Transwell侵襲實驗總結（3）－操作步驟
．步驟2．1 Transwell小室制備2．1．1 無基質膠Transwell小室制備① 包被基底膜：用50mg/LMatrigel 1:8稀釋液包被Transwell小室底部膜的上室面，4℃風干。如果需要在下室面鋪FN的話，可將200ul槍頭的尖端剪掉,吸取FN均勻涂抹在小室的下面。用膠原（collagen）的話，一般配成0.5mg/ml，直接用槍吸了涂在膜上。② 水化基底膜：吸出培養板中殘余液體，每孔加入50ul含10g/LBSA的無血清培養液，37℃，30min。另有tianjin_glioma戰友提供的方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀釋后的Matrigel (3.9ug/ul) 60-80μl (注意體積不可太大，以剛把聚碳酸酯膜浸濕為最好)，置37℃ 30min使Matrigel聚合成凝膠。2．1．2 有基質膠的Transwell小室制備Chemicon公司的ECM550系列說明書要求，將小室放入培養板中，在上室加入3......閱讀全文
Transwell侵襲實驗總結－（3）－操作步驟
．步驟2．1 Transwell小室制備2．1．1 無基質膠Transwell小室制備① 包被基底膜：用50mg/LMatrigel 1:8稀釋液包被Transwell小室底部膜的上室面，4℃風干。如果需要在下室面鋪FN的話，可將200ul槍頭的尖端剪掉,吸取FN均勻涂抹在小室的下面。用膠原（col
Transwell侵襲實驗總結－（4）
－Transwell的其他應用的實驗步驟1．Transwell腫瘤細胞遷移實驗過程與Transwell侵襲實驗基本一致，不同的只是不需要鋪Matrigel。個人認為，由于沒有基質膠的阻擋，細胞穿過膜的速度較侵襲實驗明顯加快，所以細胞量要更大。我做侵襲實驗的細胞密度是1×105，而遷移實驗的密度是1×
Transwell侵襲實驗總結－（1）－概念
這里想明確兩個概念，一個是Transwell，另一個是腫瘤細胞侵襲模型。1．Transwell關于Transwell這個詞該如何解釋，查了很多資料也未見準確的注解，我覺得可以這么理解吧，trans-這個詞根有轉移、轉運、穿過等意思，well有小室的意思，可以從字面上理解，這是一類有通透性的杯狀的裝置
Transwell侵襲實驗總結－（1）－概念
這里想明確兩個概念，一個是Transwell，另一個是腫瘤細胞侵襲模型。1．Transwell關于Transwell這個詞該如何解釋，查了很多資料也未見準確的注解，我覺得可以這么理解吧，trans-這個詞根有轉移、轉運、穿過等意思，well有小室的意思，可以從字面上理解，這是一類有通透性的杯狀的裝置
Transwell侵襲實驗總結－（2）－實驗用品
我的課題涉及Transwell侵襲實驗和Transwell遷移實驗，其他方面的Transwell應用我不太清楚，因此這里主要談談Transwell侵襲實驗。1．實驗用品：① Transwell小室：多種廠家可提供，論壇里常用的是Costar、Corning、BD生產的小室，我們實驗室用的是Chemi
Transwell侵襲實驗
第一節 概念這里想明確兩個概念，一個是Transwell，另一個是腫瘤細胞侵襲模型。1. Transwell關于Transwell這個詞該如何解釋，查了很多資料也未見準確的注解，我覺得可以這么理解吧，trans-這個詞根有轉移、轉運、穿過等意思，well有小室的意思，可以從字面上理解，這是一類有通透
Transwell實驗全面總結
這里想明確兩個概念，一個是 Transwell ，另一個是腫瘤細胞侵襲 模型 。1 ． Transwelltrans- 這個詞根有轉移、轉運、穿過等意思， well 有小室的意思，可以從字面上理解，這是一類有通透性的杯狀的裝置，根據 Corning 公司的 Transwell 說明書中的介紹，可以認
細胞侵襲實驗總結！
實驗原理將細胞小室（Transwell小室）放入培養板中，小室內稱上室，培養板內稱下室，上室內盛裝上層培養液，下室內盛裝下層培養液，上下層培養液以聚碳酸酯膜相隔。我們將細胞種在上室內，由于聚碳酸酯膜有通透性，下層培養液中的成分可以影響到上室內的細胞，從而可以研究下層培養液中的成分對細胞生長、運動等的
Transwell細胞體外侵襲實驗的注意事項
2. 1NIH3T3 細胞制備的趨化因子與胎牛血清 趨化因子是能使細胞產生趨化運動的一類細胞因子[2 ] 。目前利用NIH3T3 細胞制備趨化因子做細胞體外侵襲實驗的實驗室比較多,時間較長且實驗步驟繁瑣。眾所周知,胎牛血清中有趨化因子,我們在不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810 膽囊癌細胞體外
Transwell細胞體外侵襲實驗的注意事項
2. 1NIH3T3 細胞制備的趨化因子與胎牛血清 趨化因子是能使細胞產生趨化運動的一類細胞因子[2 ] 。目前利用NIH3T3 細胞制備趨化因子做細胞體外侵襲實驗的實驗室比較多,時間較長且實驗步驟繁瑣。眾所周知,胎牛血清中有趨化因子,我們在不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810 膽囊癌細胞體外
Transwell細胞體外侵襲實驗的材料與方法
1. 1Matrigel：Becton Dickinson Compary, - 20 ℃保存；Tanswell plate：Costar ,USA , # 3422 ,聚碳酯膜微孔直徑為8μm；蘇木素染液，梯度乙醇，二甲苯溶液。1. 2 趨化因子的制備 取傳代第二天長勢良好的NIH3T3細胞,無
Transwell實驗
定義： 一類有通透性的杯狀裝置，可認為是一種膜濾器（Membrane filters），或者是一種通透性的支架（permeable supports）。組成： 杯子底層是一張有通透性的膜，杯子其余部分的材料與普通的孔板是一樣。這層膜帶有微孔，孔徑大小有0.1－12.0μm，根據不同需要可用不同材料，
RTPCR原理與實驗操作步驟3
八、PCR產物電泳先將1-10μl左右PCR產物，加已點在紙上的溴酸蘭，反復吸打混勻后進行電泳，一般電流為10mA，電源100V，電泳30分鐘，紫外燈下觀察，滿意的結果掃描打印。九、幾個注意點：1、逆轉錄的關鍵步驟是立即冰水浴？2、Rt時，先打開PCR預熱30分鐘。3、RNA抽提前，打開離心機預冷。
腫瘤細胞侵襲試驗原理和實驗步驟1
一、原理Matrigel 是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上，能在DMEM培養基中重建形成膜結構，這種膜結構與天然基質膜結構極為相似。濾膜孔徑一般為8um，而且膜孔都被Matrigel覆蓋，細胞不能自由穿過，必須分泌
腫瘤細胞侵襲試驗原理和實驗步驟2
（3）NE+IFN-DMEM（-6M，50ng）NE---A液（1μg/μl，1mg/ml） 20.5μlIFN-γ（25ng/μl） 25 μlDMEM UP TO 100 ml過濾消毒，4℃保存（4）低血清DMEM培養基（上室）（5）20%FBS-DMEM培養基（下室）2、準備（1）溶膠，4℃過
RtPCR實驗準備及與操作步驟3
注：1、RNA若用于核酸轉移應溶解于樣本緩沖液中，否則DEPC溶解2、細胞組織加TRIzol勻漿后，可在-60℃放置至少一個月（甚至可一年以上）3、RNA在75%乙醇中，2-8℃至少可保存一周，-20℃至少可保存一年 兩步法RT-PCR （第一步：逆轉錄反應） 試劑 濃度 體積 終濃度
IHC－實驗操作步驟
? ? ? ? ? ? 免疫組化方法（石蠟切片）*重要提示：參考抗體說明書選用合適的抗體稀釋液和抗原修復處理方法。IHC 方法：抗原修復緩沖液/抗體稀釋液A. ? ? 所需溶液和試劑1. 二甲苯2. 無水乙醇（100% 和 95%，變性無水乙醇，組織學級）3. 去離
腺苷的實驗操作步驟
1、標準曲線的繪制精密吸取上述對照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL注入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外檢測器檢測器，于260nm檢測腺苷的吸收值，以腺苷的進樣量對其峰面積繪制標準曲線，進行線性回歸，得到回歸方程。2、供試品的測定精密吸取上述供試品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，
腫瘤細胞侵襲實驗
Matrigel 基質膜模型 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 Matrigel 是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯
腫瘤細胞侵襲實驗
Matrigel 基質膜模型 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 Matrigel 是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯
transwell實驗染色后可以放多久
最好是24小時。實驗前將保存在-20℃的基質膠轉移至4℃冰箱融化過夜，使用前用無血清培養基按培養基：基質膠=2:1的比例稀釋；接種前將24孔板和Transwell小室用1×PBS浸泡5min濕潤小室。用胰蛋白酶消化細胞后，用無血清培養液洗滌細胞，用含有1%FBS的培養基重懸細胞計數。培養24h后（侵
如何用transwell進行細胞遷移實驗
Transwell法的步驟：先把小室擦干凈后在超凈工作臺照紫外過夜。如新的小室省略此步。下一步將小室倒扣并小室的底部外側滴加0.1%（還是1%記不清了）的明膠室溫放置20-30分鐘。這是將細胞消化下來，調濃度。拿出24孔板加600ml的含有刺激因子的培養基。小室上還未干的明膠甩掉，加細胞放入24孔板
腫瘤細胞侵襲實驗——Matrigel－基質膜模型
腫瘤細胞侵襲實驗（Tumour Invasion Assay）可應用于：（1）研究各種細胞因子對惡性腫瘤細胞侵襲和轉移的影響；（2）一些抑制血管生成的新藥研究；（3）研究腫瘤細胞侵襲和轉移機制。實驗方法原理Matrigel 是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸
做transwell時結晶紫染色的具體詳細步驟
① 用棉簽擦去基質膠和上室內的細胞 ② 染色：采用0.1%結晶紫染色。 這種方法有如下優勢：(1). 不需要固定細胞，直接染色即可。(2). 配制簡單方便。(3). 染色后可以用33%醋酸脫色，將結晶紫完全洗脫下來，洗脫液可在酶標儀上570nm 測其OD值，間接...
ELISA試劑盒實驗操作程序總結
實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合elisa試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋
腫瘤細胞侵襲試驗（Tumour－Invasion－Assay）
一 、 原理Matrigel 是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上，能在DMEM培養基中重建形成膜結構，這種膜結構與天然基質膜結構極為相似。濾膜孔徑一般為8um，而且膜孔都被Matrigel覆蓋，細胞不能自由穿過，必須
細胞劃痕實驗原理步驟及注意事項有哪些
細胞劃痕實驗原理細胞劃痕實驗(Wound Healing)是一種操作簡單，經濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。這種方法的原理是，當細胞長到融合成單層狀態時，在融合的單層細胞上人為制造一個空白區域，稱為“劃痕”，劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區域使“劃痕”愈合，在一定程度上模擬了體內細胞遷移
密封試驗儀實驗操作步驟
試驗操作將壓縮氣管接入儀器將儀器自配的6 mm管接入真空罐把適量水加入到真空罐中（罐內水位高于多孔壓板上10 mm左右） 打開電源開關設置時間和壓力時間設置“m” （或“s” 或“h” ）左邊為整數部分，右邊為小數部分，“壓力”中P3為實際需要值；︱P1︴＝︱P3︴－1；P2，P4不更換為儀器的出廠
視頻：ELISA實驗操作步驟演示
優質的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA 檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA 的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國內醫學檢驗一般均用板式ELISA。以下是一份操作視頻演示。ELISA實驗操作步驟演示
Western－Blot－Protocol實驗操作步驟
一、提取抗原蛋白 將提取RNA途中留存的樣品，加入150μl100%酒精充分混勻，靜置 ?5min(RT),2000×g,4℃離心5min,吸取上清至新管中,加入750μl異丙醇,混勻,靜置10min(RT),12000×g,4℃離心 ?10min,棄上清,加入1ml0.3mol/L鹽酸胍/95%酒