PCR的反應條件
PCR反應條件為溫度、時間和循環次數。 1. 溫度與時間的設置：基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸3個溫度點。在標準反應中，雙鏈DNA在90~95℃變性，再迅速冷卻至40~60℃，引物退火并結合到靶序列上，然后快速升溫至70~75℃，在 TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。 2. PCR反應時間：變性時間一般2~3min，可以使模板DNA完全變性。復性時間一般為30~60s，足以使引物與模板之間完全結合。PCR延伸反應的時間可根據待擴增片段的長度而定，一般1kb以內的DNA片段，延伸時間1min是足夠的。 3. 循環次數：循環次數決定PCR擴增程度。PCR循環次數主要取決于模板DNA的濃度。一般的循環次數選在30-40次之間，循環次數越多，非特異性產物的量亦隨之增多......閱讀全文
PCR的反應條件
PCR反應條件為溫度、時間和循環次數。 1. 溫度與時間的設置：基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸3個溫度點。在標準反應中，雙鏈DNA在90~95℃變性，再迅速冷卻至40~60℃，引物退火并結合到靶序列上，然后快速升溫至70~75℃，在 TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。
PCR擴增的反應條件
PCR擴增的反應條件：10×擴增緩沖液 10ul；4種dNTP混合物 各200umol/L；引物 各10～100pmol；模板DNA 0.1～2ug；Taq DNA聚合酶 2.5u；Mg2+ 1.5mmol/L；加雙或三蒸水至 100ul。PCR是一種體外DNA 擴增技術，是在模板DNA、引物和4種
PCR反應條件的選擇
PCR反應條件為溫度、時間和循環次數。 溫度與時間的設置：基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40 ～60℃，引物退火并結合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物鏈
PCR擴增的反應條件
PCR擴增的反應條件：10×擴增緩沖液 10ul；4種dNTP混合物 各200umol/L；引物 各10～100pmol；模板DNA 0.1～2ug；Taq DNA聚合酶 2.5u；Mg2+ 1.5mmol/L；加雙或三蒸水至 100ul。PCR是一種體外DNA 擴增技術，是在模板DNA、引物和4種
PCR反應條件的選擇
PCR反應條件為溫度、時間和循環次數。 溫度與時間的設置：基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40 ～60℃，引物退火并結合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物
PCR反應條件的調節
1、 溫度與時間的設置：基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40 ～60℃，引物退火并結合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對于較短靶基因(長度為100
PCR反應體系與反應條件
?標準的PCR反應體系： ?10×擴增緩沖液? ?10ul ?4種dNTP混合物? ?各200umol/L ?引物? ? ?各10～100pmol ?模板DNA? ? 0.1～2ug ? Taq DNA聚合酶? ?2.5u ?
PCR反應體系與反應條件
標準的PCR反應體系： 10×擴增緩沖液 10ul 4種dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug Taq DNA聚合酶 2.5u
PCR反應體系與反應條件
標準的PCR反應體系：10×擴增緩沖液 10ul4種dNTP混合物 各200umol/L引物 各10～100pmol 模板DNA? 0.1～2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol加雙或三蒸水至 100ulPCR反應五要素參加P
PCR反應條件如何選擇？
PCR反應條件為溫度、時間和循環次數。溫度與時間的設置：基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對
PCR技術反應條件的選擇
PCR反應條件為溫度、時間和循環次數。?溫度與時間的設置: 基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法,雙鏈DNA在90～95℃變性,再迅速冷卻至40 ～60℃,引物退火并結合到靶序列上,然后快速升溫至70～75℃,在Taq DNA 聚合酶的作用下,使引物鏈沿模
PCR技術的反應條件選擇
PCR反應條件為溫度、時間和循環次數。 溫度與時間的設置：基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在Taq DNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模
PCR標準反應體系及反應條件
標準的PCR反應體系： 10×擴增緩沖液 10ul 4種dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L
小鼠細胞－PCR反應體系與反應條件
小鼠細胞?PCR反應體系與反應條件標準的PCR反應體系：? 10×擴增緩沖液 10ul? 4種dNTP混合物 各200umol/L? 引物 各10～100pmol ? 模板DNA 0.1～2ug ? Taq DNA聚合酶 2.5u ? M
小鼠細胞－PCR反應體系與反應條件
小鼠細胞?PCR反應體系與反應條件標準的PCR反應體系：? 10×擴增緩沖液 10ul? 4種dNTP混合物 各200umol/L? 引物 各10～100pmol ? 模板DNA 0.1～2ug ? Taq DNA聚合酶 2.5u ? M
PCR反應的主要條件有哪些？
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+。
PCR反應條件的選擇及優化
PCR技術已經在生物學研究和臨床醫學檢驗領域中得到了廣泛的應用，PCR技術也日臻完善。PCR技術操作簡便，特異性強，敏感度極高，正因為敏感度高，很容易受其他因素的影響，因此要得到準確可靠的反應結果，需根據不同的模板，摸索最適合的條件，配制出PCR反應試劑。聚合酶鏈反應必須具備下述基本條件：①模板核酸
PCR儀反應的五個條件
PCR儀反應的五個條件1、引物??引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR?產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則： ①引物長度：?15-30bp，常用為
PCR反應體系和條件(三)
PCR技術概論?????聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。它具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點；能在一個試管內將所要研究的目的基因或某一DNA片段于數小時內擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能
PCR反應體系和條件(六)
PCR污染與對策????? PCR反應的zui大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生。污染原因 (一)標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸
PCR反應體系和條件(四)
PCR反應體系與反應條件??標準的PCR反應體系： 10×擴增緩沖液 ??? 10ul 4種dNTP混合物 ?各200umol/L 引物 ????各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug ?Taq DNA聚合酶 ?2.5u Mg2+
PCR反應體系和條件(五)
PCR擴增產物分析???? PCR產物是否為特異性擴增，其結果是否準確可靠，必須對其進行嚴格的分析與鑒定，才能得出正確的結論。PCR產物的分析，可依據研究對象和目的不同而采用不同的分析方法。凝膠電泳分析：PCR產物電泳，EB溴乙錠染色紫外儀下觀察，初步判斷產物的特異性。PCR產物片段的大小應與預計的
PCR反應各個組分和條件
PCR反應組分引 物引物與模板配對的長度應至少為17個核苷酸，zui高不宜超過30個核苷酸，zui佳長度為20-24個核苷酸，如需插入酶切位點，應在酶切位點5'端多加幾個堿基，有利于酶切。引物的（G+C）%含量組成應均勻，盡量避免含有相同的堿基多聚體；兩個引物中（G+C）%含量應盡量相似；引
PCR反應體系和條件(二)
PCR反應條件的選擇 PCR反應條件為溫度、時間和循環次數。? 溫度與時間的設置： 基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40 ～60℃，引物退火并結合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在Taq DNA
PCR反應體系和條件(一)
標準的PCR反應體系： 10×擴增緩沖液 10ul 4種dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug Taq DNA聚合酶 2.5u M
多重PCR反應的優化方向反應條件的優化
由于在一個多重PCR反應體系中有多對引物,而且擴增的模板片段長度也不盡相同,所以各對引物的擴增效率和擴增速度也不相同。由于多重PCR反應總是遵循較小片段優先擴增的原則,各對引物所要求最佳PCR條件也不盡相同(設計多對引物進行多重PCR時,應使各引物所需PCR擴增條件盡可能一致),因此在選擇多重PCR
PCR反應體系與反應條件－冷凍離心機
PCR反應體系與反應條件??標準的PCR反應體系：? 10×擴增緩沖液 10ul 4種dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug Taq DNA聚合酶
PCR反應體系與反應條件2－冷凍離心機
PCR反應體系與反應條件 標準的PCR反應體系： 10×擴增緩沖液 10ul 4種dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug Taq
人類正常細胞株－PCR反應體系與反應條件
標準的PCR反應體系：? 10×擴增緩沖液 10ul? 4種dNTP混合物 各200umol/L? 引物 各10～100pmol ? 模板DNA 0.1～2ug ? Taq DNA聚合酶 2.5u ? Mg2+ 1.5mmol
PCR反應體系與反應條件－高速冷凍離心機
PCR反應體系與反應條件 標準的PCR反應體系： 10×擴增緩沖液 10ul 4種dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug