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梯度洗脫（gradient elution）又稱為梯度淋洗或程序洗提。在氣相色譜中，為了改善對寬沸程樣品的分離和縮分析間周期，廣泛采用程序升溫的方法。而在液相色譜中則采用梯度洗脫的方法。在同一個分析周期中，按一定程度不斷改變流動相的濃度配比，稱為梯度洗脫。從而可以使一個復雜樣品中的性質差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達到良好的分離目的。梯度洗脫的優點：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。梯度洗脫的原理： 流動相由幾種不同極性的溶劑組成，通過改變流動相中各溶劑組成的比例改變流動相的極性，使每個流出的組分都有合適的容量因子k'，并使樣品種的所有組分可在最短時間內實現最佳分離。梯度洗脫特點： 提高柱效改善檢測器的靈敏度當樣品中的一個峰的k'值和最后一個峰的k'值相差幾十倍至幾百倍時，使用梯度洗脫效果特別好。梯度洗脫中為保證流速的穩定......閱讀全文
高效液相色譜儀在進行多成分的復雜樣品分離時，經常會碰到前面的一些成分分離不完全，后面的一些成分分離度太大，且出峰很晚和峰形較差。為了使保留值相差很大的多種成分在合理的時間內全部洗脫并相互分離，往往要用到梯度洗脫技術。在高效液相色譜儀中流速（壓力）梯度洗脫和溫度梯度洗脫效果不大，而且會帶來一些不利影響
高效液相色譜儀在進行多成分的復雜樣品分離時，經常會碰到前面的一些成分分離不完全，后面的一些成分分離度太大，且出峰很晚和峰形較差。為了使保留值相差很大的多種成分在合理的時間內全部洗脫并相互分離，往往要用到梯度洗脫技術。在高效液相色譜儀中流速（壓力）梯度洗脫和溫度梯度洗脫效果不大，而且會帶來一些不利影響
液相色譜儀在進行多成分的復雜樣品分離時，經常會碰到前面的一些成分分離不完全，后面的一些成分分離度太大，且出峰很晚和峰形較差。為了使保留值相差很大的多種成分在合理的時間內全部洗脫并相互分離，往往要用到梯度洗脫技術。在液相色譜儀中流速（壓力）梯度洗脫和溫度梯度洗脫效果不大，而且會帶來一些不利影響，因此，
一、參考百度百科：http://baike.baidu.com/view/971281.htm 在所有色譜技術中，液相色譜法（liquid chromatography，LC）是最早（1903年）發明的，但其初期發展比較慢，在液相色譜普及之前，紙色譜法、氣相色譜法和薄層色譜法是色譜分析法的主流。到了
新手學液相色譜，會碰到兩種洗脫方式：等度洗脫和梯度洗脫，什么情況下會用到等度，哪些條件下用梯度，有什么不同？ 1、洗脫的改變與不改變的配比不同 等度洗脫：流動相的組成比例和流速恒定不變。 梯度洗脫：改變流動相的濃度配比。 2、它們的定義不同 等度洗脫定義：液相色譜操
新手學液相色譜，會碰到兩種洗脫方式：等度洗脫和梯度洗脫，什么情況下會用到等度，哪些條件下用梯度，有什么不同？ 1、洗脫的改變與不改變的配比不同 等度洗脫：流動相的組成比例和流速恒定不變。 梯度洗脫：改變流動相的濃度配比。 2、它們的定義不同 等度洗脫定義：液相色譜操
等度洗脫是指實驗過程中（做樣過程）從頭到尾只用一種流動相。也就是只用一個泵，輸送同一種流動相。 梯度洗脫是指在同一個分析周期中隨著時間的變化按一定程序梯度性地改變洗脫液的比例(濃度配比、成分、離子強度、溶液極性等)或pH，以期將層析柱上不同的組分洗脫出來的方法。從而可以使一個復雜樣品中性質（極
等度洗脫是指實驗過程中(做樣過程)從頭到尾只用一種流動相。也就是只用一個泵，輸送同一種流動相。 梯度洗脫是指在同一個分析周期中隨著時間的變化按一定程序梯度性地改變洗脫液的比例(濃度配比、成 分、離子強度、溶液極性等)或pH，以期將層析柱上不同的組分洗脫出來的方法。從而可以使一個復雜樣
兩元梯度洗脫液相色譜儀分類方法有多種。1、按功能可分：分析型兩元梯度洗脫液相色譜儀和制備型兩元梯度洗脫液相色譜儀。2、按作用可分：兩元梯度洗脫定量分析液相色譜儀和兩元梯度洗脫定性分析液相色譜儀。3、按應用范圍可分：專用型兩元梯度洗脫液相色譜儀和通用型兩元梯度洗脫液相色譜儀。4、按分離目的可分：化驗室
HPLC系統一般由 輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器、數據記錄及處理裝置 等組成。其中輸液泵、色譜柱、檢測器是關鍵部件。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機、自動進樣器、預柱或保護柱、柱溫控制器等，現代HPLC儀還有微機控制系統，進行自動化儀器控制和數據處理
2．泵的使用和維護注意事項 為了延長泵的使用壽命和維持其輸液的穩定性，必須按照下列注意事項進行操作： ①、防止任何固體微粒進入泵體，因為塵埃或其它任何雜質微粒都會磨損柱塞、密封環、缸體和單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相最好在玻璃容器內蒸餾，而常用的方
(2)平衡緩沖液離子交換層析的基本反應過程就是離子交換劑平衡離子與待分離物質、緩沖液中離子間的交換，所以在離子交換層析中平衡緩沖液和洗脫緩沖液的離子強度和pH 的選擇對于分離效果有很大的影響。平衡緩沖液是指裝柱后及上樣后用于平衡離子交換柱的緩沖液。平衡緩沖液的離子強度和pH 的選擇首先要保證
離子交換劑的總交換容量通常以每毫克或每毫升交換劑含有可解離基團的毫克當量數（meq / mg或meq / ml）來表示。通常可以由滴定法測定。陽離子交換劑首先用HCl處理，使其平衡離子為H?。再用水洗至中性，對于強酸型離子交換劑，用NaCl充分置換出H?，再用標準濃度的NaOH滴定生成的HCl，
實驗方法原理 可進行離子交換的蛋白質在實驗條件下必須有單一電荷。溶液中單一電荷的蛋白質可被離子交換樹脂上的小離子置換（指與蛋白質末端離子的交換）；固定在樹脂上。通過提高溶液中相反離子濃度或降低蛋白質所帶電荷數等方法可將蛋白質從樹脂上洗脫下來。利用此法，可根據不同蛋白質電荷性質不同而將其分離開來。若已
等度洗脫是指實驗過程中（做樣過程）從頭到尾只用一種流動相。也就是只用一個泵，輸送同一種流動相。 梯度洗脫是指在同一個分析周期中隨著時間的變化按一定程序梯度性地改變洗脫液的比例（濃度配比、成分、離子強度、溶液極性等）或pH，以期將層析柱上不同的組分洗脫出來的方法。從而可以使一個復雜樣品中性質（極性）差
柱層析的基本裝置及基本操作目前，最常用的層析類型是各種柱層析，下面就簡述柱層析的基本裝置及操作方法，薄層層析的裝置和操作將在后面詳細討論。(1)柱層析的基本裝置柱層析的基本裝置，如圖2－21 。(2)柱層析的基本操作柱層析的基本操作包括以下一些步驟：①裝柱柱子裝的質量好與差，是柱層析法能否成功分離純
離子交換層析法 實驗方法原理 可進行離子交換的蛋白質在實驗條件下必須有單一電荷。溶液中單一電荷的蛋
離子交換層析在純化蛋白質的層析手段中使用最為廣泛。它對蛋白質的分辨率高，操作簡易，重復性好，成本低。按照離子交換原理，蛋白質可從大量緩沖性溶液中被分離，所以此方法尤適于蛋白質粗提物的初始純化。在分離蛋白質時，速度往往是很重要的。 如蛋白酶的初始分離和不穩定蛋白質的純化。離子交換層析提供了很多加速分離
⑷ 洗脫當我們選定好洗脫液后，洗脫的方式可分為簡單洗脫、分步洗脫和梯度洗脫三種。簡單洗脫：柱子始終用同樣的一種溶劑洗脫，直到層析分離過程結束為止。如果被分離物質對固定相的親合力差異不大，其區帶的洗脫時間間隔（或洗脫體積間隔）也不長，采用這種方法是適宜的。但選擇的溶劑必須很合適方能使各組分的分配系數較
2009年4月25日下午，質譜沙龍第十八期活動在解放軍307醫院實驗樓舉行。來自二炮總醫院、AB公司、朝陽醫院、空軍總醫院、清華大學醫學院、中科院動物研究所、解放軍307醫院的各位專家、學生20余人。 第十八期質譜沙龍活動現場 307醫院藥物臨床試驗機構副主任 劉澤源博士
2010年11月6日下午，第二十九期質譜沙龍活動在北京大學人民醫院（北京大學第二臨床醫院）舉行。來自解放軍第二炮兵總醫院、北京大學人民醫院、AB SCIEX公司、天津博納艾杰爾科技有限公司、北京艾米諾醫學研究有限公司等三十余位專家、學者、技術工程師等參加了本次沙龍活動。第二十九期質譜沙
1、洗脫的改變與不改變的配比不同等度洗脫：流動相的組成比例和流速恒定不變。梯度洗脫：改變流動相的濃度配比。2、它們的定義不同等度洗脫定義：液相色譜操作中，等度洗脫即在樣品組分的分析周期中，流動相的組成比例和流速恒定不變的洗脫方式。與梯度洗脫對應。梯度洗脫定義：梯度洗脫又稱為梯度淋洗或程序洗脫。在同一
1、洗脫的改變與不改變的配比不同等度洗脫：流動相的組成比例和流速恒定不變。梯度洗脫：改變流動相的濃度配比。2、它們的定義不同等度洗脫定義：液相色譜操作中，等度洗脫即在樣品組分的分析周期中，流動相的組成比例和流速恒定不變的洗脫方式。與梯度洗脫對應。梯度洗脫定義：梯度洗脫又稱為梯度淋洗或程序洗脫。在同一
蛋白質/多肽液相分析中的流動相選擇有機溶劑可將吸附在疏水界面的蛋白質洗脫（圖14）。在梯度洗脫期間，當有機溶劑量達到針對每一蛋白質的特定濃度時，蛋白質就會從疏水界面上解吸，繼續順著柱向下，從而從柱中洗脫。 圖14. 當有機改性劑的濃度達到特定值時，蛋白質從疏水界面洗脫。乙腈。在多肽的反相色譜分離時最
5. 正相色譜與反相色譜 正相色譜是指固定相的極性高于流動相的極性，因此，在這種層析過程中非極性分子或極性小的分子比極性大的分子移動的速度快，先從柱中流出來。 反相色譜是指固定相的極性低于流動相的極性，在這種層析過程中，極性大的分子比極性小的分子移動的速度快而先從柱中流出。&
色譜, 2021, 39(1): 10-14 DOI: 10.3724/SP.J.1123.2020.07042 微型述評 液相色譜梯度洗脫中的譜帶壓縮效應 郝衛強*, 劉麗娟, 沈巧銀郝衛強《色譜》青年編委 個人簡介 博士,研究員,1976年出生。 1994年就讀于中國藥科大學藥
液相色譜儀梯度洗脫（溶劑程序）是通過改變流動相組成來調整組分k值，改變分離因子α值，以達到在zui短時間內實現zui優分離的目的。一、對色譜泵的要求：色譜泵在任何情況下都要保持高精度。 1、流速要穩定平滑，重現性好。 2、溶劑混合要可靠充分：（1）準確、重現的自動溶劑混合。
系統體積被定義為從梯度形成點到色譜柱前端的體積。系統體積用于聚焦梯度的設計。如圖1所示，本試驗所用儀器配置下的系統體積是3.0 mL。 設計聚焦梯度第1步在2.47分鐘洗脫3號色譜峰的溶劑濃度在較早的時間點上形成。如圖3所示，檢測器和梯度形成點之間的偏移量等于系統體積加上柱體積。用于這臺特
使用高效液相色譜儀時，不要做以下幾種：流動相不過濾由于灰塵或任何其他雜質顆粒會磨損柱塞、密封圈、氣缸體和單向閥，所以移動相中的任何固體顆粒都應提前清除。流動相最好在玻璃容器中蒸餾，常用的方法是過濾。可使用微孔過濾器（0.2μm或0.45μm）泵的入口應連接到砂濾棒(或片)上輸液泵過濾器應經常清洗或更
蛋白質/多肽液相分析中的流動相選擇有機溶劑可將吸附在疏水界面的蛋白質洗脫（圖14）。在梯度洗脫期間，當有機溶劑量達到針對每一蛋白質的特定濃度時，蛋白質就會從疏水界面上解吸，繼續順著柱向下，從而從柱中洗脫。圖14. 當有機改性劑的濃度達到特定值時，蛋白質從疏水界面洗脫。乙腈。在多肽的反相色譜分離時最常