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電場力作用條件下，帶電粒子（PAGE膠中的蛋白）會發生定向遷移；蛋白大小如果超過膜孔徑（0.22μm or 0.45μm），不會透過膜；WB用的膜具有蛋白吸附作用；......閱讀全文
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。 本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術: 一、原理 二、分類
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被
一。免疫印跡法 免疫印跡法（immunoblotting test，IBT）亦稱酶聯免疫電轉移印斑法（enzyme linked immunoelectrotransfer blot，EITB），因與Southen
一。免疫印跡法 免疫印跡法（immunoblotting test，IBT）亦稱酶聯免疫電轉移印斑法（enzyme linked immunoelectrotransfer blot，EITB），因與Southen
Westernblot 實驗步驟 1. 組織塊稱重 2. 利用液氮、研缽粉碎組織塊 3. 加入RIPA緩沖液（每克組織3 ml RIPA），PMSF（每克組織30μl，10 mg/ml PMSF），利用Polytron進一步勻漿（15,000轉/分*1分鐘）維持4℃4.
Western，也稱Western blot、Western blotting、Western印跡，是用抗體檢測蛋白的重要方法之一。可按照以下步驟操作。1.收集蛋白樣品(Protein sample preparation)使用細胞裂解液，對貼壁細胞、懸浮細胞或組織樣品進行裂解。然后測定每個蛋白樣品
蛋白質免疫印跡雜交實驗（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單，但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差，導致剛進實驗室的小伙伴們，實
蛋白質免疫印跡雜交實驗（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單，但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差，導致剛進實驗室的小伙伴們，實
剛接觸 Western Blot 不久的用戶，在選購 WB 設備時，經常會遇到儀器選型的問題：為什么常見的蛋白質電泳的轉膜有兩種方式可以選擇，干式和濕式，那么哪種方法更適合我們呢？這里我們結合美國 WEALTEC 公司的 E-Blotter 濕轉槽和 YRDIMES 快速半干轉印槽舉例說明。
在經典的Western Blot的世界里，蛋白電泳—轉膜—封閉—抗體—顯色這個五步驟環環相扣，構成WB完整過程，就象砌積木一樣，少了前面一步的基礎后面的就砌不上去。但是親愛的朋友，告訴我，你們在一次又一次重復這個貌似簡單又頗為費時的實驗時，有沒有設想過能省略掉其中的某個費時的非必需步驟，更直接更快得
蛋白質免疫印跡雜交實驗（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單，但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差，導致剛進實驗室的小伙伴們
蛋白質免疫印跡雜交實驗（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單，但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差，導致剛進實驗室的小伙伴們，實驗做
蛋白質免疫印跡雜交實驗（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單，但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差，導致剛進實驗室的小伙伴們
蛋白質免疫印跡雜交實驗（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單，但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差，導致剛進實驗室的小伙伴們
9. 條件的摸索DDD. 用的是Santa Cruz的抗體，也實驗過一抗和二抗肯定能結合，二抗加DAB肯定能顯色。電泳的膠用考馬斯亮藍染色沒問題，但是不知道與Marker對應的條帶是否是我要的（我目的蛋白的分子量分別是55KD、29KD）。半干法2小時轉膜后，麗春紅染色發現大分子量蛋白轉過去的較少。
實驗常見的問題指南根據問題的類型主要分成以下幾類（以下資料權作參考，請勿盲目模仿！）：1. 參考書推薦A. 對初學者看什么資料比較好？解答：《抗體技術實驗指南》和Antibodies（a laboratory manual， wrote by Ed Harlow ，d
背景： 蛋白質印跡的發明者是斯坦福大學George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被稱為Western Blot。最開始做印跡的是一個叫Southern的科學家，但印跡的對象是DNA鏈，他把這種技術
背景： 蛋白質印跡的發明者是斯坦福大學George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被稱為Western Blot。最開始做印跡的是一個叫Southern的科學家，但印跡的對象是DNA鏈，他把這種技術稱為Southe
四、轉膜 以下以使用半干轉膜為例。對于轉印90kd以下的蛋白，轉膜液都不用加SDS，如果是蛋白分子量大的話可以加入0.037%的SDS。 在電泳結束前20min開始準備轉膜所需的東西。轉一張膜需準備6張的濾紙（長一般為8.1~8.3cm，寬度根據裁的膠大小實際測量，但膠一
蛋白質免疫印跡雜交實驗（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單，但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差，導致剛進實驗室的小伙伴們
四、轉膜以下以使用半干轉膜為例。對于轉印90kd以下的蛋白，轉膜液都不用加SDS，如果是蛋白分子量大的話可以加入0.037%的SDS。在電泳結束前20min開始準備轉膜所需的東西。轉一張膜需準備6張的濾紙（長一般為8.1~8.3cm，寬度根據裁的膠大小實際測量，但膠一般會縮水，所以裁8cm就行）和1
P. 有什么方法可以提高上樣量？ 解答：可以濃縮樣品；增大上樣體積來增大上樣量。 Q. 我要檢測的目的蛋白是分子量大概為42kd的膜蛋白，膜蛋白提取可不可以不用到超速離心機，有沒有直接用低溫高速離心機就可以的提到膜蛋白的方法，42kd的蛋白分子量算不算大？ 解答：如是需要提取膜蛋白
3.抗體 T.做細胞信號傳導，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？ 解答：對二抗無要求，要看你實驗條件來選擇，一般推薦用HRP標記的二抗。 U.同一公司的另外抗體用這個稀釋度做出來效果很好，所以沒做預試，怕費時間，用什么樣的稀釋度比較好呢？我用的E
轉膜 將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如 NC 膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白轉移，所
11、NaN3 0.02% 疊氮鈉(有毒，戴手套操作)，溶于磷酸緩沖鹽溶液(PBS)。12、Tris緩沖鹽溶液(TBS):20mmol/LTris/HCL(pH7.5)，500mmol/LnaCl。13、Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1。14、過氧化物酶標記的第二
3.抗體T.做細胞信號傳導，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？解答：對二抗無要求，要看你實驗條件來選擇，一般推薦用HRP標記的二抗。U.同一公司的另外抗體用這個稀釋度做出來效果很好，所以沒做預試，怕費時間，用什么樣的稀釋度比較好呢？我用的ELL+plus試劑盒顯色。轉膜過夜，
MMM. 磷酸化抗體的檢測樣本制備時是否一定要加NaF等？ 解答：NaF是一種廣譜磷酸化酶的抑制劑，一般最好加。但是不加也可以，大部分時候是不用加的。我做的時候從未加過，都做出來了。 NNN. Western Blot中block的最短時間? 解答：每一步1小時足夠了， 中間換抗體
四、主要步驟 生物秀為您搜集了現階段幾乎網上所有的Western Blot的中英文資料，僅供實驗參考，可以根據自己實驗的實際情況進行調整： Western Blot PROTOCOL： 點擊查看所有相關文章 五、 實驗常見的問題指南 根據問題的類型主要分成以下幾類（以
GGG.我想盡量提高轉膜的效率（我的實驗要求轉到膜上的蛋白越多越好，不管是什么大小蛋白）不知道有那些辦法？解答：不管怎么轉都會存在蛋白轉移不完全（電壓過小時間過短）或過度轉移（電壓過大時間過長）的問題，魚（小分子量蛋白）和熊掌（大分子量蛋白）不可得兼呵呵。建議把膠切成兩半，比如以35KD為界，分別進
下面的步驟適用于通過Xcell Ⅱ轉印系統進行蛋白印記的大部分應用。為達到最佳效果，用戶的優化是必要的。I. 所需材料：?Xcell SureLock?或Xcell Ⅱ? Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001, EI9001及EI9051）?電泳后的迷你膠