定量WesternBlot內參質控的掌握技巧
Western Blot是生物修煉的一大實驗，現在不做定量Western Blot，都不敢自詡學霸的了，暗暗擦汗的有沒有？在討論如何從Western Blot中獲得定量數據之前，先定義一下我們所說的“定量”是什么意思是非常有用的，何為定量，必須符合下列準則： ? 使用一個定義的過程進行檢測，即Western Blot。? 這個過程產生一個可重復的結果，即是精確度。? 測量反映了一個“真實”的結果，即是準確度。 定量Western Blot除了需要進行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上樣電泳、轉膜、靶蛋白抗體孵育、顯色等步驟以外，是一定要檢測內參的，也就是內部參照（Internal Control），目的是校正蛋白質轉印和上樣過程中導致的實驗誤差，保證實驗結果的準確性。對于哺乳動物細胞表達來說，內參通常指由管家基因編碼表達的蛋白(Housekeeping Proteins)，它們在各組織......閱讀全文
定量Western－Blot內參質控的掌握技巧
?Western Blot是生物修煉的一大實驗，現在不做定量Western Blot，都不敢自詡學霸的了，暗暗擦汗的有沒有？在討論如何從Western Blot中獲得定量數據之前，先定義一下我們所說的“定量”是什么意思是非常有用的，何為定量，必須符合下列準則：?? 使用一個定義的過程進行檢測，即We
定量Western－Blot指南：內參質控
上期小編為大家介紹了以單一看家蛋白作為定量Western Blot內參蛋白的分析方法，這次咱不得不說說以全蛋白為內參的分析方法。 期刊JBC（The Journal of Biological Chemistry）在Western Blot數據要求中指出，對于半定量蛋白表達的實驗，最佳
定量Western－Blot指南：內參質控
上期小編為大家介紹了以單一看家蛋白作為定量Western Blot內參蛋白的分析方法，這次咱不得不說說以全蛋白為內參的分析方法。?期刊JBC（The Journal of Biological Chemistry）在Western Blot數據要求中指出，對于半定量蛋白表達的實驗，最佳的內參為全蛋白
血清western－blot怎樣選擇內參
由于血漿或血清中很難找到一個穩定表達的蛋白，常見的在組織中比較常用的內參蛋白如肌動蛋白，GAPDH等，嚴格講并不適合血漿或血清；可以考慮用立春紅染色 或考染做loading control（這種方法在不少文獻中都有報道，是大家認可的）Blood上有些文章 用的是立春紅染色做control
上樣質控和抗體驗證用于Western－blot定量
今天的帖子的靈感來自于我和同事在教他們SDS-PAGE和western blot的實驗交談中。 他們對于qRT-PCR（R）和流式細胞術（R）精通，特別關心如何以及為什么使用某些上樣質控，還有其它的技術被使用驗證，蛋白質表達和抗體特異性的變化。樣品準備和上樣質控理想地，上樣質控是多步驟過程的一部分，
上樣質控和抗體驗證用于Western－blot定量
今天的帖子的靈感來自于我和同事在教他們SDS-PAGE和western blot的實驗交談中。 他們對于qRT-PCR（R）和流式細胞術（R）精通，特別關心如何以及為什么使用某些上樣質控，還有其它的技術被使用驗證，蛋白質表達和抗體特異性的變化。 樣品準備和上樣質控 理想地，上樣質控是多步驟過程的
Western－Blot內參的選擇不容忽視
要檢測一個基因的表達產物是否正確，或者比較表達產物量的相對變化，首選方法是Western Blot。因為Western Blot操作相對簡單方便，既可以定性分析表達產物，同時還可以指示目的蛋白量的相對變化。雖然，順利的時候Western Blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――
Western－blot如何進行實驗質控？
WB實驗總做不好，那么如何進行WB實驗質控呢？做過WB實驗的小伙伴都經歷過成像時忐忑不安，出來結果時的彷徨無措，為什么條帶沒有出啦，為什么背景這么高，為什么受傷的總是我，看著旁邊小伙伴漂亮的結果圖，心生羨慕嫉妒，那么小編給大家整理總結了如何進行WB的質控和注意哪些檢查點。蛋白樣品：準備好裂解液后，使
Western－blot如何進行實驗質控
WB實驗總做不好，那么如何進行WB實驗質控呢？ 做過WB實驗的小伙伴都經歷過成像時忐忑不安，出來結果時的彷徨無措，為什么條帶沒有出啦，為什么背景這么高，為什么受傷的總是我，看著旁邊小伙伴漂亮的結果圖，心生羨慕嫉妒，那么小編給大家整理總結了如何進行WB的質控和注意哪些檢查點。 蛋白樣品
Western－Blot實驗操作進階技巧（一）
除非是Western blot實驗方面的高手，要不就像在我看來，Western blot發展至今好像與其1979年剛被發明出來的時候一樣一樣，同樣也是根據蛋白不同的大小（或電荷）進行電泳分離，然后轉膜，利用抗體篩選出目標蛋白。 多年來這種技術已經成為了蛋白研究方面的一種主要技術，研究人員可以利
電泳做Western－Blot實驗的方法技巧
電泳做western blot的時候，大家往往會摸索一抗、二抗的濃度，封閉時間，曝光時間等等，而每次變換其中的一個條件就需要從新跑膠、轉膜，甚至重新提蛋白，這樣會浪費大量的時間。其實完全沒有必要這樣。一次轉膜后，將PVDF膜晾干，裁減成小塊，保存起來，用的時候取出一塊，沒有任何影響。這對于摸索條
western－blot電泳時內參上樣量怎么確定
內參一般是指待測樣品中含有的一個表達水平穩定的蛋白質，而不是與待測樣品相區分的另外一種樣品。樓主所說的內參是否與其他的什么概念混淆了？如果給更具體的信息，我可以繼續回答。Marker上樣量同兩個因素有關，一個是產品本身的濃度，這方面不需要知道確切的濃度，只需要看廠商的推薦用量即可；另一個是膠的性質，
western－blot－能做出內參－為什么沒有目的條帶
western blot能做出內參 沒有目的條帶就說明至少在操作上是沒有問題的同時，試劑，凝膠，膜，抗體等等都沒有問題那么最大的可能就是抗體未能識別出目的蛋白，故未能做出目的條帶也有可能是組分內的目的蛋白總量太少，未能達到檢出限
線性范圍對western－blot定量有什么影響
當western blot進行定量時，許多人認為只需將感興趣的蛋白質成像，剝離，重孵育內參蛋白，然后將其用于歸一化，而不考慮線性范圍的檢測。 然而，與此有關的幾個誤區，越來越多的期刊現在要求一個適當的定義的標準化流程，包括線性檢測的證明，還包括所有草稿。 線性檢測是條帶強度與膜上目標蛋白成
線性范圍對western－blot定量有什么影響？
當western blot進行定量時，許多人認為只需將感興趣的蛋白質成像，剝離，重孵育內參蛋白，然后將其用于歸一化，而不考慮線性范圍的檢測。 然而，與此有關的幾個誤區，越來越多的期刊現在要求一個適當的定義的標準化流程，包括線性檢測的證明，還包括所有草稿。線性檢測是條帶強度與膜上目標蛋白成比例的區域。
為什么要從化學發光轉換到熒光檢測？
Western blot成像方法取決于二抗的標記物，常用的方法有基于酶促反應的化學發光法，基于熒光染料的可見熒光方法和紅外熒光方法，那么我們應該如何選擇呢？*合適的Western blot實驗方法取決于您期望獲得哪些信息，也就是取決于您的實驗目的，小編比較了現有方法的優缺點，并分享了自己的心得，希望
為什么要從化學發光檢測轉換到熒光檢測
Western blot成像方法取決于二抗的標記物，常用的方法有基于酶促反應的化學發光法，基于熒光染料的可見熒光方法和紅外熒光方法，那么我們應該如何選擇呢？最合適的Western blot實驗方法取決于您期望獲得哪些信息，也就是取決于您的實驗目的，小編比較了現有方法的優缺點，并分享了自己的心得，希望
為什么要從化學發光轉換到熒光檢測
Western blot成像方法取決于二抗的標記物，常用的方法有基于酶促反應的化學發光法，基于熒光染料的可見熒光方法和紅外熒光方法，那么我們應該如何選擇呢？ *合適的Western blot實驗方法取決于您期望獲得哪些信息，也就是取決于您的實驗目的，小編比較了現有方法的優缺點，并分享了自己
為什么要從化學發光檢測轉換到熒光檢測
Western blot成像方法取決于二抗的標記物，常用的方法有基于酶促反應的化學發光法，基于熒光染料的可見熒光方法和紅外熒光方法，那么我們應該如何選擇呢？ 最合適的Western blot實驗方法取決于您期望獲得哪些信息，也就是取決于您的實驗目的，小編比較了現有方法的優缺點，并分享了自己
定量western－blot疑問解答：為什么需要驗證抗體？
驗證抗體對于結果的一致性和重復性是至關重要的，即確認抗體能特異性識別感興趣的蛋白，抗體與其他蛋白的交叉反應性情況。在您的論文提交給期刊發表之前，經常需要驗證抗體的特異性，但并非所有人都花時間進行驗證。或者很多人都認為他們使用抗體進行了免疫共沉淀驗證，因而不需要再通過蛋白質印跡進行驗證。然而，抗體與抗
定量western－blot疑問解答—為什么需要驗證抗體？
驗證抗體對于結果的一致性和重復性是至關重要的，即確認抗體能特異性識別感興趣的蛋白，抗體與其他蛋白的交叉反應性情況。在您的論文提交給期刊發表之前，經常需要驗證抗體的特異性，但并非所有人都花時間進行驗證。或者很多人都認為他們使用抗體進行了免疫共沉淀驗證，因而不需要再通過蛋白質印跡進行驗證。然而，抗體與抗
Western－Blot－(AP)
主要試劑1. Membrane Blocking buffer:5% Milk ? 0.05% of Tween 20 PBS2. antibody dilution buffer: PBS 0.05% of Tween20 1.0% Milk(or BSA)?3. washing buffer:?
Western－Blot－Protocol
一、提取抗原蛋白將提取RNA途中留存的樣品，加入150μl 100%酒精充分混勻，靜置5min(RT), 2000×g , 4℃離心5min,?吸取上清至新管中,?加入750μl異丙醇,?混勻,?靜置10min(RT), 12000×g, 4℃離心10min,?棄上清,?加入1ml 0.3mol/L
western－blot原理
Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，經過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體上，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢
Western－Blot詳解
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。 本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術: 一、原理 二、分類
定量western－blot實驗為什么需要用驗證抗體
?驗證抗體對于WB結果的一致性和重復性是至關重要的，即確認抗體能特異性識別感興趣的蛋白，抗體與其他蛋白的交叉反應性情況。在您的論文提交給期刊發表之前，經常需要驗證抗體的特異性，但并非所有人都花時間進行驗證。或者很多人都認為他們使用抗體進行了免疫共沉淀驗證，因而不需要再通過蛋白質印跡進行驗證。然而，抗
定量western－blot實驗為什么需要用驗證抗體？
驗證抗體對于WB結果的一致性和重復性是至關重要的，即確認抗體能特異性識別感興趣的蛋白，抗體與其他蛋白的交叉反應性情況。在您的論文提交給期刊發表之前，經常需要驗證抗體的特異性，但并非所有人都花時間進行驗證。或者很多人都認為他們使用抗體進行了免疫共沉淀驗證，因而不需要再通過蛋白質印跡進行驗證。然而，抗體
定量western－blot實驗為什么需要用驗證抗體
驗證抗體對于WB結果的一致性和重復性是至關重要的，即確認抗體能特異性識別感興趣的蛋白，抗體與其他蛋白的交叉反應性情況。在您的論文提交給期刊發表之前，經常需要驗證抗體的特異性，但并非所有人都花時間進行驗證。或者很多人都認為他們使用抗體進行了免疫共沉淀驗證，因而不需要再通過蛋白質印跡進行驗證。然而
Western－Blot實驗（二）
小巧的體格，卻一應俱全，可以靈活控制多種應用程序，包括化學發光，熒光，DNA/蛋白膠。可以滿足對實驗室各種樣品成像的要求。是目前市面上唯一的一款既可進行Cy3, Cy5, Cy2 多色熒光LED成像，又可在700和800nm處進行近紅外激光定量熒光western 成像系統。這達到對成像最完美
Western－Blot詳解（二）
11、NaN3 0.02% 疊氮鈉(有毒，戴手套操作)，溶于磷酸緩沖鹽溶液(PBS)。12、Tris緩沖鹽溶液(TBS):20mmol/LTris/HCL(pH7.5)，500mmol/LnaCl。13、Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1。14、過氧化物酶標記的第二