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    30分鐘的精確定量——染料法熒光定量PCR

    聚合酶鏈式反應,又稱為PCR,是眾所周知的分子生物學技術之一,可以說占據了整個分子生物學領域的半壁江山。PCR技術除了廣泛應用于生命科學的基礎研究外,隨著近年來,以PCR為基礎的分子診斷技術在臨床診斷各種疾病的應用,提高了疾病的正確診斷率,給各種疾病的治療帶來了極大的便利,特別是在本次爆發的新冠病毒肺炎疫情中,更是體現了其舉足輕重的作用。 大體來說,PCR實驗主要包括三大主要的熱循環步驟:變性、退火、延伸。對于不同的實驗應用,PCR的設置可能做相應的調整,以獲得一些特殊的實驗結果,如產率提高,特異性增強或反應時間縮短等. 多年以來,PCR的基本原理一直未變,但隨著DNA聚合酶和試劑性能的大幅提升,以及其他相關材料的不斷創新,PCR實驗方法也在不斷改進。&nb......閱讀全文

    實時熒光定量PCR

    聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增。在擴增反應結束之后,我們可以通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析,也可以通過放射性核素摻入標記后的光密度掃描來進行定量的分析。無論定性還是定量分析,分析的都是PCR終產物。但是在許多

    如何選擇熒光定量PCR儀?

    熒光定量PCR 因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的今天,也許對你來說,最難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算,更要詳細研究各種極富誘惑力的宣傳

    熒光定量PCR儀選擇要點

    光定量PCR 因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的今天,也許對你來說,最難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算,更要詳細研究各種極富誘惑力的宣傳資

    解析熒光定量PCR儀選擇有哪些要點及誤區

     熒光定量PCR 因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的今天,也許對你來說,zui難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀,面對各種不同性能的產品,您又該如何選擇呢?今天巴玖小編為您講解一下熒光定量PCR儀選擇要點及誤區

    解析熒光定量PCR儀選擇有哪些要點及誤區

    熒光定量PCR 因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的今天,也許對你來說,zui難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀,面對各種不同性能的產品,您又該如何選擇呢?今天巴玖小編為您講解一下熒光定量PCR儀選擇要點及誤區首先建議大家

    熒光定量PCR儀選擇要點及誤區

    熒光定量PCR 因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的今天,也許對你來說,最難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算,更要詳細研究各種極富誘惑力的宣傳資料

    熒光定量PCR儀常見誤區及其選擇要點

    熒光定量PCR 因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的今天,也許對你來說,zui難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算,更要詳細研究各種極富誘惑力的宣傳

    熒光定量PCR儀常見誤區及其選擇要點

    熒光定量PCR 因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的今天,也許對你來說,zui難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算,更要詳細研究各種極富誘惑力的宣傳

    熒光定量PCR儀選擇要點及誤區

      熒光定量PCR 因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的今天,也許對你來說,最難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算,更要詳細研究各種極

    如何選擇熒光定量檢測法之SYBR Green I

    總的說來,熒光檢測技術可大致分為兩大類:通用型的熒光染料檢測法和高特異性的熒光探針法。前者主要是利用熒光染料(如SYBR Green I)與雙鏈DNA分子結合發光的特性來指示擴增產物的增加,優點是:無需另外設計熒光探針,無需特別優化條件,簡便易行,成本較低,能適用于任何一款定量PCR儀,缺點

    QPCR常見問題及其分析

    一般來講,進行real-time qPCR MasterMix都是2×的濃縮液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR靈敏度高,所以每個樣品至少要做3個平行孔,以防在后面的數據分析中,由于Ct相差較多或者SD太大,無法進行統計分析。通常來講,反應體系的引物終濃度為10

    PCR疑難問題解答第二篇:熒光定量PCR(一)

           實時熒光定量PCR(quantitative PCR, qPCR)通過對PCR擴增反應中的每一個循環產物熒光信號的實時監測從而實現對起始模板的定性及定量分析。目前它主要通過兩種方式——熒光染料或者熒光標記的探針對PCR產物進行標記跟蹤,實時在

    QPCR常見問題及其分析

    一般來講,進行real-time qPCR MasterMix都是2×的濃縮液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR靈敏度高,所以每個樣品至少要做3個平行孔,以防在后面的數據分析中,由于Ct相差較多或者SD太大,無法進行統計分析。通常來講,反應體系的引物終濃度為10

    熒光定量PCR儀技術及其在醫學中的應用

    劉向國 謝國明 (重慶醫科大 重慶市 400016)摘 要 熒光定量PCR儀技術是一種新的核酸定量技術,該技木在PCR儀反應系統中引人了熒光標記探針,具有可實時監測,高靈敏性,高特異性和高精確性的特點,極大地克服了原有PCR儀技術的不足,擴大了PCR儀的應用范圍。關鍵詞 定量pcr;熒光;基因Flu

    QPCR常見問題及其分析

    一般來講,進行real-time qPCR MasterMix都是2×的濃縮液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR靈敏度高,所以每個樣品至少要做3個平行孔,以防在后面的數據分析中,由于Ct相差較多或者SD太大,無法進行統計分析。通常來講,反應體系的引物終濃度為100-400

    如何選購一款適合自己的熒光定量PCR儀?

    1、儀器的檢測通量在購買定量PCR儀的時候要根據實驗實的需要來選擇不同通量的儀器。目前市面上的熒光定量PCR的檢測通量小到16個多到384個。如果進行一般的基因表達研究或病原體檢測,實在不必購買昂貴的儀器,96孔的通量足夠用;需要尋找要新藥靶點和疾病標記的實驗室可以考慮購買384孔板的儀器。假如經費

    如何做好熒光定量PCR實驗

    熒光定量PCR實驗指南一、基本步驟:1、目的基因(DNA和mRNA)的查找和比對;2、引物、探針的設計;3、引物探針的合成;4、反應體系的配制;5、反應條件的設定;6、反應體系和條件的優化;7、熒光曲線和數據分析;8、標準品的制備;二、技術關鍵:1、 目的基因(DNA和mRNA)的查找和比

    購買熒光定量PCR儀是會遇到哪些誤區

    在基因擴增儀的幾種類型中,熒光定量PCR因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。實驗者要購買一款合適的熒光定量PCR,需要考慮各方面的因素,首先要分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算,更要詳細研究各種各樣的宣傳資料。面對各種不同性能的產品,我們該如何選擇呢

    購買熒光定量PCR儀是會遇到哪些誤區

     在基因擴增儀的幾種類型中,熒光定量PCR因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。實驗者要購買一款合適的熒光定量PCR,需要考慮各方面的因素,首先要分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算,更要詳細研究各種各樣的宣傳資料。面對各種不同性能的產品,我們

    如何確定轉基因拷貝數

    鑒定轉基因植物的第一步就是要確定被轉基因已經穩定的整合到了染色體上。第二步任務就是評估有多少個轉基因拷貝,以及每個轉基因的表達水平如何。一般經過上游表達載體的設計構建以及下游轉化體系的建立、轉化品系的篩選鑒定等一系列步驟后,即獲得 T 0 代轉基因植物。在轉化過程中,外源 DNA 隨機插入植物

    ABI實時定量PCR常見問題

    1.      定量PCR儀的開關機順序是怎樣的?    按照正確的開關機順序操作,有助于延長儀器的使用壽命,減少儀器出故障的頻率。開機順序:先開電腦,待電腦完全啟動后再開啟定量PCR儀主機,等主機面

    Real time PCR mRNA 定量實驗路線選擇F&Q

    問題一:Real time PCR mRNA的相對定量和絕對定量的選擇;測定mRNA, 一般采用相對定量,因為絕對定量,標準品的制備和定量是有難度的,具體可以參考這篇文獻:http://www.biotnt.com/news/news_105.htm;“Analysis of Relative Ge

    熒光定量PCR試劑盒

    熒光定量PCR試劑盒 熒光定量PCR又可以分為TaqMan探針和SYBR Green I熒光染料兩種方法。比較而言,探針雜交技術在原理上更為嚴格,所得數據更為精確;熒光染料技術則成本更為低廉,實驗設計更為簡便。在選擇實驗方案時要根據實驗目的和對數據精度的要求來決定。1. TaqMan探針法

    定量PCR(Polymerase Chain Reaction)技術

    定量PCR(Polymerase Chain Reaction)技術有廣義概念和狹義概念。廣義概念的定量PCR技術是指以外參或內參為標準,通過對PCR終產物的分析或PCR過程的監測,進行 PCR起始模板量的定量。廣義概念下的定量PCR技術可以分為五種類型:(1)外參法+終產物分析。所謂“外參法”是指

    實時定量PCR應用中的優化方案

     聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction, PCR)自誕生之日起就決定了它不僅是一種高敏感、高特異的檢測核酸分子的定性方法,而且也是一個能對核酸分子進行精確定量的有力工具[1]。隨著分子生物學技術研究的不斷進展,定量PCR技術取得了突飛猛進的發展,不僅建立了一系

    轉基因食品的檢測方法,你知道多少?

      從1996年轉基因作物開始進行大規模商業化以來,它在全球的種植面積迅速擴大,目前全球轉基因作物種植面積已達25億公頃,同時轉基因作物的種類和轉基因性狀也在不斷豐富。但是轉基因作物作為一種新物種,其對人體健康、生態平衡是否具有危害還未確定。許多國家以立法或其他形式要求對轉基因產品進行標記。我國于2

    定量PCR常見問題(二)

    8.      什么是背景校正?多長時間執行一次背景校正?    背景校正程序測量定量PCR儀所使用的反應管和水的空白熒光強度。在運行校正程序期間,定量PCR儀在10分鐘內連續讀取背景校正板的熒光強度

    BCEIA 2015之PCR儀大盤點

      分析測試百科網訊 2015年10月27日,國內分析測試行業影響力最大的展會2015 BCEIA在北京國家會議中心舉辦。作為業內規模和質量最高的盛會之一,此次BCEIA上主要有三家廠商展出了四款最新的PCR技術,分析測試百科網小編進行了詳細盤點。 

    定量PCR技術

     定量PCR(Polymerase Chain Reaction)技術有廣義概念和狹義概念。廣義概念的定量PCR技術是指以外參或內參為標準,通過對PCR終產物的分析或PCR過程的監測,進行PCR起始模板量的定量。  廣義概念下的定量PCR技術可以分為五種類型:(1)外參法+終產物分析。所謂“外參法”

    Real-time qPCR手冊---手把手教你從菜鳥到高手

    3.3 SYBR@Green 法SYBR@Green I是一種結合于小溝中的雙鏈DNA結合染料,與雙鏈DNA結合后,其熒光大大增強。這一性質使其用于擴增產物的檢測非常理想。SYBR@Green I 的最大吸收波長約為497nm,發射波長最大約為520nm。在PCR反應體系中,加入過量SYBR@Gre

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