用離子交換層析法從DNA中去除溴化乙錠實驗
實驗方法原理 經過氯化銫梯度離心所純化的 DNA 中的溴化乙錠可以通過離子交換層析法去除,隨后則用乙醇沉淀去除氯化銫。實驗材料 DNA 樣品試劑、試劑盒 乙醇HClNaCl酚氯仿TETEN 緩沖液儀器、耗材 Dowex AG50W-X8實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液乙醇,HCl (1 mol/L) ,NaCl ( 5 mol/L),酚,酚:氯仿(1:1,V/V) ,TE ( pH 8.0),TEN 緩沖液,含 0.2% 疊氮鈉的 TEN 緩沖液。2. 核酸和寡核苷酸經過氯化銫梯度離心純化的 DNA 樣品。3. 離心機和轉子Sorvall SS-34 轉子或相當產品4. 專用設備Dowex AG50W-X8 ( 100~200 目,干燥尺寸)(Dowex AG50W-X8 為一種陽離子交換樹脂,可從 BioRad 公司獲得。),玻璃棉,折光儀(可選)(盡管并非必需,但在估計氯化銫溶液密度時折光儀十分有用。)。二、方法1. 使......閱讀全文
用離子交換層析法從DNA中去除溴化乙錠實驗
實驗方法原理 經過氯化銫梯度離心所純化的 DNA 中的溴化乙錠可以通過離子交換層析法去除,隨后則用乙醇沉淀去除氯化銫。實驗材料 DNA 樣品試劑、試劑盒 乙醇HClNaCl酚氯仿TETEN 緩沖液儀器、耗材 Dowex AG50W-X8實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液乙醇,HCl (1 mol/
用離子交換層析法從DNA中去除溴化乙錠實驗
經過氯化銫梯度離心所純化的 DNA 中的溴化乙錠可以通過離子交換層析法去除,隨后則用乙醇沉淀去除氯化銫。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理經過氯化銫梯度離心所純化的 DNA 中的溴化乙錠可以通過離子交換層析法去除,隨后則用乙醇沉淀去除氯化銫。實驗材料DNA 樣品試劑、試劑盒
用離子交換層析法從DNA中去除溴化乙錠實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 經過氯化銫梯度離心所純化的 DNA 中的溴化乙錠可以通過離子交換層析法去除,隨后則用乙醇沉淀去除氯化銫。 實驗材料 DNA 樣品
用有機溶劑抽提法從DNA中除去溴化乙錠實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 欲從經 CsCl 梯度純化的 DNA 中去除溴化乙錠,常用有機溶劑反復抽提的方法。隨后可用透析或沉淀的方法去除 CsCl。 實驗材料 DNA
用有機溶劑抽提法從DNA中除去溴化乙錠實驗
實驗方法原理 欲從經 CsCl 梯度純化的 DNA 中去除溴化乙錠,常用有機溶劑反復抽提的方法。隨后可用透析或沉淀的方法去除 CsCl。實驗材料 DNA 樣品試劑、試劑盒 乙醇水飽和的異戊醇或 n-丁醇酚TE儀器、耗材 透析管和夾離心機和轉頭實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液乙醇,水飽和的異戊醇或
用有機溶劑抽提法從DNA中除去溴化乙錠實驗
欲從經 CsCl 梯度純化的 DNA 中去除溴化乙錠,常用有機溶劑反復抽提的方法。隨后可用透析或沉淀的方法去除 CsCl。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理欲從經 CsCl 梯度純化的 DNA 中去除溴化乙錠,常用有機溶劑反復抽提的方法。隨后可用透析或沉淀的方法去除 CsC
Sephacryl-S1000-層析法去除質粒-DNA-制備
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 Sephacryl S-1000 層析是一個可供選擇的將質粒 DNA 與小分子核酸(DNA 和 RNA ) 分離的方法。這一方法由波士頓麻省總醫院的 F.DeNoto 和 H.Goodman 首先采用,后來由 Gomez-M
離子交換柱層析法(層析實驗簡介)概略
一、??? 原理:有些高分子物質含有一些可以分離的基因,例如-SO3H,-COOH等,因此可以和溶液中的離子產生交換反應。如:R-SO3H+M+ ———— R-S3M+H+或R-NH3OH+CL-? —————? R-NH3CL+OH-這類高分子物質通稱離子交換劑,其中使用最普遍的是離子交換樹脂。由
離子交換層析法濃縮蛋白實驗
實驗方法原理 離子交換層析可用于濃縮蛋白質溶液。因為大多數蛋白質的等電點均低于 8, 所以它們可在 pH 值為 8 的弱離子強度溶液中被陰離子交換樹脂吸附。用離子強度大的溶液可簡單的將它們洗脫下來,達到濃縮的目的。實驗材料 蛋白質溶液儀器、耗材 離子交換樹脂層析柱實驗步驟 1. 準備離子交換樹脂,裝
離子交換層析法濃縮蛋白實驗
實驗方法原理離子交換層析可用于濃縮蛋白質溶液。因為大多數蛋白質的等電點均低于 8, 所以它們可在 pH 值為 8 的弱離子強度溶液中被陰離子交換樹脂吸附。用離子強度大的溶液可簡單的將它們洗脫下來,達到濃縮的目的。實驗材料蛋白質溶液儀器、耗材離子交換樹脂層析柱實驗步驟1. 準備離子交換樹脂,裝配層析柱
離子交換層析法濃縮蛋白實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 離子交換層析可用于濃縮蛋白質溶液。因為大多數蛋白質的等電點均低于 8, 所以它們可在 pH 值為 8 的弱離子強度溶液中被陰離子交換樹脂吸附。用離子強度大的溶液可簡單的將它們洗脫下來,達到濃縮的目的。
離子交換柱層析分離核苷酸實驗_離子交換層析法
本實驗以酵母RNA 為材料, 將RNA 用堿水解成單核苷酸,再用離子交換柱層析進行分離, 最后采用紫外吸收法進行鑒定。旨在了解并掌握RNA 堿水解的原理和方法,掌握離子交換柱層析的分離原理和方法,熟練掌握紫外吸收分析方法。實驗方法原理本實驗以酵母RNA 為材料, 將RNA 用堿水解成單核苷酸,再用離
離子交換層析法
離子交換層析法是以具有離子交換性能的物質作固定相,利用它與流動相中的離子能進行可逆的交換性質來分離離子型化合物的一種方法。⒈ 離子交換劑預處理和裝柱 對于離子交換纖維素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的顆粒,以保證有較好的均勻度,對于已溶脹好的產品則不必經這一步驟。溶脹的交換劑使用前要用稀酸或稀堿處
離子交換層析法
離子交換層析法(ion exchange chromatography,簡稱IEC)是從復雜的混合物中,分離性質相似大分子的方法之一,依據的原理是物質的酸堿性、極性,也就是所帶陰陽離子的不同。電荷不同的物質,對管柱上的離子交換劑有不同的親和力,改變沖洗液的離子強度和pH值,物質就能依次從層析柱中分離
Sephacryl-S1000-層析法去除質粒-DNA-制備物中的小片段核酸
Sephacryl S-1000 層析是一個可供選擇的將質粒 DNA 與小分子核酸(DNA 和 RNA ) 分離的方法。這一方法由波士頓麻省總醫院的 F.DeNoto 和 H.Goodman 首先采用,后來由 Gomez-Marquez 等總結成論文發表于 1987 年。本實驗來源「分子克隆實驗指南
Sephacryl-S1000-層析法去除質粒-DNA-制備物中的小片段核酸
實驗方法原理 Sephacryl S-1000 層析是一個可供選擇的將質粒 DNA 與小分子核酸(DNA 和 RNA ) 分離的方法。這一方法由波士頓麻省總醫院的 F.DeNoto 和 H.Goodman 首先采用,后來由 Gomez-Marquez 等總結成論文發表于 1987 年。實驗材
親和層析法去除交叉反應性抗體實驗
試劑、試劑盒 緩沖液和溶液細胞裂解緩沖液NaOHTris-緩沖鹽溶液TBSTriton X-100 溶菌酶胰 DNA 酶 I制備用于文庫篩選的抗體大腸桿菌培養液儀器、耗材 離心和轉子親和層析柱溴化氫活化的 Sepharose 4B實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存液,緩沖液和試劑的組分請見附錄 12將貯
親和層析法去除交叉反應性抗體實驗
本節介紹一種利用結合細菌蛋白質的基質去除粗制免疫球蛋白中與細菌編碼蛋白質發生反應成分的方法(de Wet et al.1984)。該方法也適用于利用培養的細胞或組織抽提物去除交叉反應抗體。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)下冊,作者:〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒緩沖液和
親和層析法去除交叉反應性抗體實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 緩沖液和溶液 細胞裂解緩沖液 NaOH Tris-緩沖鹽溶液 TBS Triton X-100 溶菌酶
離子交換層析實驗離子交換層析技術
離子交換層析實驗可應用于:(1)分離純化蛋白質;(2)分離氨基酸;(3)分離核酸、核苷酸及其它帶電荷的生物分子。實驗方法原理離子交換層析(Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC)是以離子交換劑為固定相,依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的
離子交換層析實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 離子交換緩沖液儀器、耗材 離子交換層析柱梯度混合器電導表實驗步驟 1. ?配制離子交換層析緩沖液,安裝好層析柱,但以離子交換層析緩沖液取代其中的凝膠過濾緩沖液。?2. ?用起始梯度的緩沖液溶解含蛋白質混合物的樣品。3. ?棄去柱床上部的大部分緩沖液,并將樣品加在凝膠的頂
離子交換層析實驗
基本方案 離子交換層析介質和層析柱的選擇 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑
離子交換層析實驗
離子交換層析技術 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 離子交換層析(Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC)是以離子交換劑為固定相,依據流動相中的組分離
離子交換層析法簡介
離子交換層析法(Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC)是以離子交換劑為固定相,依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。常用的離子交換劑有:離子交換纖維素、離子交換葡聚糖和離子交換樹脂 。
離子交換層析法原理
離子交換層析法(ionexchangechromatography,簡稱IEC)是從復雜的混合物中,分離性質相似大分子的方法之一,依據的原理是物質的酸堿性、極性,也就是所帶陰陽離子的不同。電荷不同的物質,對管柱上的離子交換劑有不同的親和力,改變沖洗液的離子強度和pH值,物質就能依次從層析柱中分離出來
DNA提取中EB的去除實驗方法
Removal of Ethidium Bromide from DNA by Extraction with Organic SolventsJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourn
離子交換層析法蛋白質的純化實驗
離子交換層析在純化蛋白質的層析手段中使用最為廣泛。它對蛋白質的分辨率高,操作簡易,重復性好,成本低。按照離子交換原理,蛋白質可從大量緩沖性溶液中被分離,所以此方法尤適于蛋白質粗提物的初始純化。在分離蛋白質時,速度往往是很重要的。 如蛋白酶的初始分離和不穩定蛋白質的純化。離子交換層析提供了很多加速分離
離子交換層析法蛋白質的純化實驗
實驗方法原理 可進行離子交換的蛋白質在實驗條件下必須有單一電荷。溶液中單一電荷的蛋白質可被離子交換樹脂上的小離子置換(指與蛋白質末端離子的交換);固定在樹脂上。通過提高溶液中相反離子濃度或降低蛋白質所帶電荷數等方法可將蛋白質從樹脂上洗脫下來。利用此法,可根據不同蛋白質電荷性質不同而將其分離開來。若已
離子交換層析法蛋白質的純化實驗
離子交換層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 可進行離子交換的蛋白質在實驗條件下必須有單一電荷。溶液中單一電荷的蛋白質可被離子交換樹脂上的小離子置換(指與蛋白質末端離子的交換
離子交換層析實驗(四)
六、實例: 復雜蛋白質混合物的分離采用離子交換層析分離復合蛋白質混合物的一個典型例子就是從乳清中分離蛋白質。它可以進行一定程度的工業化放大,但也可作為一個廉價的檢測體系用于離子交換劑的評價。實際上, 我們也已經通過這種蛋白質混合物來比較不同供應商所提供的離子交換劑的吸附能力(Hahnetal.,