PCR純化,跑膠沒有出現條帶,是什么原因
你要確定你PCR有沒有擴增出條帶,先用檢測膠點了看一下。如果檢測膠可以看到條帶,回收膠看不到的話,可能是你PCR的產物的量太少了,回收膠膠孔寬,PCR結果不好的條帶可能就看不到了。如果你確定你的PCR的產物是有的,明亮的,但是跑回收看不到,那么,跑膠用的TAE/TBE是不是1X的,你點膠的時候PCR產物里有沒有加足夠的loading你的膠里有沒有加EB/泡EB(或其他染色劑)可能是你做的瓊脂糖凝膠沒有做好我之前也有回收載體,明明就很明亮,但是東西都在膠孔里面跑不出來T. T我覺得這種情況和loading的關系比較大......閱讀全文
以硅膜為基礎純化-PCR-產物實驗方法
試劑、試劑盒 乙醇PCR 樣品儀器、耗材 真空裝置真空泵真空廢物收集裝置真空管PCR 純化系統實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑乙醇,80%(75 ml/板;使用前配制)2. 核酸和寡核苷酸在 96 孔板中的 PCR 樣品(每樣品 20?lOOul)3. 特殊設備Vac-man96 真空裝置
以硅膜為基礎純化-PCR-產物實驗方法
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 乙醇 PCR 樣品 儀器、耗材 真空裝置 真空泵 真空廢物收集裝置
PCR純化,跑膠沒有出現條帶,是什么原因
你要確定你PCR有沒有擴增出條帶,先用檢測膠點了看一下。如果檢測膠可以看到條帶,回收膠看不到的話,可能是你PCR的產物的量太少了,回收膠膠孔寬,PCR結果不好的條帶可能就看不到了。如果你確定你的PCR的產物是有的,明亮的,但是跑回收看不到,那么,1.跑膠用的TAE/TBE是不是1X的,你點膠的時候P
實驗室PCR產物的電泳及純化分析
實驗室PCR 產物的電泳及純化一、目的(1)了解PCR產物電泳與純化的原理。(2)熟悉和掌握PCR產物電泳與純化的操作。二、原理在PCR過程中,部分引物和dNTPs在Taq酶等因子的作用下以DNA模板為指導合成新的DNA分子,當然還有一部分的引物和dNTPs沒有完成所期望的任務,以小分子的形式存在于
PCR純化,跑膠沒有出現條帶,是什么原因
你要確定你PCR有沒有擴增出條帶,先用檢測膠點了看一下。如果檢測膠可以看到條帶,回收膠看不到的話,可能是你PCR的產物的量太少了,回收膠膠孔寬,PCR結果不好的條帶可能就看不到了。如果你確定你的PCR的產物是有的,明亮的,但是跑回收看不到,那么,跑膠用的TAE/TBE是不是1X的,你點膠的時候PCR
PCR純化,跑膠沒有出現條帶,是什么原因
你要確定你PCR有沒有擴增出條帶,先用檢測膠點了看一下。如果檢測膠可以看到條帶,回收膠看不到的話,可能是你PCR的產物的量太少了,回收膠膠孔寬,PCR結果不好的條帶可能就看不到了。如果你確定你的PCR的產物是有的,明亮的,但是跑回收看不到,那么,跑膠用的TAE/TBE是不是1X的,你點膠的時候PCR
PCR產物電泳做膠回收不也得到純化的目的
PCR產物純化試劑盒去除的是PCR反應體系中的離子、dNTP、引物以及聚合酶,收集其中的DNA片段。這只適合于幾乎沒有非特異性條帶的PCR產物的收集。如果你的PCR產物具有非特異性條帶,那么一定需要使用膠回收試劑盒。
PCR擴增產物鑒定與純化實驗原理及實驗過程
實驗原理瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。(原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗)本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒(Agarose Gel DNA Purification Kit),該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統,結合DNA制
PCR擴增產物鑒定與純化實驗原理及實驗過程
?實驗原理瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。(原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗)本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒(Agarose Gel DNA Purification Kit),該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統,結合DNA制備膜技
pcr產物沒有純化能夠直接進行雙酶切嗎
PCR產物經PCR純化試劑盒純化后,可以做EcoRI和BamHI的雙酶切。酶切、純化都可以用PCR純化試劑盒完成,只有一種情況例外,PCR模板為質粒,且這個質粒和要用的載體有相同的抗性。此時需要跑一次膠來丟掉模板質粒,否則在連接產物轉化的平板上長出的菌落許多是模板質粒,而不是你所構建的質粒。PCR產
病毒純化和蛋白純化區別
病毒純化和蛋白質純化都是生物制劑工程中常見的分離純化方法,但它們的對象不同,具體區別如下:1. 病毒純化與蛋白質純化對象不同。病毒純化的目標是將病毒從其它生物物質中進行分離和去除,以獲得單個且純凈的病毒顆粒,如用于疫苗生產的病毒載體,而蛋白質純化的目標是從生物體或來源中提取和純化單一或多種蛋白質,如
細胞的純化方法介紹(自然純化和人工純化)(一)
體外培養的細胞源于人或動物或胚胎組織,體內的細胞都是混雜生長,每一種組織都有血管和間葉組織,因此,來源于上述組織的培養材料的原代細胞、傳代細胞絕大多數都呈混合生長,既有上皮樣細胞又有纖維樣細胞,纖維樣細胞又包括成纖維細胞、肌細胞、骨細胞、滑膜細胞等,混雜的細胞會直接影響實驗結果,而利用體外培養細胞進
細胞的純化方法介紹(自然純化和人工純化)(二)
(1)上皮細胞與成纖維細胞的分離純化: 兩者在胰蛋白酶的作用下,由于成纖維細胞先脫壁,二上皮細胞要消化相當長的時間才脫壁,特別是在原代細胞初次傳代和早期傳代中兩種差別尤為明顯,故可采用多次差別消化方法將上皮細胞和成纖維細胞分開,方法步驟如下。 采用常規消化傳代方式將0.25%胰蛋白酶注入培養
核酸純化儀簡介/核酸純化儀
Nucleic Acid Extraction System是使用通用磁珠法提取核酸的高科技產品,具有自動化程度高,提取速度快,結果穩定,操作簡便的優點。利用一般生化專用的96孔反應盤,可同時操作1-32個樣品,可廣泛應用于常規科研、基因組學、疾控系統、食品安全、法醫等領域。使用本儀器只需加入樣品與
抗體純化
Antibody PurificatioinPurification of IgG Using Protein A- or Protein G-Agarose?(KPL)?Purifying Antibodies?(Perkin-Elmer)Precipitation MethodsProtein
純化DNA實驗_純化質粒(堿裂解法)
實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒LB葡萄糖緩沖液乙酸鉀儀器、耗材離心管實驗步驟1. 單個大腸桿菌克隆接種到 2 ml 含適當抗生素的 LB 中。37℃ 劇烈振蕩孵育 5~8 小時。或者可以培養過夜使飽和。2. 倒 1.5 ml 培養液到已作標記的微量離心管中。把剩下的培養液存放在 4℃。3. 在微量離心
核酸純化儀應用領域/核酸純化儀
幾乎在每個實驗室,與生物分子相關的分離純化工作都是十分重要,且必不可少的。但要對多個樣品進行純化還是相當困難的,不僅需要選擇合適的純化技術,而且工作量也特別大,很難滿足當前飛速發展對高通量樣品進行提取純化的需求。TIANLONG NP968磁珠提取純化系統是使用磁珠法技術,可同時操作1-32個樣
純化RNA實驗——從組織中純化總RNA
實驗材料組織試劑、試劑盒RNA 抽提緩沖液氯仿實驗步驟1. 從動物取下組織,直接進行第 2 步或在液氮中快速冷凍新鮮解剖的組織。冷凍后的組織可以貯存在 -70℃。2. 組織(0.05~0.3 g)在 2.0 ml RNA 抽提緩沖液中勻漿。3. 每管加 200 μl 氯仿,混合均勻,冰浴 15 分鐘
蛋白純化服務
蛋白純化服務內容1、純化抗血清、免疫腹水、細胞上清得到抗體IgG或IgM純化方法免疫親和層析純化法Protein A/G親和層析法辛酸-硫酸銨沉淀法飽和硫酸銨沉淀法等2、純化重組蛋白粗品3、純化客戶天然蛋白粗品純化方法離子交換疏水分子排阻色譜法4、可用客戶提供的抗體制備免疫親和層析柱,使用免疫親和層
凝膠純化實驗
試劑、試劑盒蒸餾水乙醇甲酰胺膠的緩沖液亞甲基藍十二烷基硫酸鈉儲存液TAE 緩沖液Tris 乙酸鹽乙酸納EDTA藍色葡聚糖TEN 緩沖液40mer聚丙烯酰胺膠儀器、耗材解剖刀UV 燈過濾 UV 的安全破璃實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑蒸餾水乙醇,95%甲酰胺 (使用安珀萊特單床離子交換樹脂
核酸純化方法
核酸抽提與純化是分子生物學試驗的基礎,核酸純化方法是影響提取核酸質量高低的最重要因素,也是下游分子生物學試驗成敗的關鍵。目前常見的核酸純化方法有PC 抽提/醇沉淀方法、高鹽沉淀蛋白質/醇沉淀方法、離心柱法和生物磁珠法,這幾種方法各有其優勢和劣勢。?
DNA純化實驗
實驗方法原理 硅膠膜可在高鹽條件下結合DNA,又可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物、單核苷酸、酶、礦物油、鹽離子等雜質因為沒有與DNA相似的特性,所以被分離開來。實驗材料?PCR產物試劑、試劑盒?PCR清潔試劑盒儀器、耗材?96孔DNA制備板96孔深孔板96孔V型底板實驗
凝膠純化實驗
試劑、試劑盒 蒸餾水乙醇甲酰胺膠的緩沖液亞甲基藍十二烷基硫酸鈉儲存液TAE 緩沖液Tris 乙酸鹽乙酸納EDTA藍色葡聚糖TEN 緩沖液40mer聚丙烯酰胺膠儀器、耗材 解剖刀UV 燈過濾 UV 的安全破璃實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑蒸餾水乙醇,95%甲酰胺 (使用安珀萊特單床離子交換
免疫純化實驗
實驗方法原理 制備免疫親和柱要求抗體首先共價結合到介質上。另一方法是將抗體結合到蛋白 A 或 G 小珠上,再用交聯劑固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 結合在杭體的 Fe 區, 所以結合抗原的部位獲得充分暴露,從易于接近。免疫親和柱制備完成后,抗原溶液即可以上樣,接著洗去污染物,然后洗脫抗
免疫純化實驗
在蛋白質純化方法中抗體親和純化是非常有效的方法之一。僅此一步常可獲得 1000~10 000 倍的純化。如果抗體與目的蛋白的結合的特異性得到證明,并且洗脫的目的蛋白沒有受到不可逆的損傷,那么可以認為免疫純化是極好的蛋白質純化方法,特別是用在純化過程的最后步驟。實驗方法原理制備免疫親和柱要求抗體首先共
DNA純化實驗
PCR清潔試劑盒純化法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 硅膠膜可在高鹽條件下結合DNA,又可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物、單核苷酸、酶、礦物油
凝膠純化實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 蒸餾水 乙醇 甲酰胺 膠的緩沖液 亞甲基藍 十二烷基硫酸鈉儲存液 TAE 緩沖液 Tris
純化相關材料
純化相關材料:瓊脂糖凝膠介質及柱子選擇指南:?http://bbs.bioon.net/dispbbs.asp?BoardID=92&ID=56965gst融合蛋白純化指南:http://bbs.bioon.net/dispbbs.asp?BoardID=92&ID=56974染料親和純化:http
免疫純化實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 制備免疫親和柱要求抗體首先共價結合到介質上。另一方法是將抗體結合到蛋白 A 或 G 小珠上,再用交聯劑固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 結合在杭體的 Fe 區, 所以結合抗原的部位獲得充分暴露,從易于接近。免疫親和柱
純化DNA實驗
從哺乳動物細胞或組織分離DNA 基因組DNA的快速純化 純化質粒(堿裂解法) ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞