細胞消化過度會對流式凋亡實驗有影響嗎
因為是誘導凋亡的實驗,細胞加藥處理后,貼壁細胞會因為活力喪失而脫壁漂浮,而這部分細胞正是你需要的,所以加藥處理完后要收集全部培養上清,少量PBS洗瓶內剩下的細胞,洗的PBS與之前收集的上清合并。胰酶消化。消化完畢用之前收集的培養基中止消化。離心后PBS再洗一遍。離心,棄上清,細胞沉淀中加入70% 4度預冷的乙醇(PBS配制),4度放置不少于1小時(有的文獻說是不少于15分鐘)。之后離心去乙醇,PBS洗一遍后加入PI和DNAse,終濃度50 ug/ml,混勻,避光室溫放置30 min后即可上流式細胞儀測定。......閱讀全文
細胞消化過度會對流式凋亡實驗有影響嗎
因為是誘導凋亡的實驗,細胞加藥處理后,貼壁細胞會因為活力喪失而脫壁漂浮,而這部分細胞正是你需要的,所以加藥處理完后要收集全部培養上清,少量PBS洗瓶內剩下的細胞,洗的PBS與之前收集的上清合并。胰酶消化。消化完畢用之前收集的培養基中止消化。離心后PBS再洗一遍。離心,棄上清,細胞沉淀中加入70% 4
細胞消化過度會對流式凋亡實驗有影響嗎
因為是誘導凋亡的實驗,細胞加藥處理后,貼壁細胞會因為活力喪失而脫壁漂浮,而這部分細胞正是你需要的,所以加藥處理完后要收集全部培養上清,少量PBS洗瓶內剩下的細胞,洗的PBS與之前收集的上清合并。胰酶消化。消化完畢用之前收集的培養基中止消化。離心后PBS再洗一遍。離心,棄上清,細胞沉淀中加入70% 4
細胞消化過度會對流式凋亡實驗有影響嗎
細胞消化過度會對流式凋亡實驗有影響因為是誘導凋亡的實驗,細胞加藥處理后,貼壁細胞會因為活力喪失而脫壁漂浮,而這部分細胞正是你需要的,所以加藥處理完后要收集全部培養上清,少量PBS洗瓶內剩下的細胞,洗的PBS與之前收集的上清合并。胰酶消化。消化完畢用之前收集的培養基中止消化。離心后PBS再洗一遍。離心
細胞消化過度會對流式凋亡實驗有影響嗎
細胞消化過度會對流式凋亡實驗有影響因為是誘導凋亡的實驗,細胞加藥處理后,貼壁細胞會因為活力喪失而脫壁漂浮,而這部分細胞正是你需要的,所以加藥處理完后要收集全部培養上清,少量PBS洗瓶內剩下的細胞,洗的PBS與之前收集的上清合并。胰酶消化。消化完畢用之前收集的培養基中止消化。離心后PBS再洗一遍。離心
細胞消化過度了有什么好的辦法補救嗎
一般細胞消化到掉下來是沒問題的。如果針對你這種細胞來說是消過了的話,那接下來最要緊的是立刻加入培養基終止胰酶對細胞的繼續作用,而不是用直接用胰酶吹打。加入培養基的量約為胰酶的1-2倍,然后離心去上清,培養基重懸,這時應該注意將細胞吹散,因為一般胰酶消化過度之后細胞容易聚集成團,不吹散的話會嚴重影響細
細胞消化過度了有什么好的辦法補救嗎
一般細胞消化到掉下來是沒問題的。如果針對你這種細胞來說是消過了的話,那接下來最要緊的是立刻加入培養基終止胰酶對細胞的繼續作用,而不是用直接用胰酶吹打。加入培養基的量約為胰酶的1-2倍,然后離心去上清,培養基重懸,這時應該注意將細胞吹散,因為一般胰酶消化過度之后細胞容易聚集成團,不吹散的話會嚴重影響細
細胞凋亡:流式細胞儀檢測實驗
實驗方法原理 實驗材料 要分析的細胞在FACS緩沖液中試劑、試劑盒 FACS緩沖液冰冷的100%乙醇(如果細胞是抗體標記的則用70%乙醇)1 mg ml RNase A含50μg ml 二碘化丙錠(PI)的PBS儀器、耗材 流式細胞儀實驗步驟 1)凋亡刺激后,從培養液中沉淀所要分析的細胞,同樣沉淀一
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
實驗方法原理 其原理主要是根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等,其中細胞核的改變zui具特征性,主要包括以下幾個方面:1. 細胞核的改變由于凋亡細胞核的改變,造成各種染色體熒光染料對凋亡細胞DNA可染性
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
PI單染色法 Heochst 33342/PI雙染色法 Annexin V/PI雙染色法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 主要根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
實驗方法原理 其原理主要是根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等,其中細胞核的改變最具特征性,主要包括以下幾個方面:?1. ?細胞核的改變?由于凋亡細胞核的改變,造成各種染色體熒光染料對凋亡細胞DNA可染
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
PI單染色法 Heochst 33342/PI雙染色法 Annexin V/PI雙染色法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 主要根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
流式細胞儀檢測細胞凋亡可以: 鑒定細胞凋亡形態; 可以準確的進行凋亡細胞的計數; 可以進行特異的定性分析和定量分析。 實驗原理 細胞凋亡時,在細胞、亞細胞和分子水平上會發生的特征性改變,這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等,其中細胞核的改變最具特征
細胞凋亡:流式細胞儀檢測實驗
用次GoZG1 DNA峰值計算細胞凋亡 用TUNEL流式細胞定量凋亡細胞 通過TUNEL組織切面中的凋亡細胞的原位雜交 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
實驗時間_流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
流式細胞儀檢測細胞凋亡可以:鑒定細胞凋亡形態;可以準確的進行凋亡細胞的計數;可以進行特異的定性分析和定量分析。實驗原理細胞凋亡時,在細胞、亞細胞和分子水平上會發生的特征性改變,這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等,其中細胞核的改變最具特征性。通過流式細胞儀檢測這
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗protocol
40年來,流式細胞術一直由多色流式主導。 盡管Fulwyler發明的初代儀器基于庫爾特體積,但熒光在短短幾年內成為流式細胞儀主導技術。 從20世紀80年代初到現在,技術開發人員一直致力于構建能夠測量更多熒光參數(我們通常將其稱為“顏色”)的儀器。 最開始,G?hde在1968年首次發表關于熒光
流式細胞儀檢測實驗_用TUNEL流式細胞定量凋亡細胞
實驗材料要分析的細胞試劑、試劑盒 PBS95%乙醇(不是100%乙醇)冰冷多聚甲醛固定液TdT反應液TdT 生物素-dUTP混合液異硫氰酸熒光素(FITC)-鏈霉親和素(streptavidin)結合物儀器、耗材12 mm×75 mm圓底離心管配有269模型轉子的IEC 6R6000離心機(或相當的
流式細胞儀檢測實驗用TUNEL流式細胞定量凋亡細胞
實驗材料要分析的細胞試劑、試劑盒 PBS95%乙醇(不是100%乙醇)冰冷多聚甲醛固定液TdT反應液TdT 生物素-dUTP混合液異硫氰酸熒光素(FITC)-鏈霉親和素(streptavidin)結合物儀器、耗材12 mm×75 mm圓底離心管配有269模型轉子的IEC 6R6000離心機(或相當的
流式細胞術細胞凋亡檢測樣品的制備實驗
實驗步驟 根據實驗方案誘導細胞凋亡,制備單細胞懸液,使用 Annexin V-FITC 細胞凋亡檢測試劑盒,通過Annexin V抗體與磷脂絲氨酸(PS)的特異性結合來檢測細胞凋亡的情況。1. 將10×的結合緩沖液用蒸餾水稀釋成為1×,冰育。2. 懸浮細胞在低溫環境中,用PBS洗滌細胞2次(800~
流式細胞術細胞凋亡檢測樣品的制備實驗
實驗步驟 根據實驗方案誘導細胞凋亡,制備單細胞懸液,使用 Annexin V-FITC 細胞凋亡檢測試劑盒,通過Annexin V抗體與磷脂絲氨酸(PS)的特異性結合來檢測細胞凋亡的情況。1. 將10×的結合緩沖液用蒸餾水稀釋成為1×,冰育。2.
流式細胞術細胞凋亡檢測樣品的制備實驗
實驗步驟 根據實驗方案誘導細胞凋亡,制備單細胞懸液,使用 Annexin V-FITC 細胞凋亡檢測試劑盒,通過Annexin V抗體與磷脂絲氨酸(PS)的特異性結合來檢測細胞凋亡的情況。1. 將10×的結合緩沖液用蒸餾水稀釋成為1×,冰育。2.
流式細胞術細胞凋亡檢測樣品的制備實驗
實驗步驟根據實驗方案誘導細胞凋亡,制備單細胞懸液,使用 Annexin V-FITC 細胞凋亡檢測試劑盒,通過Annexin V抗體與磷脂絲氨酸(PS)的特異性結合來檢測細胞凋亡的情況。1. 將10×的結合緩沖液用蒸餾水稀釋成為1×,冰育。2. 懸浮細胞在低溫環境中,用PBS洗滌細胞2次(800~1
藥物融在氫氧化鈉中然后處理細胞會對細胞有影響嗎
一般來說出去NaCl的過程是單獨出去了氯離子,如果要出去氯化鈉可以通過萃取的方式,可以考慮四氯化碳或者甲醇;將樣品溶解后過柱子,后者用離子滲透膜來分離.
藥物融在氫氧化鈉中然后處理細胞會對細胞有影響嗎
一般來說出去NaCl的過程是單獨出去了氯離子,如果要出去氯化鈉可以通過萃取的方式,可以考慮四氯化碳或者甲醇;將樣品溶解后過柱子,后者用離子滲透膜來分離.
流式細胞儀單染可以檢測出細胞凋亡率嗎?
用PI單染就可以,PI是用來測細胞周期的,在單倍體峰前如果有個亞峰則表明有凋亡,但是這個方法不是很好,壞死細胞也會包含在內。準確地說用PI單染測出的凋亡率應該是死亡細胞占細胞總數的比例。建議用AnexinV和PI雙染,PI陰性和AnexinV陽性區是真正凋亡的細胞。細胞早期凋亡時,內膜外翻,位于胞漿
流式細胞術檢測細胞凋亡
實驗概要Provides a rapid and convenient assay for apoptosis.?實驗原理Apoptosis ?is a carefully regulated process of cell death that occurs as a normal ?part o
如何用流式檢測細胞凋亡
前言細胞凋亡通常稱為細胞程序性死亡,是由基因控制的主動性細胞死亡過程。越來越多數據發現,細胞凋亡與多種疾病密切相關,如癌細胞具有連續增殖、抵抗細胞凋亡能力,利用流式細胞儀分析細胞凋亡可為腫瘤診斷,療效評價和預后預測提供了重要的參考指標。然而很多實驗的同學們,常會碰到上機檢測時細胞死亡太多卻檢測不出凋
高效液相色譜出現倒峰會對定量有影響嗎
使用標準對照法時,只要倒峰不會與主成分峰重合,不影響主成分峰的積分就不會影響定量。 分析測試百科網樂意為你解答實驗中碰到的各種問題,基本上問題都能得到專家的解答,有問題可找我,百度上搜下就有。只要你積分時,對主峰沒有干擾就沒問題!!有的工作站可以反轉負峰,然后象正常色譜峰一樣積分如果是空白就更簡單,
流式細胞儀細胞凋亡檢測
一 PI單染色法??基本原理? 其原理主要是根據細胞?凋亡時在細胞、亞細胞和分子?水平上所發生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等,其中細胞核的改變最具特征性,主要包括以下幾個方面:1.?細胞核的改變:由于凋亡細胞核的改變,造成各種染色體熒光染料
流式細胞儀檢測細胞凋亡
細胞凋亡的檢測方法眾多,流式細胞儀檢測凋亡,是常用的方法。由于流式細胞儀固有的特點――可以準確的進行凋亡細胞的計數。因此,具有其它方法無可比擬的優越性。下面我們就簡單明了地介紹流式在檢測凋亡方面的應用。在凋亡誘導劑的作用下,首先是細胞色素C和apa f-1形成復合體,線粒體的功能發生衰退;后是cas
流式檢測細胞凋亡還有哪些方法?
前面講到利用流式細胞術進行細胞凋亡檢測的annexinV/PI雙染色法,今天主要簡要介紹SYTO/PI雙染色法、細胞DNA含量分析法、TUNEL法。 SYTO/PI雙染色法 SYTO系列染料是一種細胞膜通透性的核酸染料,可以自由進入活細胞與細胞內的DNA或者RNA結合,未結合時發射熒光信號的