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試劑、試劑盒 DEPC處理的水 轉錄緩沖液 lOOmmol LDTT RNasin rATPrCTPrUTP rGTP0.5 mmol L m7 G(5＇)ppp(5＇)G DNA 模板 RNA 樣品緩沖液 RNA 載樣緩沖液 MOPS 緩沖液 TE 緩沖液實驗步驟 一材料與設備1)DEPC：處理的水2) 轉錄緩沖液（5X):200 mmol/LTris-HCI(pH7.9),30 mmol/LMgCl2,lOmmol/L. 亞精胺，50 mmol/LNaCl3)lOOmmol/LDTT4)RNasin5)rATP,rCTP，rUTP，各 2.5 mmol/L6)rGTP0.5 mmol/L7)m7 G(5＇)ppp(5＇)G,5 mmol/L8)DNA 模板，1?2 mg/ml9)RNA 樣品緩沖液：10 mmoL/I. 去離子甲酰胺，3.5 ml37% 甲醛，2 mlMOPS 緩沖液10)RNA 載樣緩沖液:50% 甘油，l......閱讀全文
生物的遺傳物質基礎是核酸（nucleic acid),它也是基因的基本結構，它們的化學組成分子結構符合遺傳物質的穩定性、連續性及多樣性的要求。 （一)核酸的化學組成 核酸結構的基本單位是核苷酸（nucleic acid)，每個核苷酸由1個磷酸、1個五碳糖和1個堿基3部分組成。核
核糖體失活展示系統 實驗材料 RTA 基因
實驗材料 RTA 基因試劑、試劑盒 結合（或漂洗）緩沖液生物素瓊脂糖洗脫緩沖液儀器、耗材 RNeasy?mini 試劑盒實驗步驟 這里介紹的方法概括了表達載體的構建以及篩選功能蛋白的 RIDS 循環系統的構建。3.1 RIDS 表達載體的構建首先，需要準備含編碼 T7 啟動子、蛋白質文庫、連接子
實驗材料RTA 基因試劑、試劑盒結合（或漂洗）緩沖液生物素瓊脂糖洗脫緩沖液儀器、耗材RNeasy?mini 試劑盒實驗步驟這里介紹的方法概括了表達載體的構建以及篩選功能蛋白的 RIDS 循環系統的構建。3.1 RIDS 表達載體的構建首先，需要準備含編碼 T7 啟動子、蛋白質文庫、連接子、RTA 和
1)什么是TNT偶聯網織紅細胞裂解物系統？TNT偶聯網織紅細胞裂解物系統為研究人員提供了一種可供選擇的真核體外翻譯系統，一種單管、偶聯轉錄/翻譯系統。將轉錄產物摻入到翻譯混合物中，TNT偶聯網織紅細胞裂解物系統簡化了體外翻譯的過程，縮短了翻譯所需的時間。標準兔網織紅細胞裂解物翻譯系統所用的RNA來源
基因的功能探索是生命科學研究的永恒主題。近幾年以CRISPR-Cas9技術的發展讓直接在高等生物體內進行基因的功能研究成為可能。但除了DNA之外， DNA的轉錄產物--RNA在生命活動中也發揮著極其重要的作用，且與癌癥等多種疾病的發生密切相關。因此，對RNA進行功能研究和錯誤RNA的糾正，成為了
前 言 基因的功能探索是生命科學研究的永恒主題。近幾年以CRISPR-Cas9技術的發展讓直接在高等生物體內進行基因的功能研究成為可能。但除了DNA之外， DNA的轉錄產物--RNA在生命活動中也發揮著極其重要的作用，且與癌癥等多種疾病的發生密切相關。因此，對RNA進行功能研究和錯誤RNA
前 言基因的功能探索是生命科學研究的永恒主題。近幾年以CRISPR-Cas9技術的發展讓直接在高等生物體內進行基因的功能研究成為可能。但除了DNA之外， DNA的轉錄產物--RNA在生命活動中也發揮著極其重要的作用，且與癌癥等多種疾病的發生密切相關。因此，對RNA進行功能研究和錯誤RNA的糾
實驗材料 對數生長期的 HcLa 細胞 與所使用啟動子相對的 RNA 聚合酶 酵母 tRNA 經超盧斷裂鮭精 DNA
實驗材料 對數生長期的 HcLa 細胞與所使用啟動子相對的 RNA 聚合酶酵母 tRNA經超盧斷裂鮭精 DNAS1 核酸酶 KlenowDNA 聚合酶儀器、耗材 MWCO3500(1 ml cm) 透析袋Dounce 勻漿器 Gorrex 離心管15 mlFalcon 或 Corning 離心管Ec
體外實驗有兩種策略；一是將 包 含 Po ly( A) 位點目標基因的質粒與無細胞提取物共同孵育，以 使 RNA 聚 合 酶 II 轉錄目標基因，并對最初的轉錄進行加工；另一種策略是利用標準的噬菌體聚合酶驅動系統合 成 前 mRNA，然后與無細胞提取物共同孵 育 。實驗材料對數生長期的 HcLa 細
ATP與ATP酶：ATP酶，又稱為三磷酸腺苷酶，是一類能將三磷酸腺苷（ATP）催化水解為二磷酸腺苷（ADP）和磷酸根離子的酶，這是一個釋放能量的反應。在大多數情況下，能量可以通過傳遞而被用于驅動另一個需要能量的化學反應。這一過程被所有已知的生命形式廣泛利用。部分ATP酶是內在膜蛋白（Integral
剪接體 ( spliccosome ) 是真核生物中從初級轉錄物中切除內含子的催化單位。剪接體包含 U1、U2、U4/U6、U5 snRNP 等 4 種小核糖核蛋白顆粒（snRNP ) 和大量的非 snRNP 蛋白。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法原理剪接體 ( splicc
引物延伸法可用于 RNA 的作圖和 RNA5＇端的定暈。在此方法中，將過量的 5＇端標記的單鏈 RNA 引物與待測的 RNA 雜交，隨后用反轉錄酶延伸該引物，生成句 RNA 模板互補的 cDNA。再在變性條件下通過聚丙烯酰胺凝膠電泳測定 cDNA 的長度，即可確定 RNA 端的位置，并且 cDNA
實驗材料 T4 多核苷酸激酶 AMV 反轉錄酶 酵母 tRNA 試劑、試
實驗材料 T4 多核苷酸激酶AMV 反轉錄酶酵母 tRNA試劑、試劑盒 10X 激酶緩沖液 5X 雜交緩沖溶液 Tris-HCl MgCl2 DTT 放線菌酮 D dNTP RNasin 甲酰胺上樣染液 SephadexG-25 NaAc 乙醇 [r-32P]ATP儀器、耗材 水浴 雜交爐 電泳設備
實驗方法原理 剪接體 ( spliccosome ) 是真核生物中從初級轉錄物中切除內含子的催化單位。剪接體包含 U1、U2、U4/U6、U5 snRNP 等 4 種小核糖核蛋白顆粒（snRNP ) 和大量的非 snRNP 蛋白。實驗材料 HeLa 細胞試劑、試劑盒 PBS-Earle緩沖液磷酸鹽緩
實驗方法原理 剪接體 ( spliccosome ) 是真核生物中從初級轉錄物中切除內含子的催化單位。剪接體包含 U1、U2、U4/U6、U5 snRNP 等 4 種小核糖核蛋白顆粒
實驗步驟 一、引言 選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及 時 獲 取 所 需 數 量 和 質 量 的 重z組蛋白非常關鍵。選 擇 了 錯 誤 的表達宿主可 能 導 致 蛋 白 質錯 誤 折 疊 或
五、哺 乳 動 物 細 胞以前通常認為哺乳動物表達方法是重組蛋白表達效率最低的方法。然 而 ，最近的研究進展已經極大地提高了哺乳動物細胞系的表達水平(詳 見 第 15章)。例如, 有報道稱利用穩定轉染的中國倉鼠卵巢(Chinese hamster ovary,C H O )細胞，重組抗體的表
重組蛋白是研究生物學過程的重要工具。需要使用表達系統來對其進行制備。合適表達系統的選擇取決于重組蛋白的特性、重組蛋白的預期應用以及該系統能否生產足夠量的蛋白質。作者： 伯吉斯等,主譯：陳薇，本實驗來自「蛋白質純化指南」實驗步驟一、引言選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及
cDNA文庫構建 實驗方法原理 cDNA 文庫是指某生物某發育時期所轉錄的全部 mRNA 經反轉
cDNA文庫構建可以：（1）用于分離全長基因進而開展基因功能研究；（2）篩選目的基因并直接用于表達；（3）提供構建分子標記連鎖圖譜的所用探針。實驗方法原理cDNA 文庫是指某生物某發育時期所轉錄的全部 mRNA 經反轉錄形成的 cDNA 片段與某種載體連接而形成的克隆的集合。經典 cDNA 文庫構建