“黃禹錫事件”9年后科學家終獲人體胚胎干細胞
研究人員使用嬰兒DNA成功制作出胚胎干細胞，但他們還不能證明當核供體細胞是成人細胞時，該技術同樣能起作用。 這次看起來是玩兒真的：研究人員利用與克隆多利羊相似的方法制作出個體化的人體胚胎干細胞，而成功的“秘訣”之一便是額外添加了一罐咖啡。 這項實驗制作出的干細胞所攜帶的DNA屬于一個患有遺傳性疾病的嬰兒，而這次成功距韓國研究人員在一篇著名的偽造論文中聲稱自己完成了相似壯舉已有9年時間。2004年，韓國科學家黃禹錫曾經宣稱他帶領的研究組已經首次成功實現了人體胚胎克隆，并成功從克隆胚胎上提取了干細胞。但后來被證實他的這項研究存在造假行為。 在韓國論文造假事件穿幫后，仍有少量研究人員在繼續進行試驗，但是人類受精卵或卵母細胞對相關技術反應較差，盡管這些技術在羊、老鼠、牛、豬以及其他動物中均獲成功。 如今，借助多年猴子細胞實驗積累的數據，美國比弗頓靈長類動物研究中心的Shoukhrat Mitalipov及......閱讀全文
克隆心得：幫助新手快速做出克隆1
本方法的核心部分是醫科院基礎所的生化脂蛋白組的吳剛老師所創，我在其基礎上進行了一些改動，主要是DNA回收上采取了更簡單的方法。（本方法最適用于雙酶切制作片斷并進行克隆的情況。對于分步酶切制作片斷，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。）一、片斷平移的克隆（也適用于多片斷連接）簡介：將用作載
克隆心得：幫助新手快速做出克隆2
酶切直接在回收PCR產物的試管中配置酶切體系：PCR產物酶切－制作插入片斷公用Buffer 6μl酶 I 3μl酶 II 3μlPCR產物 ——雙蒸水 48μl合計 60μl要將PCR產物接入的質粒載體A，取A質粒3μl進行酶切。A質粒酶切－制作載體片斷公用Buffer 3μl酶 I 1μl酶 II
單克隆抗體(monoclonal－antibody)克隆化技術
經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。?克隆化的陽性雜交瘤細胞，經
關于單克隆抗體的克隆方法介紹
1．配2.5%的瓊脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。 2．將117ml完全DMEM液和3ml10倍濃度的DMEM液混合，置45℃水浴預熱。 3．將瓊脂糖與DMEM液混合，即為含0.5%瓊脂糖的完全DMEM液，并加75×108脾細胞。 4．每塊平皿加10ml，于室溫中凝固。 5．
克隆經驗—幫助新手快速做出克隆3
酶切直接在回收PCR產物的試管中配置酶切體系：PCR產物酶切－制作插入片斷公用Buffer 6μL酶 I 3μL酶 II 3μLPCR產物 ——雙蒸水 48μL合計 60μL要將PCR產物接入的質粒載體A，取A質粒3μL進行酶切。A質粒酶切－制作載體片斷公用Buffer 3μL酶 I 1μL酶 II
克隆經驗—幫助新手快速做出克隆4
9. 在一新1.5mL 離心管中加入 900μL 預冷 無水乙醇、20μL 3M的醋酸鈉。將步驟8的上清小心加入本步驟離心管中。顛倒數次混勻。12000rpm 4℃ 離心15分鐘。（提示 吸取步驟8中的上清時，千萬不要將有機相吸入，寧可放棄一些上清，否則影響后面的連接反應。 另外，本方法
克隆經驗:幫助新手快速做出克隆1
本方法的核心部分是醫科院基礎所的生化脂蛋白組的吳剛老師所創，我在其基礎上進行了一些改動，主要是DNA回收上采取了更簡單的方法。（本方法最適用于雙酶切制作片斷并進行克隆 的情況。對于分步酶切制作片斷，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。）一、片斷平移的克隆 （也適用于多片斷連接）簡介：將用
克隆經驗:幫助新手快速做出克隆2
（提示 關于酶量的問題。通常的內切酶效價在10U/μL左右，3μL內切酶相當于30U，足夠切10μL的質粒。因為通常小提質粒的濃度在200－600ng /μL，一般濃度達不到1μg/μL。根據1U酶切1μg質粒的原則，這一酶量是足夠的。）1%瓊脂糖回收膠回收（碎膠、酚氯仿抽提法）1. 酶切產物加入1
PCR擴增產物的克隆——TA克隆法
實驗方法原理TA克隆 系統由Invitrogen公司（San Diego，CA）發展而來的商業性試劑盒，它用于PCR 產物的克隆 和測序。其原理是利用Taq酶能夠在PCR 產物的3'末端加上一個非模板依賴的A，而T載體是一種帶有3'T突出端的載體，在連接酶作用下，可以快速地、一步到位
克隆經驗—幫助新手快速做出克隆5
1. 連接產物10μL、5×KCM溶液10μL、雙蒸水30μL，（共50μL）混勻，置冰上。2. 從-70℃冰箱中取 1支感受態細胞，置冰上。融化后立即取50μL，加入步驟1中的混合液中，輕輕吹打數次混勻（不可用力過大，不可渦旋）， 立即置冰上。3. 冰上放置20 分鐘。4. 室溫放置10分鐘。5.
近年來胚胎干細胞研究及相關領域重要事件
近些年來，胚胎干細胞研究取得了不少重要成果，同時專家在研制與這種干細胞類似的“多能細胞”方面也獲得了進展。?2002年3月，美國懷特黑德生物醫學研究所借助克隆技術成功對實驗鼠進行了胚胎干細胞治療，首次在動物身上證實“治療性克隆”技術是可行的。?2002年10月，中國中山大學第二附屬醫院用人工受精卵發
干細胞研究在謹慎中大步邁進
干細胞在細胞治療、組織工程、藥物篩選、發育研究以及基因功能研究中具有很好的應用前景。早在1967年，美國華盛頓大學托馬斯教授就提出將干細胞用于醫療的觀點，但直至2005年，干細胞市場才快速發展起來。近日，美國Advanced Stem cell 公司首席科學家Robert Lanza成功利用胚胎
什么是克隆？
“克隆”這個詞聽上去并不陌生，在我們的日常生活中也會經常用到它。比如，每當春暖花開時，有人喜歡進行植物扦插的試驗。從一棵植株上剪下的植條，通過扦插而形成許多遺傳物質的組成完全相同的植株就是克隆；又比如有一種樣子像蘋果，但滋味像梨的水果——梨蘋果就是采用樹嫁接培育而成的。嫁接形成的產物也是克隆；還有將
細胞克隆染色
做克隆形成率的染色非常非常簡單,因為克隆產生的細胞集落非常清晰,大的甚至肉眼可辯.對染色方法只有一個基本要求,染細胞不染培養容器就可以了.非常多的染料可以用作此用途.像是一樓所說的結晶紫也可以.
miRNA－－克隆實驗
實驗方法原理 在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起著非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 維持著基因的表達，還有一部分則起著調控基因表達的作用。實驗材料 寡核
定位候選克隆
當前，人類基因組研究的重心正在由“結構”向“功能”轉移，一個以基因組功能研究為主要內容的所謂“后基因組時代”(post-genomics)，也即功能基因組(functional genomics)時代，即將到來。如何獲取基因的功能信息，即與人類重大疾病和重要生理功能相關的基因信息，就擺在了我們面前。
靶向克隆法
靶向克隆法是一種新的基因克隆方法，該克隆方法的特點是：在基因克隆過程中不使用已有的DNA Ligase，而是使用新開發的靶向克隆酶。靶向克隆酶能夠使末端序列相同的雙鏈DNA(14bp-18bp)同源重組，從而達到克隆基因的目的。LP Recco酶，中文名：靶向克隆酶，無需傳統基因克隆所需要的限制性內
miRNA克隆實驗
在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起著非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 維持著基因的表達，還有一部分則起著調控基因表達的作用。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主
核糖克隆實驗
試劑、試劑盒 ATEN 緩沖液DNA 緩沖液（TEN)KLA 緩沖液T5E5Dpn IKlentaq LA 蛋白酶 K蛋白酶K儲存緩沖液 RNA 酶 A設計好的載體已經進行 5'端生物素-TEG 修飾并且 3'端核糖胞嘧啶或者核糖尿嘧啶修飾過的引物卡那霉素（Sigma)四
PCR產物克隆
PCR克隆主要有TA克隆法, 限制性酶切與連接法，雜交法和近期開發出來的特異性重組法等。但因為TA克隆法操作最簡單，快速和高效的原因，成為Taq聚合酶PCR產物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen發明，并擁有全球TA Cloning商標的ZL權。TA克隆方法（Original TA Cl
制備克隆實驗
試劑、試劑盒ATP-巰基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶連接緩沖液T4DNA 連接酶平末端插入物克隆載體培養基儀器、耗材FALCON 2059 多聚丙烯試管37°C 恒溫箱水浴箱實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑ATP(10 mmol/L)β-巰基乙醇（可選擇）IPTG(100 mmol/L
核糖克隆實驗
這個方案只是用 RNA 酶處理 PCR 產物的一種方法。有很多可選擇和有效的途徑來純化 PCR 產物以除去引物，接著用酶處理 PCR 產物，然后再除去酶。值得注意的是用 PCR儀設置溫浴程序是很方便的。可以在加熱步驟完成后選擇加上“冷卻”步驟，即在冷模塊中放置 5 min 甚至過夜。本實驗來源于 P
核糖克隆實驗
試劑、試劑盒ATEN 緩沖液DNA 緩沖液（TEN)KLA 緩沖液T5E5Dpn IKlentaq LA蛋白酶 K蛋白酶K儲存緩沖液RNA 酶 A設計好的載體已經進行 5'端生物素-TEG 修飾并且 3'端核糖胞嘧啶或者核糖尿嘧啶修飾過的引物卡那霉素（Sigma)四環素Ticarci
制備克隆實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 ATP -巰基乙醇 IPTG X-gal 平末端限制酶 連接緩沖液 T4DNA 連接酶 平末
核糖克隆實驗
—、材料1. 緩沖液、溶液和試劑.10XATEN 緩沖液0.5mol/LTris-HCl,pH7.92.5mol/L 氯化鈉0.25mol/L Na4EDTA,pH7.9甜菜堿（SigmaB-2629)藍色葡聚糖（bluedextran)(SigmaD
克隆的種類
1.由同一個祖先細胞分裂繁殖而形成的純細胞系（每個基因彼此相同）。2.先將含有遺傳物質的供體細胞的核移植到去除了細胞核的受體卵細胞中，利用微電流刺激等使兩者融合為一體。（與提供細胞者基因相同）
制備克隆實驗
試劑、試劑盒?ATP-巰基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶連接緩沖液T4DNA 連接酶平末端插入物克隆載體培養基儀器、耗材?FALCON 2059 多聚丙烯試管37°C 恒溫箱 水浴箱實驗步驟?一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑ATP(10 mmol/L)β-巰基乙醇（可選擇）IPTG(100 mm
miRNA克隆實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起著非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 維持著基因
多克隆抗體
Making Antibody·?????????Production of Polyclonal Antibody in Rabbit?(Walter Steffen)Provides detailed protocol for immunizatioin, bleeding procedure,
分子克隆介紹
各位小伙伴，大家還記得當初進實驗室的時候接觸到的一個實驗技能是什么呢？沒錯，是 PCR 擴增。小編曾經也是，看著自己親自配比 PCR 克隆擴增的每個組分，親眼看著瓊脂糖凝膠在紫外透光臺上發出的幽綠色的熒光，也是深深被迷住。但總不可能成天就對著這個邪魅的熒光發呆，對吧？看久了，她會愛上你的眼