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[實驗原理]免疫印跡（Western blotting 或 Immunoblotting）一般由凝膠電泳、樣品的印跡和免疫學檢測三個部分組成。第一步是做SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，使待測樣品中的蛋白質按分子量大小在凝膠中分成帶。第二步把凝膠中已分成條帶的蛋白質轉移到一種固相支持物上，用得最多的材料是硝酸纖維素膜(NC膜)和PVDF膜，蛋白轉移的方法多用電泳轉移（轉移電泳），它又有半干法和濕法之分。第三步是用特異性的抗體檢測出已經印跡在膜上的所要研究的相應抗原。免疫檢測的方法可以是直接的和間接的。現在多用間接免疫酶標的方法，在用特異性的第一抗體染色后，再用酶標的第二抗體（堿性磷酸酶（Ap）或辣根過氧化物酶（HRP）標記的抗第一抗體的抗體）染色，再加酶的底物顯色，通過膜上的顏色或X光底片上暴光的條帶來顯示抗原的存在。為了使初學者能夠在實驗過程中觀察到所要檢測的目的蛋白，本實驗使用的是非變性的聚丙烯酰胺凝膠電泳，以保持GFP的天然活......閱讀全文
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解，并且導致了免疫新策略的產生，免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。 一、GST pull-down實驗 GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶，GST pull-down實驗是一個行之有效的驗
實驗方法原理重組人生長激素（rhGH）與胰島素生長因子-1（ICF-Ⅰ）是目前運動員濫用嚴而又難以檢測的內源性激素類興奮劑。以IGF-Ⅰ作為目標分析物，利用分子生物學方法構建綠色熒光蛋白（GFP）與IGF-Ⅰ的融合蛋白GFP-IGF。GFP是目前應用廣泛的一種生物報告分子，具有穩定、無毒害、無需底物
[實驗原理]SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中最經常使用的一種方法。它是將蛋白樣品同離子型去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS）以及巰基乙醇一起加熱，使蛋白變性，多肽鏈內部的和肽鏈之間的二硫鍵被還原，肽鏈被打開。打開的肽鏈靠疏水作用與SDS結合而帶負電荷，電泳時在電場作用下，肽鏈在凝
[實驗原理]SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中最經常使用的一種方法。它是將蛋白樣品同離子型去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS）以及巰基乙醇一起加熱，使蛋白變性，多肽鏈內部的和肽鏈之間的二硫鍵被還原，肽鏈被打開。打開的肽鏈靠疏水作用與SDS結合而帶負電荷，電泳時在電場作用下，肽鏈在凝
2.3 蛋白質分析 為了分析AAV Rep和Cap蛋白質表達，按照2.2部分所述進行質粒轉染。轉染后48小時，將培養物刮到冷PBS/Mg(PBS含有5mM MgCl2)，細胞低速離心沉淀收獲。細胞沉淀在冰上用200ml STM-NP緩沖液(25mM蔗糖,10mM Tr