依賴核酸序列的擴增技術的定義和原理
1.概述:依賴核酸序列的擴增(Nucleic acid sequence-based amplification,NASBA),又稱自主序列復制系統(self- sustainedsequence replication,3SR)或再生長序列復制技術。1990年Guatelli等首先報道了這一技術.NASBA 主要用于RNA的擴增、檢測及測序.該反應有賴于AMV 逆轉錄酶,T7RNA多聚酶和核酸酶H(RNaseH)共同協作而完成。NASBA反應體系中除含有上述三種酶外,還含有核糖核苷,兩種特殊的引物和緩沖液。引物I 3‘末端與靶序列互補,5’端含T7RNA多聚酶的啟動子,這一引物是用于合成cDNA的.引物Ⅱ的堿基序列與cDNA的5‘ 未端互補。2.原理:在NASBA反應時,首先引物Ⅰ與RNA模板復性( 結合),AMV逆轉錄酶催化合成cDNA,RNaseH水解cDNA上的RNA,形成一條單鏈的DNA;引物Ⅱ隨即與此cDNA的5......閱讀全文
核酸探針的定義和分類
RNA探針是指帶有標記的能與組織內相對應的核苷酸序列互補結合的一段單鏈cDNA或cRNA分子。根據在RNA雜交中所使用的探針依其來源可分為三種:即特異性cDNA、cRNA探針和人工合成寡核苷酸探針。
基因擴增技術的原理
PCR擴增DNA的原理是:先將含有所需擴增分析序列的靶DNA雙鏈經熱變性處理解開為兩個寡聚核苷酸單鏈,然后加入一對根據已知DNA序列由人工合成的與所擴增的DNA兩端鄰近序列互補的寡聚核苷酸片段作為引物,即左右引物。此引物范圍就在包括所欲擴增的DNA片段,一般需20-30個堿基對,過少則難保持與DNA
RGD序列的定義
RGD序列由精氨酸、甘氨酸和天冬氨酸組成,存在于多種細胞外基質中,可與11種整合素特異性結合,能有效地促進細胞對生物材料的粘附。
AluI序列的定義
人基因組約有50萬~70萬份拷貝,AluI序列長282個核苷酸,由兩個同源但略有差別的亞基組成。
互補序列的定義
中文名稱互補序列英文名稱complementary sequence定 義在雙鏈核酸中,一條多核苷酸鏈可與另一條多核苷酸鏈互補的那部分序列。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),核酸與基因(二級學科)
自主復制序列的定義和作用
ARS(autonomously replicating sequence)。在真核生物中發現的一類能啟動DNA復制的序列,含有一個AT富集區。最早在酵母中分離得到,隨后在其它真核生物中也發現了ARS序列的存在。這些序列是在人工合成的環形質粒中作為復制器起作用的。
DNA和RNA靶序列的原位PCR擴增實驗
原位PCR是Hasse等于1990年建立的技術,就是在組織細胞里進行PCR反應,它結合了具有細胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術的優點,是細胞學科研與臨床診斷領域里的一項有較大潛力的新技術。實驗材料樣品試劑、試劑盒雙氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl儀
DNA和RNA靶序列的原位PCR擴增實驗
實驗材料 樣品試劑、試劑盒 雙氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl儀器、耗材 加濕盒熱循環儀實驗步驟 1. ?將載有固定樣品的載玻片置105℃加熱塊上5~120 s。?2. ?載玻片放入含0.3%H2O2中,于37℃或室溫溫育過夜,以滅活內源性過氧化物酶活性,然后以
CRISPR基因編輯技術的定義和技術原理
CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats)是生命進化歷史上,細菌和病毒進行斗爭產生的免疫武器,簡單說就是病毒能把自己的基因整合到細菌,利用細菌的細胞工具為自己的基因復制服務,細菌為了將病毒的外來入侵基因清除,
核酸序列的檢索實驗
實驗方法原理掌握核酸序列檢索的操作方法;熟悉GenBank數據庫序列格式及其主要字段的含義;了解EMBL數據庫序列格式及其主要字段的含義;熟悉GenBank數據庫序列格式的FASTA序列格式顯示與保存;實驗材料電腦儀器、耗材筆記本筆實驗步驟1. ?使用Entrez信息查詢系統檢索核酸序列BC0608
標準核酸序列的分類
標準核酸序列可分為植物來源、動物來源、微生物來源及重組生物制品的鑒別或鑒定用標準核酸序列等。 1.植物來源 植物來源的標準核酸序列系指用種屬來源明確的植物樣本按DNA測序技術指導原則測定得到的標準序列,可用于植物來源的物種如中藥材、中藥飲片或提取物等的原植物鑒別或鑒定。 2.動物來源 動
核酸序列分析
【實驗目的】1、?掌握已知或未知序列接受號的核酸序列檢索的基本步驟;2、?掌握使用BioEdit軟件進行核酸序列的基本分析;3、?熟悉基于核酸序列比對分析的真核基因結構分析(內含子/外顯子分析);4、?了解基因的電子表達譜分析。【實驗原理】針對核酸序列的分析就是在核酸序列中尋找基因,找出基因的位置和
頻率依賴選擇的定義
中文名稱頻率依賴選擇英文名稱frequency dependent selection定 義對某種基因型的選擇依賴于該基因型在群體中的頻率,頻率低,選擇有利于該種基因型;頻率高,選擇不利于該種基因型。應用學科遺傳學(一級學科),進化遺傳學(二級學科)
什么是轉錄依賴的擴增系統?
轉錄依賴的擴增系統(Transcript-basedamplification system,TAS),是Kwen等人于1989年研究報道的,主要用于擴增RNA.合成A、B引物,引物A的3‘末端與待擴增RNA互補,其5’端有T7RNA多聚酶的啟動子信息.逆轉錄酶以A引物為起點合成cDNA;引物B與此
重組PCR技術的定義和原理介紹
1.定義:使兩個不相鄰的DNA片段重組在一起的PCR稱為重組PCR(recombinant PCR)。Mullis等于1986年報道了由PCR擴增的兩個DNA片段通過重組合后再經延伸而制備出新的DNA分子。2. 其基本原理:將突變堿基,插入或缺失片段,或一種物質的幾個基因片段均設計在引物中,先分段對
肽核酸的基本解釋和定義
由于PNA不帶負電荷,與DNA和RNA之間不存在靜電斥力,因而結合的穩定性和特異性都大為提高;不同于DNA或DNA、RNA間的雜交,PNA與DNA或RNA的雜交幾乎不受雜交體系鹽濃度影響,與DNA或RNA分子的雜交能力遠優于DNA/DNA或DNA/RNA,表現在很高的雜交穩定性、優良的特異序列識別能
核酸擴增—環介導的等溫擴增法
2000年日本學者Notomi在Nucleic Acids Research(核酸研究)雜志上公開了一種新的適用于基因診斷的恒溫核酸擴增技術,即環介導等溫擴增技術,英文名稱為“Loop-mediated isothermal amplification",受到了世衛組織、各國學者和相關政府部門的
基因擴增儀的技術原理
技術原理:標記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后,完成高溫變性,低溫復性,適溫延伸的熱循環,并遵守聚合酶鏈反應規律,與模板DNA互補配對的Taqman探針被切斷,熒光素游離于反應體系中,在特定光激發下發出熒光,隨著循環次數的增加,被擴增的目的基因片段呈指數規律增長,通過實時檢測與之對應的隨
核酸雜交的技術原理
其原理是核酸變性和復性理論。即雙鏈的核酸分子在某些理化因素作用下雙鏈解開,而在條件恢復后又可依堿基配對規律形成雙鏈結構。雜交通常在一支持膜上進行,因此又稱為核酸印跡雜交。根據檢測樣品的不同又被分為DNA印跡雜交(Southern blot hybridization )和RNA印跡雜交(Northe
間插序列的定義
中文名稱間插序列英文名稱intervening sequence;IVS定 義基因間或基因內的非編碼序列。應用學科遺傳學(一級學科),分子遺傳學(二級學科)
間插序列的定義
中文名稱間插序列英文名稱intervening sequence;IVS定 義基因間或基因內的非編碼序列。應用學科遺傳學(一級學科),分子遺傳學(二級學科)
質粒維持序列的定義
中文名稱質粒維持序列英文名稱plasmid maintenance sequence定 義存在于重組質粒中的、與保持其在宿主中穩定復制有關的序列。如乳酸菌質粒pGT232的一段由雙鏈復制起點和編碼復制起始蛋白repA的基因所組成的1.7 kb的序列。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),核酸與
序列圖譜的定義
隨著遺傳圖譜和物理圖譜的完成,測序就成為重中之重的工作。DNA序列分析技術是一個包括制備DNA片段化及堿基分析、DNA信息翻譯的多階段的過程。通過測序得到基因組的序列圖譜。
串聯重復[序列]的定義
中文名稱串聯重復[序列]英文名稱tandem repeat定 義首尾相連的重復序列。應用學科遺傳學(一級學科),基因組學(二級學科)
反向重復[序列]的定義
存在于雙鏈核酸分子中排列順序方向相反的一段核苷酸序列。
停止轉移序列的定義
停止轉移序列(stop transfer sequence),肽鏈上的一段特殊序列,與內質網膜的親合力很高,能阻止肽鏈繼續進入內質網腔,使其成為跨膜蛋白質。
恒溫核酸擴增技術對引物的高要求
自80年代PCR技術發明以來,PCR引物的設計已經相當成熟,市場上有很多關于PCR引物設計的軟件可供使用。所以設計一對好的PCR的引物并不困難。恒溫核酸擴增剛好相反。一對或者幾對好的引物對任何一種恒溫核酸擴增技術都是相當關鍵的,可是由于恒溫核酸擴增技術各不相同,引物設計方法很難相互借鑒。目前雖然
核酸和蛋白質序列分析1
在獲得一個基因序列后,需要對其進行生物信息學分析,從中盡量發掘信息,從而指導進一步的實驗研究。通過染色體定位分析、內含子/外顯子分析、ORF分析、表達譜分析等,能夠闡明基因的基本信息。通過啟動子預測、CpG島分析和轉錄因子分析等,識別調控區的順式作用元件,可以為基因的調控研究提供基礎。通過蛋白質基本
核酸和蛋白質序列分析2
(2)輸出:除了以文本形式外,還可以通過JalView顯示和編輯結果。此外,還可以另外使用GeneDoc(常見于文獻)及DNAStar軟件等顯示結果。多序列比對的結果還用于進一步繪制進化樹。3、ORF(Open Reading Frame)分析從核酸序列翻譯得到蛋白質序列,需要進行ORF分析,每個生
恒溫核酸擴增技術與傳統PCR對比
和傳統的PCR技術相比,恒溫核酸擴增不僅僅是縮短了核酸擴增的時間,更重要的是核酸擴增擺脫了對硬件的束縛。PCR技術原理是利用94℃高溫使DNA雙鏈解開,并在耐高溫的DNA聚合酶的作用下擴增DNA片段。PCR反應至少需要2個不同的溫度使DNA片段得到特異性的擴增。恒溫核酸擴增是利用各種酶與DNA之