耗少。2、過S
酶的分離純化方法介紹2
4.泡沫分離原理：將氣體通入含多種組分的溶液中，由于這些組分的表面活性由差異，因此在溶液的表面，某些組分將形成泡沫，泡沫的穩定性取決于操作條件及溶液的生物學特性。泡沫中含有更多的表面活性成分，故泡沫的組分種類及其含量與溶液中的不相同。這樣，溶液中的組分舅得以分離。蛋白質較易吸附與氣液界面，這有利于其
酶標記物的純化及鑒定
常用的純化方法有葡聚糖凝膠G-200/G-150過柱層析純化和50%飽和硫酸銨沉淀提純等。常用免疫電泳或雙相擴散法進行鑒定。1.出現沉淀線表示酶標記物中的抗體（抗原）具有免疫活性。2.沉淀線經生理鹽水漂洗后，滴加酶的底物溶液，若沉淀線上顯色，則酶標記物中的酶活性仍保留。
絲氨酸蛋白酶純化方案
絲氨酸蛋白酶是一種種類豐富的酶類，之所以以此命名是因為在酶的催化活性位點上包含絲氨酸在內的絲氨酸、組氨酸、天冬氨酸組成的催化三聯體。有些絲氨酸蛋白酶類如凝血酶類蛋白酶，其中包括凝血酶、組織纖維蛋白溶酶原激活劑、血纖維蛋白溶酶，它們參與凝血的發生以及炎癥應答反應；也有些如胰蛋白酶類的絲氨酸蛋白酶類的參
酶標記物的純化及鑒定
常用的純化方法有葡聚糖凝膠G-200/G-150過柱層析純化和50%飽和硫酸銨沉淀提純等。常用免疫電泳或雙相擴散法進行鑒定。1.出現沉淀線表示酶標記物中的抗體（抗原）具有免疫活性。2.沉淀線經生理鹽水漂洗后，滴加酶的底物溶液，若沉淀線上顯色，則酶標記物中的酶活性仍保留。
酶的分離純化方法介紹1
生物細胞產生的酶有兩類：一類由細胞內產生后分泌到細胞外進行作用的酶，稱為細胞外酶。這類酶大都是水解酶，如酶法生產葡萄糖所用的兩種淀粉酶，就是由枯草桿菌和根酶發酵過程中分泌的。這類酶一般含量較高，容易得到；另一類酶在細胞內產生后并不分泌到細胞外，而在細胞內起催化作用，稱為細胞內酶，如檸檬酸、肌苷酸、味
酶的提取和分離純化介紹
許多酶都存在于細胞內。為了提取這些胞內酶，首先需要對細胞進行破碎處理。細胞破碎的方法很多，主要包括機械破碎法、物理破碎法、化學破碎法和酶學破碎法等。機械破碎法是指利用搗碎機、研磨器或勻漿器等將細胞破碎開來。物理破碎法是指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細胞破碎開來。化學破碎法是指利用甲醛、丙酮等有機溶
酶的提取和分離純化方法
許多酶都存在于細胞內。為了提取這些胞內酶，首先需要對細胞進行破碎處理。細胞破碎的方法很多，主要包括機械破碎法、物理破碎法、化學破碎法和酶學破碎法等。機械破碎法是指利用搗碎機、研磨器或勻漿器等將細胞破碎開來。物理破碎法是指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細胞破碎開來。化學破碎法是指利用甲醛、丙酮等有機溶
酶最常用的純化方法介紹
酶的純化屬于一種后處理工藝，包括粗制工藝與精制工藝，對超酶液進行濃縮精制是生產高質量酶制劑的重要環節。其提純手段一般是依據酶的分析大小、形狀、電荷性質、溶解度、專一結合位點等性質而建立。要得到純酶,一般需要將各種方法聯合使用。最常用的純化方法有根據溶解度特性的沉淀法;根據電荷極性的離子交換層析、等電
植物PPO的研究現狀及展望
PPO與抗病性的關系人們已進行了廣泛的研究[32]。植物在抵御病原微生物的侵染過程中，抗性相關酶發揮了重要作用，這主要包括了酚類代謝系統中的一些酶和病原相關蛋白家族PPO通過催化木質素及醌類化合物形成，構成保護性屏蔽而使細胞免受病菌的侵害，也可以通過形成醌類物質直接發揮抗病作用。目前已比較成功的
生物酶學基礎酶的提取和分離純化
許多酶都存在于細胞內。為了提取這些胞內酶，首先需要對細胞進行破碎處理。細胞破碎的方法很多，主要包括機械破碎法、物理破碎法、化學破碎法和酶學破碎法等。機械破碎法是指利用搗碎機、研磨器或勻漿器等將細胞破碎開來。物理破碎法是指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細胞破碎開來。化學破碎法是指利用甲醛、丙酮等有機溶
粗談過濾
過濾是一種最常見的分離純化方法，通常用于液體或氣體混合物的分離。其原理為：在外界推動力（重力，壓力，離心力等）的作用下，位于過濾介質一側的懸浮液（或氣體）中的流體通過過濾介質向另一側流動，而固體顆粒被介質所截留，從而實現流體與顆粒物體的分離。過濾在我們的生活中也十分多見，比如現在空氣環境不好的地區，
細胞純化酶消化法的方法介紹
酶消化法是比較常用的純化方法，不僅對貼壁細胞可行，能利用上皮細胞和成纖維細胞對胰蛋白酶的耐受性不同，使兩者分開，達到純化的目的，對貼壁細胞與半貼壁及粘附細胞間的分離純化也是十分有效的。
酶的制備與純化技術研究
酶的生產酶的生產是各種生物技術優化與組合的過程，分為生物提取法、生物合成法和化學合成法三種[2],其中生物提取法是最早采用而沿用至今的方法, 它是指采用各種提取、分離、純化技術從動物、植物、器官、細胞或微生物細胞中將酶提取出來；生物合成法是20世紀60年代以來酶生產的主要方法, 是指利用微生物細胞、
?β葡萄糖苷酶的純化方法
粗提的β-葡萄糖苷酶可采用硫酸銨沉淀或用乙醇、丙酮等有機溶劑沉淀等方法初步分離。β-葡萄糖苷酶的進一步純化，往往是根據具體情況，采用多種方法逐步分離。目前分離β-葡萄糖苷酶的方法較多，其中離子交換柱層析和凝膠過濾柱層析兩種手段結合使用最為普遍，多數是先離子交換柱層析，后用凝膠過濾柱層析。離子交換柱層
β葡萄糖苷酶的純化方法
粗提的β-葡萄糖苷酶可采用硫酸銨沉淀或用乙醇、丙酮等有機溶劑沉淀等方法初步分離。β-葡萄糖苷酶的進一步純化，往往是根據具體情況，采用多種方法逐步分離。目前分離β-葡萄糖苷酶的方法較多，其中離子交換柱層析和凝膠過濾柱層析兩種手段結合使用最為普遍，多數是先離子交換柱層析，后用凝膠過濾柱層析。離子交換柱層
細胞人工純化的酶消化法介紹
酶消化法是比較常用的純化方法，不僅對貼壁細胞可行，能利用上皮細胞和成纖維細胞對胰蛋白酶的耐受性不同，使兩者分開，達到純化的目的，對貼壁細胞與半貼壁及粘附細胞間的分離純化也是十分有效的。 (1)上皮細胞與成纖維細胞的分離純化 兩者在胰蛋白酶的作用下，由于成纖維細胞先脫壁，而上皮細胞要消化相當長
酶的提取、分離、純化及其活性測定
? 原理 ? 酶是植物體內具有催化作用的蛋白質，植物體內的生化反應，一般都是在酶的作用下進行的，沒有酶的催化反應，植物的生命也就停止了，因此對酶的研究是闡明生命現象本質中十分重要的部分。 為要研究酶首先要將酶從組織中提取出來，加以分離、純化，不同的研究目的對酶制劑的純度要求也
酶的提取、分離、純化及其活力測定
一、實驗目的酶是植物體內具有催化作用的蛋白質，植物體內的生化反應，一般都是在酶的作用下進行的，沒有酶的催化反應，植物的生命也就停止了，因此對酶的研究是闡明生命現象本質中十分重要的部分。為要研究酶首先要將酶從組織中提取出來，加以分離、純化，不同的研究目的對酶制劑的純度要求也不相同，有些工作只需要粗的酶
過氧化氫酶活性測定公式計算方法
這樣應該可以了吧一、實驗目的：（1）掌握SOD酶的提取、分離、檢測一般步驟。（2）了解酶在提取過程中的兩個參數：回收率、純化倍數。（3）掌握離心機的使用。二、實驗原理:鄰苯三酚在堿性條件下，能迅速自氧化，釋放出O2-，生成帶色的中間產物，中間物的積累在滯留30～45s后，與時間成線性關系，一般線性時
大腸桿菌亮氨酰tRNA合成酶E292對于氨基酰化活性的作用
實驗概要本研究通過基因點突變的方法，將大腸桿菌LeuRS的E292用不同性質的6種氨基酸替換，這些氨基酸包括K(帶正電荷的氨基酸)，F(芳香族氨基酸)，S(親水性小分子氨基酸)，D(比E少一個亞甲基一CHZ一的氨基酸)，Q(去除谷氨酸的負電荷)，A(不帶電荷的氨基酸)，得到了該位置點突變的LeuRS
腿粗還是腰粗？基因影響女性如何儲存脂肪
人的出身是不能選擇的，殘忍的是，相同版本基因對男性和女性的致病影響也“重男輕女”。 攜帶相同變異版本KLF14基因的男性患糖尿病的風險大大降低，部分女性也能幸免于難，這取決于她們的基因版本來自父親還是母親。 要點： 1. 天然存在的KLF14基因變異版本影響女性身體脂肪分布，而且對II型糖尿
紫外可見分光光度計在食品酶分析中的應用
酶對食品加工的影響 酶是生物活細胞產生的一類具有催化功能的蛋白質。酶除了具有高的催化效率特性外，還具有很高的專一性，利用它能選擇性地將個別食品組分改性，而不影響到其它組分。因此，酶在食品科學中相當重要，通過酶的作用能引起食品原料的品質發生變化，也能在比較溫和的條件下加工和改良食品。 2.紫外-可見分
液相色譜分析時基線粗的解決方法
液相色譜分析中基線很粗的話，需要考慮的方面較多，主要如下：? 1?首先檢查液相色譜儀的噪聲，如果噪聲大，會引起基線變粗，需要采取措施降低噪聲；如果基線粗是因為噪聲大引起，要解決這個問題就要看你的檢測器和工作站的指標以及壓力是否平穩，然后可以通過脫氣等一系列的方法降低噪聲。? 2?調節你的電腦分
β葡萄糖苷酶的提取、純化及酶活測定方法
β-葡萄糖苷酶的提取方法不同來源的β-葡萄糖苷酶，其提取方法也有所不同。動植物體及大型真菌中的糖苷酶一般需要對酶源進行組織搗碎，然后用緩沖液浸提。常用的緩沖液有磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液等。pH值一般選用酶的穩定pH值；提取溫度適于低溫，一般為4 ℃。利用微生物發酵法生產β-葡萄糖苷
微生物酯酶的分離純化技術
1 膜處理技術 微生物發酵液以橫過膜表面的方式經過過程錯流膜，液流清掃膜表面的溶質層，使溶質無法積聚在膜表面處，從而截留微生物細胞和濃縮含酶發酵液，從而達到分離純化的目標。Sztajer等用毛細管超濾膜純化Pseudomonas fluorescens脂肪酶，他們比力了2種毛細管超濾膜：內徑1.1
微生物酯酶分離純化技術介紹
1 膜處理技術 微生物發酵液以橫過膜表面的方式通過錯流膜，液流清掃膜表面的溶質層，使溶質無法積聚在膜表面處，從而截留微生物細胞和濃縮含酶發酵液，從而達到分離純化的目的。Sztajer等用毛細管超濾膜純化Pseudomonas fluorescens脂肪酶，他們比較了2種毛細管超濾膜：內徑1.1mm
微生物酶的分離純化技術
2.1 膜處理技術 微生物發酵液以橫過膜表面的方式通過錯流膜，液流清掃膜表面的溶質層，使溶質無法積聚在膜表面處，從而截留微生物細胞和濃縮含酶發酵液，從而達到分離純化的目的。Sztajer等用毛細管超濾膜純化Pseudomonas fluorescens脂肪酶，他們比較了2種毛細管超濾膜：內徑1