常用的基因轉染技術病毒載體介紹
1、逆轉錄病毒載體 逆轉錄病毒為RNA病毒，它們的基因組編碼在一條單鏈RNA上，病毒進入細胞通過逆轉錄作用，病毒RNA即轉變為雙鏈DNA分子，DNA進入細胞核并整合在細胞染色體中，這種整合的病毒稱為原病毒。在原病毒的兩端各有一長末端重復序列（LTR），LTR內側還有為復制所必需的其他順序，包括包裝信號。常用的逆轉病毒載體有CMV和SV。 2、DNA病毒載體 主要有腺病毒相關病毒載體，皰疹病毒載體。這一類是利用病毒載體介導的基因轉移，以其高轉染率和良好的靶向性成為腫瘤基因治療的有效方法。對DNA病毒載體的研究是基因治療研究中的重點領域。......閱讀全文
常用的基因轉染技術病毒載體介紹
1、逆轉錄病毒載體 逆轉錄病毒為RNA病毒，它們的基因組編碼在一條單鏈RNA上，病毒進入細胞通過逆轉錄作用，病毒RNA即轉變為雙鏈DNA分子，DNA進入細胞核并整合在細胞染色體中，這種整合的病毒稱為原病毒。在原病毒的兩端各有一長末端重復序列（LTR），LTR內側還有為復制所必需的其他順序，包括
基因轉染技術的病毒方法轉染介紹
病毒作為基因轉染是基因遞送良好的工具，病毒載體的優點有： （1）在轉化的細胞中傳播重組的DNA分子作為穩定的遺傳成分； （2）可能將有缺陷的或突變的基因置于病毒調節信號的控制下以進行研究； （3）能將克隆的基因作為病毒微染色體的一部分 ，并能進行分離； （4）轉移效率較高。其主要缺點是病
基因轉染技術的非病毒方法運載介紹
1、化學轉染法 （1）DEAE-葡聚糖和polybrene聚陽離子法：帶正電的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚體復合物和帶負電的DNA分子使得DNA可以結合在細胞表面。通過使用DMSO或甘油獲得的滲透休克將DNA復合體導入。DEAE－葡聚糖僅限于瞬時轉染。 （2）磷酸鈣共沉淀法 ：將
基因轉染技術的轉染方法介紹
1、轉染 轉染指通過生化或者物理方法將目的基因導入真核細胞中 。 2、感染 感染指通過病毒介導，用基因組中攜帶有克隆目的片斷的病毒來感染靶細胞。
桿狀病毒轉染載體的分類
用于表達融合型蛋白的轉染質粒是一類早期構建的轉染質粒，它包括pAC系列[4],如pAC101、pAC311、pAC360等。在每個載體中，多角體蛋白基因啟動子下游ATG啟始密碼后含有一個單一的BamHⅠ酶切位點，當外源基因和多角體基因的讀碼框架正確時，就可以獲得含1個或幾個多角體蛋白N端氨基酸的融合
基因轉染技術介紹
用的基因轉染技術是將外源基因導入靶細胞需要一定的載體和導入方法，基因轉技術則是將純化的含有靶基因的質粒DNA送入細胞內，并在細胞內表達。轉染方法有多種，根據不同的細胞，貼壁或懸浮細所可選用不同的方法，其目的是要達到設置轉染效率，影響轉染產率的因素有多種，包括轉染方法、操作技術、質粒DNA的純度
基因轉染技術的轉染與分析介紹
具體的基因轉染條件應參考所使用的試劑和方法進行優化。靶基因被導入細胞后，一般在轉染后48小時，靶基因即在細胞內表達。根據不同的實驗目的，48小時后即可進行靶基因表達的檢測等實驗。如若建立穩定的細胞系，則可對靶細胞進行篩選，根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物，最常用的真核表達基因載體
新的非病毒基因載體提高5倍轉染率
聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）是一種陽離子聚合物，已經被廣泛地進行研究，顯示出作為一種有效的基因傳遞工具的前景。同樣地，HIV-1 Tat肽，是一種可透過細胞膜的肽，已經被成功應用于細胞內的基因傳遞。為了提高這兩種載體的良好性能，紐約大學理工學院（NYU-Ploly）和紐
蛋白芯片技術的常用載體介紹
常用的材質有玻片、硅、云母及各種膜片等。理想的載體表面是滲透濾膜（如硝酸纖維素膜）或包被了不同試劑（如多聚賴氨酸）的載玻片。外形可制成各種不同的形狀。Lin，SR等人引采用APTS-BS3技術增強芯片與蛋白質的結合。
非病毒轉染技術在基因編輯中的應用
印第安納大學醫學院的印第安納再生醫學與工程中心(ICRME)是組織納米轉染(TNT)再生醫學技術的發源地，該技術可在活體中實現功能性組織重編程。去年，ICRME的研究人員在《Nature Protocol》上發表了關于如何制造TNT 2.0硅芯片硬件的文章。現在，他們的研究首次證明了TNT可以作為一
病毒包裝技術1——病毒與非病毒載體介紹
基于轉化醫學的研究理念，銳賽知道，每一項臨床疾病的致病源頭或表象最初都是由個體體內某個基因的突變導致了。所以每一項臨床疾病的研究，整體課題項目開展的最初源頭也必須從一個基因開始。 銳賽在多年的轉化醫學研究中，在于各個臨床醫師的整體項目合作中，探討得出的不僅是轉化醫學臨床研究課題的整體思路，
固定化細胞技術載體要求及常用載體介紹
①載體應是親水的，疏水載體與有機溶劑相同的變性影響。②載體也是要求有一定的機械強度和穩定性。③常用的載體包括：1、天然高分子（纖維素、瓊脂糖、淀粉、葡萄糖凝膠、膠原及其衍生物等）2、合成高聚物（尼龍。多聚氨基酸等）3、無機支持物（多孔玻璃、金屬氧化物等）
病毒包裝技術5——腺病毒載體的制備介紹
1 菌液的準備 1.1. 取含目的質粒的甘油菌液（-80℃或-20℃冰箱中），待菌液融化后，在超凈臺用接種環劃線于氨芐抗性的平板上，37℃倒置培養12-16h。待平板長出菌落，挑選生長狀態良好的單克隆菌落。若無目的質粒的菌液，則需取庫存質粒進行轉化，然后挑單克隆搖菌。 1.2. 將單
基因轉染技術的DNA的準備介紹
用于轉染的質粒DNA必須無蛋白質，無RNA和其它化學物質的污染，OD260/280比值應在1.8以上。DNA的質量和純度能影響某些細胞系的轉染效率，可以通過CsCl梯度法或標準柱層析法進行純化。
病毒包裝技術——病毒與非病毒載體
基于轉化醫學的研究理念，銳賽知道，每一項臨床疾病的致病源頭或表象最初都是由個體體內某個基因的突變導致了。所以每一項臨床疾病的研究，整體課題項目開展的最初源頭也必須從一個基因開始。銳賽在多年的轉化醫學研究中，在于各個臨床醫師的整體項目合作中，探討得出的不僅是轉化醫學臨床研究課題的整體思路，一般實驗方向
病毒包裝技術——腺病毒載體的制備
1 菌液的準備1.1. 取含目的質粒的甘油菌液（-80℃或-20℃冰箱中），待菌液融化后，在超凈臺用接種環劃線于氨芐抗性的平板上，37℃倒置培養12-16h。待平板長出菌落，挑選生長狀態良好的單克隆菌落。若無目的質粒的菌液，則需取庫存質粒進行轉化，然后挑單克隆搖菌。1.2. 將單克隆接種于5ml氨芐
常用的分子生物學基本技術（三）
初步應用有關原位PCR技術應用成功的第一篇報道是對感染綿羊中樞神經系統visna病毒在綿羊脈絡從一細胞中檢查，通過PCR擴增，僅用150堿基對的短探針就可通過ISH檢查到了細胞內的visna病毒。從開始在試管內細胞行PCR擴增后再涂片做ISH(原位雜交)檢查，已發展到用福爾馬林固定、石蠟切片的常規病
分子克隆的常用載體介紹
DNA片段的克隆需要合適的載體，載體或是質粒，或是噬菌體，或是病毒，通常大多經過人工改造[地的。作為載體必須具備兩條件：一是該載體在細胞內必須能自主復制，即必須具備復制原點；二是該載體必須具備適合的酶切位點，且這些酶切位點不在復制原點區域內。以上兩條，保證了載體的可繁殖性和可利用性。為了便于獲得陽隆
脂質體載體用于直接體內基因轉染實驗
試劑、試劑盒 氯仿 DC-Chol 儲存液DOPEDOTAP膽固醇儲存液葡萄糖儀器、耗材 透紫外燈玻璃離心管氮氣桶真空干燥器水浴超聲破碎儀水浴鍋擠壓機聚碳酸酯膜濾器實驗步驟 1.用氯仿將 30.0ml 的透紫外燈玻璃管漂洗 3 次。2.混勻用于準備脂質體的在透紫外燈玻璃管中的適當的脂質。（1）對于
脂質體載體用于直接體內基因轉染實驗
試劑、試劑盒氯仿DC-Chol 儲存液DOPEDOTAP膽固醇儲存液葡萄糖儀器、耗材透紫外燈玻璃離心管氮氣桶真空干燥器水浴超聲破碎儀水浴鍋擠壓機聚碳酸酯膜濾器實驗步驟1.用氯仿將 30.0ml 的透紫外燈玻璃管漂洗 3 次。2.混勻用于準備脂質體的在透紫外燈玻璃管中的適當的脂質。（1）對于 DC-C
關于基因轉染技術的簡介
基因轉染技術將特定的遺傳信息傳遞到真核細胞 中，這種技術不但革新了生物學和醫學中許多基本問題的研究，也推動了診斷和治療方面的分子技術 發展，并使基因治療 成為可能。基因轉染已廣泛用于基因的結構和功能分析、基因表達與調控、基因治療與轉基因動物等研究。
簡述基因轉染技術的應用
1 、用于建造疾病的動物模型和藥物篩選模型 2 、用于基因治療 3 、用于異種器官移植 4 、用于改良動植物品種和生產性能 5 、用于生產藥用蛋白和保健蛋白 6 、用于生產人抗體
轉染實驗常用的報告基因（植物、動物）
報告基因(reporter gene)是一種編碼可被檢測的蛋白質或酶的基因，是一個其表達產物非常容易被鑒定的基因。把它的編碼序列和基因表達調節序列相融合形成嵌合基因，或與其 它目的基因相融合，在調控序列控制下進行表達，從而利用它的表達產物來標定目的基因的表達調控，篩選得到轉化體。
痘苗載體轉染細胞實驗
CaCl2 法 DOTAP 法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將感興趣的外源基因亞克隆到質粒轉移載體上，外源基因的兩端為痘苗病毒基因組非必需基因片段。隨后，將重組質
痘苗載體轉染細胞實驗
實驗方法原理 將感興趣的外源基因亞克隆到質粒轉移載體上，外源基因的兩端為痘苗病毒基因組非必需基因片段。隨后，將重組質粒轉染病毒感染的細胞，痘苗病毒基因組與質粒上同源的部分發生同源重組。應用適當的篩選方案，經幾輪噬斑純化，從細胞裂解物中獲得重組病毒。實驗材料 pSCll／pRB21／pSC65／pLW
基因治療時代到來：常用基因治療載體的介紹與選擇
基因治療載體分為兩大類：病毒載體（主要包括慢病毒、腺病毒、逆轉錄病毒、腺相關病毒等），非病毒載體（主要包括裸露DNA、脂質體、納米載體等） 在講基因治療載體前，我們先講一下基因治療中的兩個概念：in vivo和ex vivo。 in vivo：活體直接轉移，將帶有遺傳物質的載體直接注射到實驗
常用的分子生物學基本技術2
IS PCR的技術特點 （1）既具有PCR的特異性與高靈敏性，又具有原位雜交的定位準確性；（2）測到低于2個拷貝量的細胞內特定DNA序列，甚至可檢測出單一細胞中的僅含一個拷貝的原病毒DNA；（3）有助于細胞內特定核酸序列定位與其形態學變化的結合分析；（4）可用于正常或惡性細胞，感染或非感染細胞的鑒定
病毒包裝技術3——慢病毒載體構建及包裝流程介紹
1 菌液的準備 1.1. 取含目的質粒的甘油菌液（-80℃或-20℃冰箱中），待菌液融化后，在超凈臺用接種環劃線于氨芐抗性的平板上，37℃倒置培養12-16h。待平板長出菌落，挑選生長狀態良好的單克隆菌落。若無目的質粒的菌液，則需取庫存質粒進行轉化，然后挑單克隆搖菌。 1.2. 將單
我國專家發現羥基磷灰石可作納米基因轉染載體
我國耳鼻咽喉科專家、中南大學湘雅三醫院院長孫虹教授和他的科研團隊經過十年研究發現，運用羥基磷灰石作為無機納米基因轉染載體，用以治療內耳感覺神經性耳聾疾病，并在白豚鼠試驗中獲得良好效果。這一研究成果獲得國際業內專家的廣泛認可。 國內外多家實驗室研究證明，利用基因治療原理，向內耳
關于病毒載體的基本介紹
病毒載體可將遺傳物質帶入細胞，原理是利用病毒具有傳送其基因組進入其他細胞，進行感染的分子機制。可發生于完整活體（in vivo）或是細胞培養（in vitro）中。可應用于基礎研究、基因療法或疫苗。