酵母前體mRNA剪接提取物實驗（一）
實驗方法原理 剪接反應的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物補充 SR 蛋白或粗提取物的部分純化組分，最常使用的是 HeLa 細胞的提取物。前體 mRNA 底物通常采用噬菌體聚合酶體外轉錄的方法來制備。實驗材料 tRNAUTPRNA 聚合酶試劑、試劑盒 YPTris-HCl ETDASDS甘油HEPES 鉀鹽DTTPMSF磷酸鉀緩沖液D-山梨醇SB 緩沖液等滲液裂解液AGK 緩沖液TBETE 亞精胺轉錄緩沖液NTPATP二氯乙酸乙酸鈉RNA 洗脫緩沖液乙酸銨乙醇染色液蛋白酶 K 溶液乙酸鈉-EDTA 溶液Tris 堿平衡酚過硫酸銨硅烷化溶液RNasin儀器、耗材 離心機搖床Dounce 勻漿器瓷質研缽研杵透析袋Dewar 燒瓶防低溫手套真空濾膜架電源玻璃板聚四氟乙烯梳子和墊片黃色膠帶聚丙烯培養試管Quicksep 柱臺式振蕩器旋轉真空濃縮儀實驗步驟 一、材料與設備1. 剪接提取物制備用溶液除非另有說明，所有溶......閱讀全文
酵母前體mRNA剪接提取物實驗（一）
實驗方法原理 剪接反應的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物補充 SR 蛋白或粗提取物的部分純化組分，最常使用的是 HeLa 細胞的提取物。前體 mRNA 底物通常采用噬菌體聚合酶體外轉錄的方法來制備。實驗材料 tRNAUTPRNA 聚合酶試劑、試劑盒 YPTris-HCl ETDASD
酵母前體mRNA剪接提取物實驗（一）
實驗方法原理 剪接反應的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物補充 SR 蛋白或粗提取物的部分純化組分，最常使用的是 HeLa 細胞的提取物。前體 mRNA 底物通常采用噬菌體聚合酶體外轉錄的方法來制備。 實驗材料 tRNAUTPRNA 聚合酶 試劑、試劑盒 YPT
酵母前體mRNA剪接提取物實驗
真核生物前體 mRNA ( pre-mRNA ) 的剪接分為兩步，即先從前體切去內含子，然后將兩個外顯子連接在一起形成成熟的? mRNA。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法原理剪接反應的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物補充 SR 蛋白或粗提取物的部分純化組分，最常使
酵母前體mRNA剪接提取物實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 剪接反應的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物補充 SR 蛋白或粗提取物的部分純化組分，最常使用的是 HeLa 細胞的提取物。前體 mRNA 底物通常采用噬菌體聚合酶體外轉錄的方法來制備。
酵母前體mRNA剪接提取物實驗（二）
(12) RNA 洗脫緩沖液：20 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.6)，0.5 mol/L NaCl，10 mmol/L EDTA，2% ( V/V ) 苯酚（Tris EDTA 或 NaAc-EDTA 平衡），4°C 保存。(13) 7.5 moI/L 乙酸銨（NH4Ac）：用 0
酵母剪接體分析實驗（一）
實驗方法原理 前接體是真核細胞核內剪接 mRNA 前體的大分子核糖核蛋白復合體，它由 5 種 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白組成，每一種 snRNP 由一個 snRNA 和幾種蛋白質構成。試劑、試劑盒 Tris HCI 溶液EDTATE乙酸鈉SDSRNA 的勻漿緩沖液RNA 的溶解緩沖液T
酵母剪接體分析實驗
前接體是真核細胞核內剪接 mRNA 前體的大分子核糖核蛋白復合體，它由 5 種 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白組成，每一種 snRNP 由一個 snRNA 和幾種蛋白質構成。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法原理前接體是真核細胞核內剪接 mRNA 前體的大分子核糖核蛋
酵母剪接體分析實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 前接體是真核細胞核內剪接 mRNA 前體的大分子核糖核蛋白復合體，它由 5 種 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白組成，每一種 snRNP 由一個 snRNA 和幾種蛋白質構成。
酵母剪接體分析實驗（二）
4. 設備(1) 液氮 （N2）。(2) 離心機，勻漿器，旋轉真空濃縮儀。(3) 各種試管、離心管。(4) 玻璃板：一塊為 26.5 cm 高、20.2 cm 寬、0.4 cm 厚。帶凹口的玻璃板尺寸同前一塊，但帶一 2.2 cm 深、16.3 cm 寬的凹口。(5) 聚四氟乙烯墊片和梳子：墊片和梳
前剪接體和剪接體的分離及分析實驗
實驗方法原理 剪接體是由 RNA 和蛋白質構成的核糖核蛋白體（RNP)，它在前體 mRNA 的剪接過程中可去除前體 mRNA 的內含子。snRNP 是由 snRNA 及其結合蛋白組成，在前體 mRNA 的剪接過程起著重要作用。實驗材料 PIP 10 載體核苷酸焦磷酸酶RNasinT7 RNA 聚合酶
前剪接體和剪接體的分離及分析實驗
剪接體是由 RNA 和蛋白質構成的核糖核蛋白體（RNP)，它在前體 mRNA 的剪接過程中可去除前體 mRNA 的內含子。snRNP 是由 snRNA 及其結合蛋白組成，在前體 mRNA 的剪接過程起著重要作用。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法原理剪接體是由 RNA 和蛋白質
前剪接體和剪接體的分離及分析實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 剪接體是由 RNA 和蛋白質構成的核糖核蛋白體（RNP)，它在前體 mRNA 的剪接過程中可去除前體 mRNA 的內含子。snRNP 是由 snRNA 及其結合蛋白組成，在前體 mRNA 的剪接過程起著重要作用。
施一公：克服提純問題，發布最新酵母剪接體結構
2018年5月25日，清華大學生命學院施一公教授研究組就剪接體的組裝機理與結構研究于《科學》（Science）雜志以長文形式再次發表重大研究成果。這篇題為《完全組裝的釀酒酵母剪接體激活前結構》（Structures of the Fully Assembled Saccharomyces cer
Cell丨施一公組完成酵母剪接體結構最后拼圖
真核生物pre-mRNA剪接由超分子復合物剪接體（spliceosome）完成。完整的剪接過程主要分為八種不同的狀態，預催化剪接體的前體（pre-B），預催化剪接體（B），活化復合物（Bact），催化活化復合物（B*），催化步驟I復合物 （C），催化步驟II活化復合物（C*），催化后剪接體（P）
施一公團隊《細胞》解析酵母ILS狀態剪接體
北京時間9月15日凌晨，Cell在線發表了施一公教授課題組題為“Structure of an Intron Lariat Spliceosome from Saccharomyces cerevisiae”的論文，解析了釀酒酵母平均分辨率為3.5A的內含子套索剪接體ILS complex（In
施一公再發Science－克服提純問題－發布最新酵母剪接體結構
2018年5月25日，清華大學生命學院施一公教授研究組就剪接體的組裝機理與結構研究于《科學》（Science）雜志以長文形式再次發表重大研究成果。這篇題為《完全組裝的釀酒酵母剪接體激活前結構》（Structures of the Fully Assembled Saccharomyces cer
酵母提取物的制備實驗
實驗方法原理酵母細胞的裂解方法有很多種，包括自溶、壓力破碎（如French加壓罐）、研磨（玻璃珠振蕩）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案討論的振蕩玻璃珠研磨，是最簡便的方法之一。這對于小體積（如＜1mL的）和數升體積都很有效。經相差顯微鏡檢測，細胞破碎率一般＞95%。實驗材料新鮮培養的酵母細胞
酵母提取物的制備實驗
實驗方法原理 酵母細胞的裂解方法有很多種，包括自溶、壓力破碎（如French加壓罐）、研磨（玻璃珠振蕩）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案討論的振蕩玻璃珠研磨，是最簡便的方法之一。這對于小體積（如＜1mL的）和數升體積都很有效。經相差顯微鏡檢測，細胞破碎率一般＞95%。實驗材料 新鮮培養的酵母
酵母提取物的制備實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 酵母細胞的裂解方法有很多種，包括自溶、壓力破碎（如French加壓罐）、研磨（玻璃珠振蕩）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案討論
核內不均一RNA是mRNA的前體研究
(1) hnRNA和mRNA有相同的序列。用小鼠核內hnRNA分離出的1.5Kb（15S）的RNA分子和10Sβ-珠蛋白mRNA分別與小鼠的b-珠蛋白基因都可進行分子雜交，形成R環。實驗結果表明hnRNA中存在與mRNA相同的序列，但比mRNA更為復雜。此是hnRNA是mRNA前體的最有力的證據。(
轉錄產物mRNA前體的后加工
原核mRNA的原始轉錄產物(除個別噬菌體外)都可直接用于翻譯,而真核mRNA一般都有相應的前體,前體必須經過后加工才能用于轉譯蛋白質。一般認為,真核mRNA的原始轉錄產物(也稱原始轉錄前體), hn RNA(hetero-geneous nuclear RNA,核不均一RNA),最終被加工成成熟的m
mRNA前體的后加工過程介紹
原核mRNA的原始轉錄產物（除個別噬菌體外）都可直接用于翻譯，而真核mRNA一般都有相應的前體，前體必須經過后加工才能用于轉譯蛋白質。一般認為，真核mRNA的原始轉錄產物（也稱原始轉錄前體）， hn RNA（hetero-geneous nuclear RNA，核不均一RNA），最終被加工成成熟的m
歷時十一年！施一公組完成酵母剪接體結構最后拼圖
3月15日，清華大學生命學院施一公教授研究組就剪接體的機理與結構研究，于《細胞》（Cell）期刊發表題為《催化激活狀態的酵母剪接體結構揭示RNA剪接分支反應的機理》（Structures of the Catalytically Activated Yeast Spliceosome Revea
施一公等在《科學》發文報道酵母剪接體三維結構
2016年12月16日，清華大學生命學院、結構生物學高精尖創新中心施一公教授研究組于（Science）雜志就剪接體的結構與機理研究再發長文（Research Article），題為《酵母剪接體處于第二步催化激活狀態下的結構》（Structure of a Yeast Step II Catal
PNAS：U2AF的不同構象在mRNA前體剪接中起著關鍵性作用
2016年11月6日/生物谷BIOON/--在基因的RNA轉錄本能夠表達蛋白之前，它們的非編碼區被一種稱作剪接體的復合體移除。在一項新的研究中，德國科學家們報道這種分子復合體的一種成員的不同構象在這種移除過程中發揮著至關重要的作用。 RNA充當著將儲存在DNA中的遺傳信息有序地轉化為合成特異性
催化活化酵母剪接體的結構揭示了分枝機理
在1977年，Phillip Sharp和Richard Roberts倆個研究組獨立發現了剪切這一過程，緊接著，1979年， Steitz研究組發現五種稱為U1，U2，U4，U5和U6 snRNA的富含尿苷的小核RNA（snRNA）和7種12-35kDa的蛋白質（snRNPs）。之后，
剪接體
剪接體（英文：spliceosome）定義：由核小RNA(snRNA，U1、U2、U4、U5、U6等)和蛋白質因子(約100多種)動態組成、識別RNA前體的剪接位點并催化剪接反應的核糖核蛋白復合體。只與SMT蛋白理解與糖性一致。
關于mRNA前體的后加工的介紹
原核mRNA的原始轉錄產物（除個別噬菌體外）都可直接用于翻譯，而真核mRNA一般都有相應的前體，前體必須經過后加工才能用于轉譯蛋白質。一般認為，真核mRNA的原始轉錄產物（也稱原始轉錄前體）， hn RNA（hetero-geneous nuclear RNA，核不均一RNA），最終被加工成成熟
哺乳動物細胞體外剪接分析實驗
剪接反應的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物補充 SR 蛋白或粗提取物的部分純化組分，最常使用的是 HeLa 細胞的提取物。前體 mRNA 底物通常采用噬菌體聚合酶體外轉錄的方法來制備。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法原理剪接反應的典型做法是使用核提取物，即 S10
哺乳動物細胞體外剪接分析實驗
實驗方法原理 剪接反應的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物補充 SR 蛋白或粗提取物的部分純化組分，最常使用的是 HeLa 細胞的提取物。前體 mRNA 底物通常采用噬菌體聚合酶體外轉錄的方法來制備。實驗材料 前體 mRNA 底物試劑、試劑盒 ATP CP 混合物HEPES-KOH聚乙烯醇