純化RNA實驗——從組織中純化總RNA
實驗材料組織試劑、試劑盒RNA 抽提緩沖液氯仿實驗步驟1. 從動物取下組織,直接進行第 2 步或在液氮中快速冷凍新鮮解剖的組織。冷凍后的組織可以貯存在 -70℃。2. 組織(0.05~0.3 g)在 2.0 ml RNA 抽提緩沖液中勻漿。3. 每管加 200 μl 氯仿,混合均勻,冰浴 15 分鐘。4. 接下去的步驟和“從培養的細胞中純化總RNA”方法步驟 4 以下的步驟相同。......閱讀全文
純化RNA實驗
從培養的細胞中純化總RNA 從組織中純化總RNA ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
純化RNA實驗——從組織中純化總RNA
實驗材料組織試劑、試劑盒RNA 抽提緩沖液氯仿實驗步驟1. 從動物取下組織,直接進行第 2 步或在液氮中快速冷凍新鮮解剖的組織。冷凍后的組織可以貯存在 -70℃。2. 組織(0.05~0.3 g)在 2.0 ml RNA 抽提緩沖液中勻漿。3. 每管加 200 μl 氯仿,混合均勻,冰浴 15 分鐘
利用-Marligen-總-RNA-快速純化系統純化總-RNA-實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 乙醇 β-巰基乙醇 儀器、耗材 轉子-定子均化器或類似設備
利用-Marligen-總-RNA-快速純化系統純化總-RNA-實驗
由 Marligen Biosciences 提供的 Rapid Total RNA System 可從各種樣品中提取 RNA,且產量和質量非常穩定。本實驗來源于 PCR 實驗指南(第二版),作者:種康,瞿禮嘉。 試劑、試劑盒 乙醇β-巰基乙醇 儀器、耗材 轉子-定子均
利用-Marligen-總-RNA-快速純化系統純化總-RNA-實驗
試劑、試劑盒 乙醇β-巰基乙醇 儀器、耗材 轉子-定子均化器或類似設備 Marligen Rapid Total RNA System 實驗步驟 一、材料 1.緩沖液、溶液和試劑 乙醇,70%和100% β-巰基乙醇 2.特殊設備 轉子-定子均化器或
純化RNA實驗——從培養的細胞中純化總RNA
實驗材料細胞試劑、試劑盒RNA 提取緩沖液變性液水飽和酚儀器、耗材培養皿Falcon 2063 管實驗步驟1. 取 1 個細胞已長滿的 100 ml 培養皿,吸出培養液,加 2 ml RNA 提取緩沖液,用橡膠刮棒刮下細胞。RNA 提取緩沖液:變性液,20 mlβ-巰基乙醇,0.144 ml2 mo
使用-Trizol-純化-RNA-實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 磨細的組織 試劑、試劑盒 Trizol 氯仿 異丙醇 乙醇
使用-Trizol-純化-RNA-實驗
RNA 分離的酚基試劑的生產以 Chomczynski 方案為基礎。這些方案在從富含 RNA 酶的組織如胰腺中獲取 RNA 時最有用。這里介紹的是隨 Invitrogen 的 Trizol 試劑出售的方案的摘要,經 Invitrogen 允許做了修改。本實驗來源于 PCR 實驗指南(第二版),作者:
使用-Trizol-純化-RNA-實驗
實驗材料 磨細的組織試劑、試劑盒 Trizol氯仿異丙醇乙醇DEPC處理過的水實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑Trizol(Invitrogen)氯仿異丙醇乙醇,75%,用焦碳酸二乙酯(DEPC) 處理過的水配制DEPC 處理過的水2. 細胞和組織50~100 mg 已磨細的組織二、方法1
RNA-的提取和純化實驗
雖然 FDD 利用了真核 mRNA 的多聚腺苷酸 [poly(A)+] 位點,但并不推薦使用 poly(A)+RNA,因為在反轉錄反應中可能污染寡核苷酸,并因此增加假陽性的概率。所以建議使用總 RNA 做 FDD 分析。本實驗來源于 PCR 實驗指南(第二版),作者:種康,瞿禮嘉。試劑、試劑盒氯仿焦
RNA-的提取和純化實驗
試劑、試劑盒 氯仿焦碳酸二乙酯乙醇異丙醇苯酚-胍鹽單相溶液磷酸鹽緩沖液儀器、耗材 離心機和轉頭移液器離心管錐形管平板勻漿器實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑氯仿焦碳酸二乙酯(DEPC) 處理過的 H20(GenHimterR105)乙醇70% 乙醇洗液(用 DEPC 處理過的 H20 配制)
RNA-的提取和純化實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 氯仿 焦碳酸二乙酯 乙醇 異丙醇 苯酚-胍鹽單相溶液 磷酸鹽緩沖液
RNA分離與分析實驗_用丙烯酰胺尿素凝膠純化RNA
實驗材料RNA試劑、試劑盒TBE 緩沖液丙烯酰銨溶液過硫酸銨水溶液RNA 染色液儀器、耗材玻璃板實驗步驟1. 準備下列溶液:TBE 緩沖液:Tris 堿 54 g,硼酸 27.5 g,0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0)? 20 ml,溶解并加水至 1000 ml。當發現貯存液有白色沉淀
分離純化總RNA
1)??????用酸性酚-硫氰酸胍-氯仿提取純化組織和細胞中的RNA1.??????選取從組織細胞或細胞中提取RNA的適宜方法組織a.???????分離組織并立即置于液氮中。b.??????將約100 mg冰凍組織含液氮的研缽中,用研棒研磨。研磨過程中可加入液氮使組織保持冰凍狀態。c.???????
RNA提取與純化
實驗概要掌握RNA提取的基本技術,了解RNA提取過程中的各種注意事項。實驗原理RNA提取是分子生物學實驗中難度較大的實驗技術。?RNA提取和DNA提取有類似的地方,因為它們都是核酸,都具有較好的水溶性。提取RNA首先破碎細胞,然后用提取液將RNA溶出,反復抽提去除蛋白質,加入乙醇沉淀RNA,將RNA
利用-ConcertPlant-試劑從植物組織中純化-RNA-實驗
以下概述的是 ConcertPlant 試劑(Invitrogen) 所附帶的方案。該方案不是以酚為基礎的,但需要加氯仿。該試劑用于多種植物的組織中分離 RNA, 包括藍葉云杉針、馬鈴薯塊莖、玉米種子和棉花葉。本實驗來源于 PCR 實驗指南(第二版),作者:種康,瞿禮嘉。 實驗材料
利用-ConcertPlant-試劑從植物組織中純化-RNA-實驗
實驗材料 植物組織 試劑、試劑盒 Concert Plant RNA試劑NaCl氯仿異丙醇乙醇DEPC處理過的水 實驗步驟 一、材料 1.緩沖液、溶液和試劑 ConcertPlantRNA試劑(Invitrogen),4°C預冷 NaCl,5mol/L(無RNA酶)
RNA的分離與純化
包括Northern雜交在內的許多分子生物學實驗均是以RNA為材料,mRNA的制備也需要一定質量的總RNA樣品,RNA的數量、純度與完整性將直接影響這些實驗的結果。RNA中rRNA的數量最多,占總量的80%~85%;tRNA及核內小分子RNA占15%~20%;mRNA僅占1%~5%。由于各種rRNA
Poly(A)+RNA的分離純化
1)??????Poligo(dT)-纖維素層析法提取poly(A)+RNA裝柱與填柱1.??????取oligo(dT)-纖維素0.5~1.0 g,用0.1 mol/L NaOH重懸。2.??????用oligo(dT)-纖維素(0.5~1.0 ml柱體積)灌注DEPC處理過的一次性柱子(或塞以無
樣品RNA的分離與純化
含106個細胞液加等量純化溶液[4mol/L胍基硫氰酸鹽,25mmol/L檸檬酸pH7.0,0.5%肌氨酸(sarcosyl),0.1mol/l 2-巰基乙醇]。總體積為細胞沉淀4-5倍,混勻。加0.1體積2ml/L乙酸鈉(pH4.1),1體積酚(重蒸水上封),0.2體積CIAA,混勻器劇烈
動物組織RNA提取及純化
實驗概要提取樣品組織中的RNA并消除DNA污染實驗原理Trizol裂解細胞使RNA釋放beta巰基乙醇一直RNase活性酚-氯仿抽提分離RNARNase-Free DNase消除DNA污染主要試劑Trizol無水乙醇氯仿(三氯甲烷)異丙醇RQ1 RNase-Free DNase(Promega,M6
總RNA分離純化標準操作
實驗概要本實驗介紹了總RNA分離純化標準操作規程(SOP)。實驗原理氯仿是分子量比較大的有機溶劑,在提取RNA時,氯仿可以有效的使有機相和無機相迅速分離。DNA提取過程有機相中主要是酚和蛋白結合,從而使得蛋白和DNA脫離,DNA進入水相。但是在RNA的提取過程就要避免蛋白和DNA脫離,否則DNA會釋
半制備規模單鏈RNA純化
引言寡核苷酸合成是非常高效和高產率的過程。在固相載體上進行寡核苷酸反應的典型產率為每耦合階98~99.5%。在典型的多階寡核苷酸合成中,雜質聚集在一起,即使是一般大小的21基體寡核苷酸的總產率也達到67~90%,較長鏈的寡核苷酸的產率相應較低。研究人員通常需要使用純度高于初步合成混合物的材料。因此,
信使RNA的提取、分離和純化
真核細胞的mRNA分子最顯著的結構特征是具有5’端帽子結構(m7G)和3’端的Poly(A)尾巴。絕大多數哺乳類動物細胞mRNA的3’端存在20-30個腺苷酸組成的Poly(A)尾,通常用Poly(A+)表示。這種結構為真核mRNA的提取,提供了極為方便的選擇性標志,寡聚(dT)纖維素或寡聚(U)瓊
信使RNA的mRNA提取分離純化
真核細胞的mRNA分子最顯著的結構特征是具有5’端帽子結構(m7G)和3’端的Poly(A)尾巴。絕大多數哺乳類動物細胞mRNA的3’端存在20-30個腺苷酸組成的Poly(A)尾,通常用Poly(A+)表示。這種結構為真核mRNA的提取 ,提供了極為方便的選擇性標志,寡聚(dT)纖維素或寡聚(U)
RNA提取純化的注意事項
由于RNA酶的廣泛存在與難以滅活的頑固特性。使得RNA的提取純化和后續工作變得非常困難。關于 RNA and RNases,你應該了解些什么?RNases 是非常穩定和活躍的一種酶,一般不需要輔助因子的功能,因而在實驗室內 RNA 很容易被降解如果不預先消除可能的 RNase 污染,請不要使用任何塑
半制備規模單鏈RNA純化
寡核苷酸合成是非常高效和高產率的過程。在固相載體上進行寡核苷酸反應的典型產率為每耦合階98~99.5%。在典型的多階寡核苷酸合成中,雜質聚集在一起,即使是一般大小的21基體寡核苷酸的總產率也達到67~90%,較長鏈的寡核苷酸的產率相應較低。研究人員通常需要使用純度高于初步合成混合物的材料。因此,
病毒DNA和RNA的簡易純化技術
生物通報道:EZ1病毒迷你試劑盒(EZ1 Virus Mini Kit)是一種能夠用于生命科學研究中的病毒DNA和RNA提純的新型試劑盒。這種試劑盒提供了一種全自動的同步純化來自血清、血漿和無細胞體液中的病毒DNA和RNA的能力,并且能對下游分析提供高靈敏度的檢測。BioRobot? EZ1工作區的
Trizol法提取總RNA的純化要求
1.純化后不應存在對酶(如逆轉錄酶)有抑制作用的物質。2.排除有機溶劑和金屬離子的污染。3.蛋白質、多糖和脂類分子等的污染降到最低程度。4.排除DNA分子的污染。
常規組織樣本核酸(DNA/RNA)提取純化
20 分鐘內快速純化高品質,高產量,即用型 DNA(見圖 20)多種規格可選擇:Mini Kit 可處理 25 mg 組織,Micro Kit 可處理小于 10 mg 組織完全去除污染物和抑制劑可在 QIAcube 上進行自動化純化表1 QIAamp DNA Mini Kit純化各類樣本的核酸產量樣