桿狀病毒儲液制備實驗——從懸浮培養中制備
實驗材料懸浮培養的 Sf 9 細胞待接種的桿狀病毒（野生型的或重組）試劑、試劑盒含10％胎牛血清的昆蟲細胞培養液 TNM-FH儀器、耗材150 mm 培養瓶27℃ 培養箱倒置顯微鏡帶有 GH-3.7 水平轉子的4℃GPR離心機帶螺口蓋的凍存管液氮罐500 ml 旋轉細胞培養瓶多轉瓶的攬拌臺實驗步驟1. 用 50 ml TNM-FH /10％ FBS 培養液在 500 ml 旋轉培養瓶中培養 Sf 9 細胞，直到細胞密度達到約 1 × 105 細胞/ml（見昆蟲細胞保存培養實驗）。2. 室溫下以 1000 g 離心 10 min 回收細胞，棄去上清。加入 10～20 ml 新鮮的 TNM- FH/10％ FBS 培養液重懸細胞團塊。加入感染復數（MOI）為 0.1～0.5 的病毒接種（見步驟 1.2）。MOI 以 pfu/細胞來表示。感染給定數目細胞的病毒接種物的體積=MOI （pfu/細胞）× [細胞數/毒種儲液的滴度......閱讀全文
桿狀病毒介紹
狀病毒是一類在自然界中專一性感染節肢動物的DNA病毒，病毒粒子呈桿狀，基因組為雙鏈環狀DNA分子，DNA以超螺旋形式壓縮包裝在桿狀衣殼內，大小在90～180 Kb之間。目前桿狀病毒作為高效、安全的無公害生物蟲劑廣泛應用于害蟲防治。 桿狀病毒只來源于無脊椎動物，雖然已發現600多種桿狀病毒，但進行
桿狀病毒滴度檢測
實驗概要本實驗介紹了檢測病毒滴度的方法。實驗原理根據噬菌斑數計算病毒滴度。主要試劑1. 4% agarose gel：2g agrose ? 50ml 水，高壓滅菌2. 2×Grace（unsupplemented）：9.14g粉末（invitrogen） 0.07gNaHCO3 H2O，調PH6.
桿狀病毒昆蟲細胞表達系統
實驗步驟一、桿狀病毒表達載體最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒，其基因組含有一段外源核酸序列，通常為編碼目標蛋白質的dDNA，在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成，其位于病毒基因組多角體座位，替代了非必需的野生型多角體基因。在實驗室中
重組桿狀病毒的純化實驗
實驗材料?桿狀病毒試劑、試劑盒?瓊脂牛血清儀器、耗材?培養瓶凍存管實驗步驟 1.? 制備病毒上清的系列稀釋液，該病毒上清獲得自在無血清完全培養液中轉染 pAC360β-gal DNA的細胞。在含150 μg/ml X-gal 的瓊脂糖頂層覆蓋物下病毒形成蝕斑。?2.? 當蝕斑形成后，用滅菌巴斯德吸管
桿狀病毒儲液制備實驗
基本方案 從懸浮培養中制備 基本方案 從單層培養中制備 噬斑試驗測定滴度 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料
關于桿狀病毒載體的簡介
當前應用最廣的桿狀病毒表達體系是Autographa california multiply enveloped nuclear polyhedrosisvirus (AcMNPV) 的裂解病毒，簡稱為桿狀病毒(baculovirus)。這類載體的特點是:桿狀病毒表達體系全部使用存在于高等真核細
桿狀病毒表達系統的應用
桿狀病毒是近年來被廣泛用于高效表達外源蛋白的載體系統，本文就桿狀病毒表達系統的生物學特性、轉染載體、重組病毒的篩選、基因表達調控及其發展應用等方面作一概述。
桿狀病毒轉染載體的分類
用于表達融合型蛋白的轉染質粒是一類早期構建的轉染質粒，它包括pAC系列[4],如pAC101、pAC311、pAC360等。在每個載體中，多角體蛋白基因啟動子下游ATG啟始密碼后含有一個單一的BamHⅠ酶切位點，當外源基因和多角體基因的讀碼框架正確時，就可以獲得含1個或幾個多角體蛋白N端氨基酸的融合
桿狀病毒表達系統的應用
用桿狀病毒做載體，可高效表達外源基因，到目前為止已有幾百個包括動植物、病毒、細菌、真菌的基因在昆蟲細胞或幼蟲體內得到高效表達。這個表達體系的主要特點是可以獲得大量抗原性、免疫原性較好的，與天然蛋白功能相似的可溶性重組蛋白。這一特點優于細菌、酵母和哺乳動物細胞表達體系。重組桿狀病毒感染昆蟲細胞后，可以
桿狀病毒昆蟲細胞表達系統
實驗步驟 一、桿狀病毒表達載體 最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒，其基因組含有一段外源核酸序列，通常為編碼目標蛋白質的dDNA，在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成
桿狀病毒儲液制備實驗
實驗方法原理 實驗材料 懸浮培養的 Sf 9 細胞待接種的桿狀病毒（野生型的或重組）試劑、試劑盒 含10％胎牛血清的昆蟲細胞培養液 TNM-FH儀器、耗材 150 mm 培養瓶 27℃ 培養箱 倒置顯微鏡 帶有 GH-3.7 水平轉子的4℃GPR離心機 帶螺口蓋的凍存管 液氮罐 500 ml 旋轉細
裸眼篩選重組桿狀病毒實驗
桿狀病毒是一類在自然界中專一性感染節肢動物的DNA病毒，病毒粒子呈桿狀，基因組為雙鏈環狀DNA分子，DNA以超螺旋形式壓縮包裝在桿狀衣殼內，大小在90~180 Kb 之間。目前桿狀病毒作為高效、安全的無公害生物蟲劑廣泛應用于害蟲防治。實驗材料桿狀病毒試劑、試劑盒瓊脂糖儀器、耗材解剖顯微鏡倒置顯微鏡實
裸眼篩選重組桿狀病毒實驗
實驗材料 桿狀病毒試劑、試劑盒 瓊脂糖儀器、耗材 解剖顯微鏡倒置顯微鏡實驗步驟 解剖顯微鏡下篩選?1. ?倒轉蝕斑平皿，使其處于顯微鏡的黑色背景下，以銳角向平皿照射一束亮光。2. ?檢查野生型病毒感染的細胞中含有包涵體的蝕斑，這種蝕斑看上去折光性強，帶有輕微的黃色。3. ?檢查β-gal 重組病毒感
關于桿狀病毒表達載體的介紹
BEV，即“桿狀病毒表達載體”。是“Baculovirus Expression Vector”的縮寫，譯為“桿狀病毒表達載體”，有真核表達載體、原核表達載體、酵母表達載體、植物表達載體、昆蟲表達載體等多重區分。目前應用較多的是昆蟲桿狀病毒表達系統，利用病毒攜帶目的基因在昆蟲細胞中表達。這類系統
關于桿狀病毒表達系統的簡介
桿狀病毒是近年來被廣泛用于高效表達外源蛋白的載體系統，本文就桿狀病毒表達系統的生物學特性、轉染載體、重組病毒的篩選、基因表達調控及其發展應用等方面作一概述。 體外基因表達系統包括原核細胞系統和真核細胞系統。原核細胞系統主要是大腸桿菌細胞系統，它操作簡便，周期短，收益大，表達產物穩定，但是表達基
概述桿狀病毒表達系統的應用
用桿狀病毒做載體，可高效表達外源基因，到目前為止已有幾百個包括動植物、病毒、細菌、真菌的基因在昆蟲細胞或幼蟲體內得到高效表達。這個表達體系的主要特點是可以獲得大量抗原性、免疫原性較好的，與天然蛋白功能相似的可溶性重組蛋白。這一特點優于細菌、酵母和哺乳動物細胞表達體系。重組桿狀病毒感染昆蟲細胞后，
影響表達桿狀病毒表達的因素
在桿狀病毒系統中，要獲得蛋白質的有效表達，首先要選擇合適的轉染載體。依據表達的蛋白質屬融合型或非融合型，選擇單啟動子型或多啟動子型。另外目的基因的選擇要注意以下因素：①該目的基因應不含內含子；②去除其mRNA 5′端非編碼區的異源序列；③翻譯啟始密碼子AUG應處于適當的序列之間（如Kozak 序列）
桿狀病毒昆蟲細胞表達系統3
七、桿狀病毒表達載體的新一代昆蟲細胞宿主最早的鱗翅類昆蟲細胞的遺傳轉化技術出現在1990年（Jarvisetal.，1990)。那時，研發該技術的初衷在于構建一個穩定轉化的昆蟲細胞系，它旨在能夠持續生產目標重組蛋白而無需使用桿狀病毒進行感染。然而, 構建這個生產用細胞系所用的載體及方法也為構建具有新
桿狀病毒昆蟲細胞表達系統2
五、親代桿狀病毒基因組的改進就像轉移質粒的改進，對親代桿狀病毒基因組的改進也是為了滿足各種不同的需要。起初，最主要的目的是找到克服重組桿狀病毒載體構建和分離低效率的方法，這也是最初的桿狀病毒-昆蟲細胞系統存在的主要問題。現在已經知道這個問題的根源在于, 在共轉染的昆蟲細胞系中，轉移質粒和親代桿狀病毒
武漢病毒所人工合成桿狀病毒
合成生物學技術作為21世紀的一門新興生物學技術，推動了生命科學乃至整個自然科學領域的發展。病毒的人工合成為深入揭示病毒的本質和功能，以及病毒的遺傳改造提供了強有力的工具。以往，對病毒人工合成的探索主要集中在RNA病毒上，而目前已知最大的RNA病毒基因組也僅有~30 kb。迄今為止，所報道成功合成
Journal－of－Virology:桿狀病毒入侵細胞分子機制
5月15日，國際學術期刊Journal of Virology（《病毒學雜志》）在線發表了中國科學院武漢病毒研究所/病毒學國家重點實驗室王華林、胡志紅團隊的最新成果，論文題為The major hurdle for effective baculovirus transduction into
桿狀病毒毒種貯液的制備
實驗材料?桿狀病毒試劑、試劑盒?胎牛血清重組病毒儀器、耗材?培養箱培養瓶轉子實驗步驟 從單層培養中制備：?1a.? 以毎瓶1.8×107 Sf9細胞的密度，將細胞接種于兩個150 cm2 培養瓶，在含10%胎牛血清的完全培養液中培養。于27℃讓細胞貼壁3 h，然后移去完全培養液。以感染復數為
野生型桿狀病毒的純化實驗
實驗材料桿狀病毒試劑、試劑盒TE蛋白酶KN-十二烷基肌氨酸苯酚氯仿異戊醇乙醇乙酸鈉儀器、耗材培養瓶錐形瓶轉子離心機聚苯乙烯管實驗步驟1. ?以每1.8x107細胞的密度接種Sf9細胞于至少10個150 cm2?培養瓶中。27℃溫育約2 h，讓細胞牢固貼壁，以0.1的感染復數用野生型AcMNPV感染。
野生型桿狀病毒的純化實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 桿狀病毒 試劑、試劑盒
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗
基本方案 小規模表達 輔助方案1 蛋白質生產高峰期的確定 輔助方案2重組蛋白的代謝標記 基本方案2 重組蛋白大規模生產 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
野生型桿狀病毒的純化實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 桿狀病毒 試劑、試劑盒
概述桿狀病毒表達系統的生物特性
桿狀病毒（又稱多角體病毒或顆粒體病毒）有兩類病毒體[1]，芽殖病毒體（buded virion，BV）和多角體源性病毒體（polyhedron derived virion,PDV）。在病毒復制過程中，首先產生BV，BV核殼產生后通過芽生方式從細胞中釋放出來，再感染其它細胞，復制后期產生PDV，
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗
實驗方法原理 分析方案依賴于表達蛋白的天然特性。實驗材料 草地夜蛾（Sf9）細胞高滴度的重組桿狀病毒儲液試劑、試劑盒 PBS1×SDS樣品緩沖液儀器、耗材 含 10% 胎牛血清（FBS）的TNM-FH昆蟲培養基60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱（濕度可選）15 ml 聚丙烯離心管帶有 GH-3.7
關于桿狀病毒載體的基本信息介紹
當前應用最廣的桿狀病毒表達體系是Autographa california multiply enveloped nuclear polyhedrosisvirus (AcMNPV) 的裂解病毒，簡稱為桿狀病毒(baculovirus)。這類載體的特點是:桿狀病毒表達體系全部使用存在于高等真核細
桿狀病毒毒種貯液的制備實驗
桿狀病毒是一類具有囊膜包裹的雙鏈環狀DNA病毒，其基因組大小為80~180 kb，在自然界中以節肢動物作為專一性宿主進行感染和傳播。實驗材料桿狀病毒試劑、試劑盒胎牛血清重組病毒儀器、耗材培養箱培養瓶轉子實驗步驟從單層培養中制備：?1a. ?以毎瓶1.8×107?Sf9細胞的密度，將細胞接種于兩個15