實驗概要ELISA方法檢測IFN-α的表達并根據標準曲線定量。主要試劑 Human IFN-α標準品實驗步驟1. 建立標準曲線:將500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,31.3pg/ml,15.6pg/ml,7.8 pg/ml,0 pg/ml的標準品各0.1ml依次加入一排8孔中,每個標準品均做復孔。2. 加樣:樣品孔加細胞培養上清,100μl/孔,輕輕混勻30s,每個樣品均做復孔。3. 37°C反應90min,甩去板內的液體,用1×洗滌液洗滌反應板(每孔內加入350μl洗滌液),并去除水滴;反復洗滌5次,每次均需拍干。4. 將準備好的1×Biotin工作液按每孔0.1ml依次加入(TMB空白顯色孔除外)。37°C反應60min。5. 甩盡板內液體,用1×洗滌液洗滌反應板(每孔內加入350μl洗滌液),并取出水滴;反復洗滌5次,每次均需拍干。6. 將準備好的1×HRP工作液按每孔0.......閱讀全文
根據最近兩次的結核病流調看,我國目前結核病疫情和結核分枝桿菌感染的情況呈現兩個特點。首先,我國的潛伏結核感染率為44.5%-50.2%(用PPD試驗檢測),應用ELISPOT方法檢測的LTBI率為15.4%-30.7%;其次,臨床結核病患者中有85.6%的活動性肺結核是菌陰患者。由此可見,潛伏結核感
一、 實驗準備1. 標本制備:2. zui小化非特異性結合: 二、凋亡1.凋亡的檢測方法:網站和其它2.PI染色法3.Annexin V 法4.TUNNEL法 三、細胞因子1.激活的細胞因子2.CBA 四、血小板
細胞因子(cytokine)是由細胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物質的統稱。在免疫應答過程中,細胞因子在免疫調節、炎癥應答、腫瘤轉移等生理和病理過程中起重要作用。細胞因子的檢測不僅是基礎免疫研究的有較手段,同時在臨床疾病診斷、病程觀察、療效判斷及細胞因子治療監測方面具有重要價值。但是,由于細胞因子
細胞因子(cytokine)是由細胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物質的統稱。在免疫應答過程中,細胞因子在免疫調節、炎癥應答、腫瘤轉移等生理和病理過程中起重要作用。細胞因子的檢測不僅是基礎免疫研究的有較手段,同時在臨床疾病診斷、病程觀察、療效判斷及細胞因子治療監測方面具有重要價值。但是,由于細胞因子
細胞因子(cytokine)是由細胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物質的統稱。在免疫應答過程中,細胞因子在免疫調節、炎癥應答、腫瘤轉移等生理和病理過程中起重要作用。細胞因子的檢測不僅是基礎免疫研究的有較手段,同時在臨床疾病診斷、病程觀察、療效判斷及細胞因子治療監測方面具有重要價值。但是,由于細胞因子
人畜共患病, 是動物與人類之間自然傳播的一種疾病。近年來,受到飼養方式轉變、動物流動頻繁、生態環境破壞等影響,我國人畜共患病流行呈上升趨勢,不但給人類和動物健康帶來巨大威脅,同時也給畜牧、飼料等行業造成巨大經濟損失,并引起社會恐慌。 為了有效防控人畜共患病的發生,提高甘肅省畜牧業生產能力,
六、流式檢測細胞染色基本過程(以全血為例)1、 收獲細胞:肝素鈉抗凝的靜脈血,按1:1與培養基混勻,加刺激劑,同時加蛋白轉運抑制劑(參照說明書), 混勻后,37℃,5%二氧化碳培養4-6小時2、 阻斷Fc受體:用于消除非特異性的結合
實驗概要ELISA方法檢測IFN-α的表達并根據標準曲線定量。主要試劑 Human IFN-α標準品實驗步驟1. 建立標準曲線:將500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,31.3pg/ml,15.6pg/ml,7.8 pg/ml,0 pg/ml的標準品各0
干擾素(IFN)是一類具有廣譜抗病毒活性的蛋白質,僅在同種細胞上發揮作用。根據其來源、理化及生物學性質的不同,可分為IFN-α、IFN-β、IFN-γ3種干擾素。其中,IFN-α主要由白細胞產生,IFN-β由成纖維細胞產生,IFN-γ主要由T細胞在免疫應答中受到抗原或絲裂原活化后分泌產生。3種干擾素
人類唾液中富含多種成分,如免疫球蛋白、激素、游離氨基酸、無機離子等,這些成分很好地反映了機體生物學功能及狀態。除此之外,經口服或注射的藥物亦可發現于其中。然而,這些成分并非是一成不變的,機體在受到疾病的侵擾下,體內免疫水平發生改變,分泌到唾液中的物質種類和含量發生相應改變,唾液用于疾病的診斷越來
(二)目的克隆的鑒定經過初步篩選獲得的陽性克隆,下一步必須對帶有目的序列的克隆做進一步篩選和鑒定。鑒定一般有幾種常用方法:(1)分子雜交;(2)免疫學檢測;(3)DNA測序;(4)蛋白質活性篩選;(5)基因互補實驗。1. 分子雜交核酸分子雜交有多種方法:原位雜交、點雜交及Southern雜交等。原理
ELISPOT 技術簡介 隨著酶聯免疫分析技術在醫學及生物學領域的廣泛應用 , 使體外檢測各種細胞因子及抗體研究有了新的突破。在研究免疫應答機制時以往常用用酶聯免疫吸附法( ELISA )檢測體液中游離的細胞因子( CK )或抗體,但由于游離的循環抗體或 CK 的半哀期不同,使之在體液中
ELISPOT 技術簡介 隨著酶聯免疫分析技術在醫學及生物學領域的廣泛應用 , 使體外檢測各種細胞因子及抗體研究有了新的突破。在研究免疫應答機制時以往常用用酶聯免疫吸附法( ELISA )檢測體液中游離的細胞因子( CK )或抗體,但由于游離的循環抗體或 CK 的半哀期不同,使之在體液中
腫瘤壞死因子(TNF)是由激活的單核細胞巨噬細胞受內毒素刺激后產生的一種分子量為17 000的蛋白質。其中,由巨噬細胞產生的稱TNF-α,是巨噬細胞介導細胞毒效應的細胞因子;由淋巴細胞產生的稱TNF-β。TNF在體內具有廣泛的生物學活性:可作為免疫應答中的一種中間介質,既有抗病效應,又有致病效應
HBsAg的定量檢測是目前監測和預測抗乙肝病毒治療后應答的新工具,結合HBV DNA及乙肝病毒e抗原(HBeAg)的陰轉和血清轉換,我們能更準確地預測患者的近期和遠期抗病毒治療的療效。因此,該檢測已在臨床上得以廣泛開展,特別是被用于判定抗病毒治療療效,以及根據早
流式細胞術工作原理是在細胞分子水平上通過單克隆抗體對單個細胞或其他生物粒子進行多參數、快速的定量分析。它可以高速分析上萬個細胞,并能同時從一個細胞中測得多個參數,具有速度快、精度高、準確性好的優點,是當代最先進的細胞定量分析技術之一。光源、液流通路、信號檢測傳輸和數據的分析系統是流式細胞儀的主要組成
流式細胞分析(Flow cytometry,FCM)是以高能量激光照射高速流動狀態下被熒光色素染色的單細胞或微粒,測量其產生的散射光和發射熒光的強度,從而對細胞(或微粒)的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學性狀及功能狀態等進行定性或定量檢測的一種現代細胞分析技術,它具有如下幾個特點:①標本只要