真核細胞表達系統2
在病毒感染晚期，由于大量外源蛋白的表達引起昆蟲細胞的裂解，胞質內的物質釋放出來，與 目的蛋白混在一起，從而使蛋白的純化工作變得很困難，另外水解酶的釋放會降解重組蛋白。為了克服以上這些困難，科學工作者先后嘗試用絲蛾肌動蛋白基因啟動子或桿狀病毒ie-1基因啟動子表達外源蛋白，但效果都不明顯。Farrel等介紹了一種新型的鱗翅目昆蟲細胞表達系統，該系統主要包括3個調節外源蛋白表達序列：（1）Bombyx mori的肌動蛋白基因啟動子；（2）Bombyx mori的核型多角體病毒(BmNPV)的立早基因ie-1(編碼俄IE-1蛋白，該蛋白是種轉錄激活因子，可在體外激活肌動蛋白基因啟動子)；（3）BmNPV的同源重復序列3(HR3)可作為肌動蛋白基因啟動子的增強子。三者協同作用，可使轉錄活性提高 1000倍以上，從而大大地提高外源蛋白的表達水平。另外目前還有一種新型的宿主范圍廣的雜合核多角體病毒(HyNPV)被應用于昆蟲細胞表達系統的......閱讀全文
影響桿狀病毒表達系統的表達因素介紹
在桿狀病毒系統中，要獲得蛋白質的有效表達，首先要選擇合適的轉染載體。依據表達的蛋白質屬融合型或非融合型，選擇單啟動子型或多啟動子型。另外目的基因的選擇要注意以下因素： ①該目的基因應不含內含子； ②去除其mRNA 5′端非編碼區的異源序列； ③翻譯啟始密碼子AUG應處于適當的序列之間（如K
畢赤酵母表達系統能在釀酒酵母里表達么
不太可能，Invitrogen的商業化畢赤酵母表達系統屬于甲醇酵母表達系統，用的是畢赤酵母獨有的AOX1啟動子，由甲醇誘導；釀酒酵母用的啟動子大多用的是GAPDH或Gal啟動子等，由葡萄糖和半乳糖誘導。雖然兩種菌株有很多基因具有較高的同源性，但不能通用。建議使用畢赤酵母表達系統，釀酒酵母表達量低，誘
Tornado表達系統實現RNA高水平表達和功能活性
RNA適配體是一種短RNA，可通過結合細胞內的分子或蛋白質調節細胞內進程。盡管RNA適配體具有潛在的應用價值，但它并沒有其他RNA技術廣泛應用，主要問題是它們不能高濃度表達，從而不能有效調節蛋白質功能，同時也阻礙了RNA裝置，例如RNA代謝物生物傳感器在哺乳動物細胞中的應用。通常，基于RNA的生
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——小規模表達
實驗方法原理分析方案依賴于表達蛋白的天然特性。實驗材料草地夜蛾（Sf9）細胞高滴度的重組桿狀病毒儲液試劑、試劑盒PBS1×SDS樣品緩沖液儀器、耗材含 10% 胎牛血清（FBS）的TNM-FH昆蟲培養基60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱（濕度可選）15 ml 聚丙烯離心管帶有 GH-3.7 水平轉
轉基因動物表達系統組成
轉基因動物表達系統，包括外源基因、表達載體和受體細胞等，基因組的轉移則是細胞核移植和動物克隆技術，人工合成與設計基因、全基因乃至基因組的轉基因技術是合成生物學。
關于蛋白表達系統的基本介紹
蛋白表達系統是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系。通過這個體系可以實現外源基因在宿主中表達的目的。一般由以下幾個部分組成： 1、宿主。表達蛋白的生物體。可以為細菌、酵母、植物細胞、動物細胞等。由于各種生物的特性不同，適合表達蛋白的種類也不相同。 2、載體。載體的種類與宿主相匹配。根
Pichia酵母表達系統操作方法
我先說我有的質粒和菌株：PPIC9K，PPIC9，PPICZahphaA，B，C以及一個改造的PPIC9K載體，EcoRI和BamHI雙酶切，C末端引入了一個6histag菌株：GS115，KM71，X33，以及十幾個空載體對照菌株我的酵母表達Protocol：>10ug質粒用Sal線性化，加1/1
桿狀病毒表達系統的應用
桿狀病毒是近年來被廣泛用于高效表達外源蛋白的載體系統，本文就桿狀病毒表達系統的生物學特性、轉染載體、重組病毒的篩選、基因表達調控及其發展應用等方面作一概述。
桿狀病毒昆蟲細胞表達系統
實驗步驟一、桿狀病毒表達載體最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒，其基因組含有一段外源核酸序列，通常為編碼目標蛋白質的dDNA，在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成，其位于病毒基因組多角體座位，替代了非必需的野生型多角體基因。在實驗室中
myTXTL?－體外蛋白表達系統的特點
體外蛋白表達系統 Arbor Biosciences是基于大腸桿菌的體外蛋白表達系統：myTXTL無細胞體外蛋白表達系統(Arbor Biosciences中國代理)? 在大腸桿菌蛋白表達實驗中，我們經常會遇到蛋白表達不出來、表達出的蛋白沒有活性、蛋白表達過程中容易形成包涵體等情況，還要分析出現這
常用的酵母表達系統的介紹
酵母表達系統作為一種后起的外源蛋白表達系統，由于兼具原核以及真核表達系統的優點，正在基因工程領域中得到日益廣泛的應用，應用此系統可高水平表達蛋白，且具有翻譯后修飾功能，故被認可為一種表達大規模蛋白的強有力的工具。 常用的酵母表達系統： 一、釀酒酵母(Saccharomycescerevisi
簡述甲醇營養型酵母表達系統
甲醇酵母表達系統是應用最廣泛的酵母表達系統。甲醇酵母主要有漢森酵母屬(Hansenula)，畢赤酵母屬(Pichia)，球擬酵母屬(Torulopsis)等，并以畢赤酵母屬(Pichia)應用最多。 甲醇酵母的表達載體為整合型質粒，載體中含有與酵母染色體中同源的序列，因而比較容易整合入酵母染色
桿狀病毒表達系統的應用
用桿狀病毒做載體，可高效表達外源基因，到目前為止已有幾百個包括動植物、病毒、細菌、真菌的基因在昆蟲細胞或幼蟲體內得到高效表達。這個表達體系的主要特點是可以獲得大量抗原性、免疫原性較好的，與天然蛋白功能相似的可溶性重組蛋白。這一特點優于細菌、酵母和哺乳動物細胞表達體系。重組桿狀病毒感染昆蟲細胞后，可以
無細胞蛋白表達系統的選擇
圖1.? 與細胞內蛋白表達相比，無細胞蛋白表達系統能夠顯著地節約時間。 與基于細胞的蛋白表達系統相比較，無細胞蛋白表達系統具有獨特的優勢，包括節約時間、提高具有功能的、可溶的、全長蛋白的總體產量。本文介紹了根據模板類型、期望產率以及下游實驗等因素來選擇無細胞蛋白表達系統的標準。
畢赤酵母表達系統的特點
自從1987年Cregg等首次用巴斯德畢赤酵母（Pichia pastoris）作為宿主表達外源蛋白以來,作為一種新的高效的表達系統，畢赤酵母越來越引起人們的重視，到1995年，已有四十多種外源蛋白在該宿主菌中獲得表達。而最近幾年每年報道的在畢赤酵母中表達的外源基因就有幾十種，且一年比一年多，與其它
痘苗病毒系統基因表達實驗（二）
實驗方法原理含有 pT7 控制的外源基因（本實驗「重組痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂質體轉染」）的重組質粒，通過同源重組可整合到痘苗病毒中,并制備重組病毒儲液。將此病毒儲液與 vTF7-3 共同感染貼壁或懸浮細胞，在培養過程中，外源基因被高效的 T7 RNA 聚合酶轉錄，并在感染細胞的細胞質完成
關于蛋白表達系統的分析介紹
原核蛋白表達系統既是最常用的表達系統，也是最經濟實惠的蛋白表達系統。原核蛋白表達系統以大腸桿菌表達系統為代表，具有遺傳背景清楚、成本低、表達量高和表達產物分離純化相對簡單等優點，缺點主要是蛋白質翻譯后缺乏加工機制，如二硫鍵的形成、蛋白糖基化和正確折疊，得到具有生物活性的蛋白的幾率較小。 酵母蛋
痘苗病毒系統基因表達實驗（一）
本節介紹依賴于在哺乳動物細胞質合成噬菌體 T7 RNA 聚合酶的瞬時細胞質表達系統。首先，將感興趣的基因插入質粒中，使其位于 T7 RNA 聚合酶啟動子（PT7）的控制下。應用脂質體轉染，重組質粒進入感染了 vTF7-3 的細胞質中，而 vTF7-3 是一種能編碼噬菌體T7 RNA聚合酶的重組痘苗病
PNAS描述新型基因表達調控系統
報道：科學家們開發了一個調控基因表達的新系統，該系統只需將特定DNA序列簡單插入到基因的任意一側，就可以實現劑量依賴性的基因表達抑制。這項成果發表在美國國家科學院院刊PNAS雜志上，文章認為這一系統有望替代Tet基因表達調控系統。 這是首次采用適體酶核糖開關有條件地knockdown病毒基
知識分享：Teton表達調控系統
1992年Goseen等人成功的利用原核基因調控元件構建了四環素（tetracycline,Tet）真核細胞基因調控表達系統。目前，此系統已被廣泛應用于基因功能和基因治療領域的研究。 1、四環素調控表達系統的基本原理 Tet調控表達系統通過誘導藥物（如Tet）改變調控蛋白的構
桿狀病毒昆蟲細胞表達系統
實驗步驟 一、桿狀病毒表達載體 最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒，其基因組含有一段外源核酸序列，通常為編碼目標蛋白質的dDNA，在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成
桿狀病毒表達系統用于表達融合型蛋白的轉染質粒
是一類早期構建的轉染質粒，它包括pAC系列[4],如pAC101、pAC311、pAC360等。在每個載體中，多角體蛋白基因啟動子下游ATG啟始密碼后含有一個單一的BamHⅠ酶切位點，當外源基因和多角體基因的讀碼框架正確時，就可以獲得含1個或幾個多角體蛋白N端氨基酸的融合型外源基因。
桿狀病毒表達系統的影響蛋白質表達的因素
在桿狀病毒系統中，要獲得蛋白質的有效表達，首先要選擇合適的轉染載體。依據表達的蛋白質屬融合型或非融合型，選擇單啟動子型或多啟動子型。另外目的基因的選擇要注意以下因素：①該目的基因應不含內含子；②去除其mRNA 5′端非編碼區的異源序列；③翻譯啟始密碼子AUG應處于適當的序列之間（如Kozak 序列）
關于甲醇酵母表達系統的關鍵因素—表達載體的介紹
首先，甲醇酵母中沒有穩定的質粒，所以其表達載體采用整合型質粒。利用醇氧化酶（甲醇代謝的關鍵酶）基因-1（AOX1）的啟動子（PAOX1）和轉錄終止子（3′AOX1）構建成整合型表達載體。PAOX1是一個極強的啟動子，醇氧化酶的產量最高可占甲醇酵母中可溶性蛋白質的30%[2]，所以能使外源蛋白質在
真核細胞轉染實驗
真核細胞的轉染 實驗材料 真核細胞 試劑、試劑盒 脂質體 轉染液
真核細胞的簡介
由真核細胞構成的生物稱為真核生物。在真核細胞的核中，DNA與組蛋白等蛋白質共同組成染色體結構，在核內可看到核仁。在細胞質內膜系統很發達，存在著內質網、高爾基體、線粒體和溶酶體等細胞器，分別行使特異的功能。 真核生物包括我們熟悉的動植物以及微小的原生動物、單細胞海藻、真菌、苔蘚等。真核細胞具有一
真核細胞的類別
真核生物包括我們熟悉的動植物以及微小的原生動物、單細胞海藻、真菌、苔蘚等。真核細胞具有一個或多個由雙膜包裹的細胞核，遺傳物質包含于核中，并以染色體的形式存在。染色體由少量的組蛋白及某些富含精氨酸和賴氨酸的堿性蛋白質構成。真核生物進行有性繁殖，并進行有絲分裂。
真核細胞的簡介
由真核細胞構成的生物稱為真核生物。在真核細胞的核中，DNA與組蛋白等蛋白質共同組成染色體結構，在核內可看到核仁。在細胞質內膜系統很發達，存在著內質網、高爾基體、線粒體和溶酶體等細胞器，分別行使特異的功能。 真核生物包括我們熟悉的動植物以及微小的原生動物、單細胞海藻、真菌、苔蘚等。真核細胞具有一
真核細胞的類別
真核生物包括我們熟悉的動植物以及微小的原生動物、單細胞海藻、真菌、苔蘚等。真核細胞具有一個或多個由雙膜包裹的細胞核，遺傳物質包含于核中，并以染色體的形式存在。染色體由少量的組蛋白及某些富含精氨酸和賴氨酸的堿性蛋白質構成。真核生物進行有性繁殖，并進行有絲分裂。
真核細胞轉染實驗
學習和掌握外源基因導入真核細胞的主要方法——脂質體介導的轉染。了解外源基因進入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白），為染色準備實驗材料。實驗材料真核細胞試劑、試劑盒脂質體 轉染液儀器、耗材CO2孵箱 離心管 6孔板