變性聚丙烯酰胺凝膠的膠板準備介紹
(1)膠板的清潔是灌膠能否成功的第一關鍵步驟。反復使用時要將玻璃板和間隔片上凝膠去除干凈,徹底洗凈后干燥。用乙醇擦拭玻璃板上殘留水漬。不能有一點殘留的凝膠和殘渣,否則灌膠時會產生氣泡。 (2)灌膠前要對玻璃板分別進行處理。長玻璃用親和硅烷,短玻璃用剝離硅烷處理,便于電泳結束后長短玻璃板的分離,凝膠都粘附在長玻璃板上。處理時先用剝離硅烷涂抹短玻璃,再用親和硅烷涂抹長玻璃,能不更換手套就避免親和硅烷污染短玻璃。玻璃板上不能有多余硅烷,否則干燥后會留下水印,在后續實驗如硝酸銀染色顯示條帶時會有水印痕跡,影響顯色條帶的觀察。可用鏡頭紙拭去多余硅烷。涂抹均勻后分開放置干燥玻璃,最好干燥過夜,否則會粘膠。......閱讀全文
變性聚丙烯酰胺凝膠的膠板準備介紹
(1)膠板的清潔是灌膠能否成功的第一關鍵步驟。反復使用時要將玻璃板和間隔片上凝膠去除干凈,徹底洗凈后干燥。用乙醇擦拭玻璃板上殘留水漬。不能有一點殘留的凝膠和殘渣,否則灌膠時會產生氣泡。 (2)灌膠前要對玻璃板分別進行處理。長玻璃用親和硅烷,短玻璃用剝離硅烷處理,便于電泳結束后長短玻璃板的分離,
變性聚丙烯酰胺凝膠的膠室制備
在凝膠灌制中膠室底部漏膠不可避免,需要準備較多的膠液以防漏膠過多而灌膠不足。膠室的制備對漏膠多少極為重要。一般膠室玻璃板間兩邊放置有間隔片而底部無間隔片,而底部是最容易發生漏膠的地方。為防止漏膠常用方法有用膠布封邊或用瓊脂糖凝膠封底。用膠布封邊時膠布一遇水就失去粘性,特別是在玻璃板的兩個底角,常
變性聚丙烯酰胺凝膠的介紹
變性聚丙烯酰胺凝膠,是分子生物學常用技術之一,凝膠的灌制比水平電泳槽凝膠灌制困難,漏膠和產生氣泡常在所難免,需經過反復實踐才能掌握其灌制技巧。
變性聚丙烯酰胺凝膠的凝膠灌制
采用回流灌注法灌注凝膠。因制備好的膠室有彈簧夾,將膠室放置在一水平支架上。一人操作時以靠近操作者一側膠室底角為最低點,左手托住對側玻璃板中部抬高膠室約30°。右手從低側短玻璃處緩緩灌注膠液成連續的細流,到達底部后逐步放低膠室,直至灌滿,水平放置后插入梳子,6%凝膠聚合常需1~2小時。灌膠中如有氣
變性聚丙烯酰胺凝膠的基本信息介紹
聚丙烯酰胺外觀:固體聚丙烯酰胺為白色或微黃色顆粒或粉末,分子量在400-2000萬之間,固體產品外觀為白色或略帶黃色粉末,液態為無色粘稠膠體狀,易溶于水,溫度超過120℃時易分解;膠體聚丙烯酰胺為無色或微黃色透明膠體。聚丙烯酰胺為水溶性高分子聚合物,不溶于大多數有機溶劑,具有良好的絮凝性,可以降
變性聚丙烯酰胺凝膠的簡介
變性聚丙烯酰胺凝膠,是分子生物學常用技術之一,凝膠的灌制比水平電泳槽凝膠灌制困難,漏膠和產生氣泡常在所難免,需經過反復實踐才能掌握其灌制技巧。 我們在用mRNA差異顯示技術篩選成人難治性腎病與激素敏感性腎病綜合征患者間差異基因的實驗中,運用變性聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳分離PCR產物條帶,硝酸銀染
變性聚丙烯酰胺凝膠的定義
變性聚丙烯酰胺凝膠,是分子生物學常用技術之一,凝膠的灌制比水平電泳槽凝膠灌制困難,漏膠和產生氣泡常在所難免,需經過反復實踐才能掌握其灌制技巧。
變性梯度聚丙烯酰胺凝膠的用途
變性梯度聚丙烯酰胺凝膠(denaturedgradientgelelectrophoresis,DGGE)最初是Lerman等人于20世紀80年代初期發明的,起初主要用來檢測DNA片段中的點突變。
變性梯度聚丙烯酰胺凝膠的簡介
變性梯度聚丙烯酰胺凝膠(denaturedgradientgelelectrophoresis,DGGE)最初是Lerman等人于20世紀80年代初期發明的,起初主要用來檢測DNA片段中的點突變。Muyzer等人在1993年首次將其應用于微生物群落結構研究。后來又發展出其衍生技術,溫度梯度凝膠電
變性梯度聚丙烯酰胺凝膠的用途
1)用于污泥脫水根據污泥性質可選用本產品的相應型號,可有效在污泥進入壓濾之前進行污泥脫水,脫水時,產生絮團大,不粘濾布,壓濾時不散,流泥餅較厚,脫水效率高,泥餅含水率在80%以下。2)用于生活污水和有機廢水的處理,本產品在配性或堿性介質中均呈現陽電性,這樣對污水中懸浮顆粒帶陰電荷的污水進行絮凝沉淀,
變性梯度聚丙烯酰胺凝膠的原理
雙鏈DNA分子在一般的聚丙烯酰胺凝膠電泳時,其遷移行為決定于其分子大小和電荷。不同長度的DNA片段能夠被區分開,但同樣長度的DNA片段在膠中的遷移行為一樣,因此不能被區分。DGGE/TGGE技術在一般的聚丙烯酰胺凝膠基礎上,加入了變性劑(尿素和甲酰胺)梯度,從而能夠把同樣長度但序列不同的DNA片段區
變性聚丙烯酰胺凝膠的用途
1)用于污泥脫水根據污泥性質可選用本產品的相應型號,可有效在污泥進入壓濾之前進行污泥脫水,脫水時,產生絮團大,不粘濾布,壓濾時不散,流泥餅較厚,脫水效率高,泥餅含水率在80%以下。2)用于生活污水和有機廢水的處理,本產品在配性或堿性介質中均呈現陽電性,這樣對污水中懸浮顆粒帶陰電荷的污水進行絮凝沉淀,
變性條件下的凝膠電泳實驗——梯度膠凝膠電泳
實驗方法原理在凝膠電泳中使用丙烯酰胺梯度膠比使用線性膠有兩大優點。一是在高濃度丙烯酰胺條件下可以增加蛋白質的分子篩作用,從而使低分子量蛋白質形成淸晰的條帶。另一是梯度膠可以在塊膠內分離分子量范圍更大的蛋白質(如 5%~20% 的凝膠可以分離 15 kDa~200 kDa 的蛋白質;而 3%~30%
變性聚丙烯酰胺凝膠電泳的相關介紹
變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)是根據寡核苷酸的大小來分離,因此可將全長產物與不完整的短分子分開。電泳時通常每一泳道至少加1mg合成的寡核苷酸,電泳后在紫外燈下定位寡核苷酸條帶,將長度正確的寡核苷酸從凝膠上切下。原理:蛋白質或多肽與SDS結合,經熱變性和二硫鍵的還原,形成所帶負電荷相對一致的非
變性聚丙烯酰胺凝膠的相關信息
陰離子聚丙烯酰胺(APAM)陰離子聚丙烯酰胺是水溶性的高分子聚合物。由于其分子鏈中含有一定數量的極性基團,它能通過吸附水中懸浮的固體粒子,使粒子間架橋或通過電荷中和使粒子凝聚形成大的絮凝物。所以,它可加速懸浮液中粒子的沉降,有非常明顯的加快溶液澄清,促進過濾等效果。主要用于各種工業廢水的絮凝沉降
變性聚丙烯酰胺凝膠的制備實驗
測序中,4 個系列的 DNA 片段在變性的條件下在一個薄的聚丙烯酰胺凝膠上進行電泳分析。本方案介紹了制備均一緩沖液和丙烯酰胺濃度膠的方法。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)下冊,作者:〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒丙烯酰胺溶液過硫酸銨水溶液去離子水去污劑乙醇KOH 甲醇溶
變性梯度聚丙烯酰胺凝膠的原理簡介
雙鏈DNA分子在一般的聚丙烯酰胺凝膠電泳時,其遷移行為決定于其分子大小和電荷。不同長度的DNA片段能夠被區分開,但同樣長度的DNA片段在膠中的遷移行為一樣,因此不能被區分。DGGE/TGGE技術在一般的聚丙烯酰胺凝膠基礎上,加入了變性劑(尿素和甲酰胺)梯度,從而能夠把同樣長度但序列不同的DNA片
變性聚丙烯酰胺凝膠的制備實驗
試劑、試劑盒 丙烯酰胺溶液過硫酸銨水溶液去離子水去污劑乙醇KOH 甲醇溶液聚硅氧烷溶液TBE 電泳緩沖液TEMED尿素儀器、耗材 彈簧夾干膠架封膠帶膠板(配對的) 和隔板手套凡士林保護性的工作合紙鯊魚齒梳子有臂的燒瓶隔板注射器試管架實驗步驟 材料緩沖液和溶液參照附錄 1 配制貯存液、緩沖液、試劑。稀
變性聚丙烯酰胺凝膠的制備方法
1.膠板準備(1)膠板的清潔是灌膠能否成功的第一關鍵步驟。反復使用時要將玻璃板和間隔片上凝膠去除干凈,徹底洗凈后干燥。用乙醇擦拭玻璃板上殘留水漬。不能有一點殘留的凝膠和殘渣,否則灌膠時會產生氣泡。(2)灌膠前要對玻璃板分別進行處理。長玻璃用親和硅烷,短玻璃用剝離硅烷處理,便于電泳結束后長短玻璃板的分
變性聚丙烯酰胺凝膠的制備方法
1.膠板準備(1)膠板的清潔是灌膠能否成功的第一關鍵步驟。反復使用時要將玻璃板和間隔片上凝膠去除干凈,徹底洗凈后干燥。用乙醇擦拭玻璃板上殘留水漬。不能有一點殘留的凝膠和殘渣,否則灌膠時會產生氣泡。(2)灌膠前要對玻璃板分別進行處理。長玻璃用親和硅烷,短玻璃用剝離硅烷處理,便于電泳結束后長短玻璃板的分
變性聚丙烯酰胺凝膠的制備實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 丙烯酰胺溶液 過硫酸銨水溶液 去離子水 去污劑 乙醇 KOH 甲醇溶液 聚硅氧烷溶液 TBE
聚合酶鏈反應一單鏈構象多態性分析-(PCRSSCP)
聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性分析(Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP)是近年來發展起來的一種基因分析方法。 PCR-SSCP分析的基本程序為:
聚合酶鏈反應一單鏈構象多態性分析-(PCRSSCP)
??聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性分析(Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP)是近年來發展起來的一種基因分析方法。?? PCR-SSCP分析的基本
聚合酶鏈反應一單鏈構象多態性分析-(PCRSSCP)-實驗方法
聚合酶鏈反應一單鏈構象多態性分析 (PCR-SSCP)? ?? 聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性分析(Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP)是近年來
變性條件下的凝膠電泳實驗——SDS尿素膠凝膠電泳
實驗方法原理當蛋白質的電荷性質與其質量明顯相關時。小分子蛋白質在 SDS-PAGE 中的遷移率便不再與它們的分子量成比例。在這種情況下通常使用 SDS-尿素膠另外,SDS-尿素聚丙烯酰胺凝膠電泳對于免疫沉淀和在低離子強度下不溶的膜蛋白是非常有用的。實驗材料蛋白質溶液實驗步驟1. 工作溶液1.1 溶液
變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
試劑、試劑盒 40% 聚丙烯酰胺溶液 尿素 甲酰胺 5XTBE 緩沖液 10X 加樣緩沖液 過硫酸銨 TEMED 染色液 1%AgNO3 顯色液儀器、耗材 垂直電泳裝置 水浴實驗步驟 (一)材料與設備1) 垂直電泳裝置2) 水浴3)40% 聚丙烯酰胺溶液: 丙烯酰胺 38 g,N,N-亞甲雙丙烯酰胺
變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
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變性梯度聚丙烯酰胺凝膠的研究和應用
變性梯度聚丙烯酰胺凝膠(denaturedgradientgelelectrophoresis,DGGE)最初是Lerman等人于20世紀80年代初期發明的,起初主要用來檢測DNA片段中的點突變。Muyzer等人在1993年首次將其應用于微生物群落結構研究。后來又發展出其衍生技術,溫度梯度凝膠電泳(
變性聚丙烯酰胺凝膠的特性和分類
聚丙烯酰胺外觀:固體聚丙烯酰胺為白色或微黃色顆粒或粉末,分子量在400-2000萬之間,固體產品外觀為白色或略帶黃色粉末,液態為無色粘稠膠體狀,易溶于水,溫度超過120℃時易分解;膠體聚丙烯酰胺為無色或微黃色透明膠體。聚丙烯酰胺為水溶性高分子聚合物,不溶于大多數有機溶劑,具有良好的絮凝性,可以降低液
上樣并進行-DNA-測序實驗
DNA 序列可通過酶解或化學降解產生一系列成套的 DNA 片段,這些片段可以通過薄層變性聚丙烯酰胺凝膠電泳進行分辨。一個典型的變性聚丙烯酰胺凝膠電泳能夠分辨出編碼 15~400 個核苷酸長度的 DNA 序 列。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)下冊,作者:〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾