藥典方法與高效毛細管電泳法(HPCE)的比較

　　高效毛細管電泳法是近幾十年飛速發展起來的一項新的分析技術。它根據離子在緩沖液中遷移的速度與電場呈正比原理，將凝膠電泳解析度和快速液相色譜技術溶為一體，是繼高效液相色譜法出現后分析科學領域的又一次革命。其具有分離效率高(理論板數l06 一107 /m)、快速(20-30 min/次)、用量少(鈉升級，對單細胞液進行分離分析)、靈敏度高等優點，可方便地連續洗脫樣品。

　　在藥物分析中最常用的技術是毛細管區帶電泳、毛細管凝膠電泳、膠束電動毛細管色譜，其它技術如毛細管等速電泳(CITP)等也有報道。

　　HPCE在生物學中應用十分廣泛，在蛋白質、激素多肽、核酸等的鑒定、分離方面發揮了顯著作用，對單糖、多糖、脂類研究亦有遠大前景，此外在臨床分析以及細菌、細菌代謝物測定方面的應用日漸增多。近期的研究表明，HPCE對苷類成分的含量測定研究較多，本文簡要介紹高效毛細管電泳法(HPCE)在芍藥苷含量測定中應用，并與藥典所載方法做比較。。

　　㈠ 2005年版《中國藥典》一部所載方法

　　白芍、赤芍、逍遙丸和八珍益母丸中芍藥苷的含量，2005年版《中國藥典》中所載方法為高效液相色譜法，色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸溶液(14：86)為流動相;檢測波長為230nm。理論塔板數按芍藥苷峰計算應分別不低于2000、3000、2000、5000。

　　加味逍遙丸：色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇-0.05mol/L磷酸氫二鈉(用0.05mpl/L磷酸氫二鉀溶液調節pH值至7.4(23：77)為流動相;檢測波長為230nm。理論塔板數按芍藥苷峰計算應不低于5000。

　　八珍丸：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-水(17：83)為流動相;檢測波長為230nm。理論塔板數按芍藥苷峰計算應不低于2000。

　　㈡ 高效毛細管電泳法

　　在2000-2002年間，重慶第三軍醫大學西南醫院藥學部的陳勇川等采用高效毛細管電泳法對芍藥及成藥(逍遙丸、加味逍遙丸、麻仁丸和除濕白帶丸、白芍總苷膠囊、八珍丸和八珍益母丸)中芍藥苷的含量進行了一系列的研究。現做一簡要介紹。

　　實驗儀器：Bio Focus 3000型毛細管電泳儀(美國Bio-Rad公司);融熔石英毛細管柱(未涂漬)50μm×50cm(有效分離長度45.5cm)。

　　測定條件：運行緩沖液為50mmo1/L硼砂緩沖液，用氫氧化鈉調pH10.6;操作電壓20kv，極性由正到負，檢測波長230nm，柱溫20℃ ;采用壓力進樣，壓力進樣常數為10-1psi×S。運行緩沖液和樣品溶液均經0.45μm微孔濾膜過濾后使用。

　　毛細管沖洗方法：每次開機用超純水沖洗3min，0.1mol/L氫氧化鈉3min，超純水3min，運行緩沖液3min。每次測定之間用運行緩沖液沖洗1 min。

　　實驗中考察了pH8～11范圍的緩沖液，結果發現，pH大于9.0時，芍藥苷能夠分離，且所得蜂形較好;當pH小于9.0，則芍藥苷峰形變壞且遷移時間延長。最后確定最佳pH為10.6，芍藥苷得以很好分離且峰形較好，遷移時間適中。

　　對硼砂濃度在25～100mmol/L的范圍內進行了考察，結果發現，隨著濃度的增加分離度增加，但同時電流增加造成基線不穩，兼顧二者關系最后確定硼砂緩沖液濃度為50mmol/L。

　　HPCE對白芍、赤芍、逍遙丸和加味逍遙丸等其余成藥中芍藥苷的定量是準確有效的，與HPLC法結果基本一致。HPCE較HPLC具有分析速度快，進樣量少、分離效率高、進樣體積小、溶劑消耗少和抗污染能力強等的特點。中國藥典2005版將HPLC作為白芍、赤芍和逍遙丸、加味逍遙丸、八珍丸、八珍益母丸中芍藥苷定量的方法，要求理論板數分別不低于2000、3000、2000、5000、2000、5000，而HPCE的理論板數可達到l00000以上。分離效率大大高于HPLC。

　　HPCE無疑為芍藥及成藥中芍藥苷的的定量提供了一個新的途徑，開拓了分析手段，也可為同類中成藥的質量控制提供參考。