昆蟲病毒的培養實驗
實驗方法原理培養昆蟲病毒主要采取組織培養和感染宿主兩種方法，后者比較容易成功，使用更為廣泛。本實驗以斜紋夜蛾（Prodenialitura）核型多角體感染宿主來培養病毒。斜紋夜蛾能危害棉花、蔬菜等多種作物。核型多角體病毒是多角體病毒侵入宿主細胞后，在細胞核內形成多角體，多角體內包含著很多病毒粒子。斜紋夜蛾多角體的形狀有三角形、四角形、五角形、六角形和圓形，直徑大小在 1.2～3.4 μm，用普通顯微鏡即可觀察到。多角體蛋白可被堿性溶液溶解，而釋放出病毒粒子。因此，多角體通過污染食物經口感染后，被昆蟲的堿性胃液所溶解，釋放的病毒粒子通過中腸上皮組織而進入血腔，在脂肪組織及其他組織（包括血細胞）中增殖。斜紋夜蛾感染病毒后明顯的特征是體色變化， 30℃ 下感染后 3 d 左右幼蟲腹面體色由正常的綠色變為粉紅色。發病后期，食欲減退，行動遲緩，死亡前半天到一天，停止攝食，排稀糞，幼蟲常向上爬行，在自然界常倒懸或附著于枝葉上而死亡。在病毒大......閱讀全文
昆蟲病毒的培養實驗
實驗方法原理培養昆蟲病毒主要采取組織培養和感染宿主兩種方法，后者比較容易成功，使用更為廣泛。本實驗以斜紋夜蛾（Prodenialitura）核型多角體感染宿主來培養病毒。斜紋夜蛾能危害棉花、蔬菜等多種作物。核型多角體病毒是多角體病毒侵入宿主細胞后，在細胞核內形成多角體，多角體內包含著很多病毒粒子。斜
昆蟲病毒的培養實驗
實驗方法原理 培養昆蟲病毒主要采取組織培養和感染宿主兩種方法，后者比較容易成功，使用更為廣泛。本實驗以斜紋夜蛾（Prodenialitura）核型多角體感染宿主來培養病毒。斜紋夜蛾能危害棉花、蔬菜等多種作物。核型多角體病毒是多角體病毒侵入宿主細胞后，在細胞核內形成多角體，多角體內包含著很多病毒粒子。
昆蟲細胞的保存培養實驗
基本方案實驗方法原理實驗材料草地夜蛾（Sf 9）細胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒70％乙醇 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
昆蟲細胞的保存培養實驗
實驗材料草地夜蛾（Sf 9）細胞試劑、試劑盒70％乙醇0.4％(m V)臺盼藍儀器、耗材無血清昆蟲細胞培養基60 mm 培養皿或 25 cm2 培養瓶 27℃ 培養箱旋轉細胞培養瓶多轉瓶的攬拌臺離心機帶螺口蓋的凍存管液氮罐實驗步驟1. 將 3 ml 含 10％ 胎牛血清的昆蟲細胞培養基 TNM-FH
昆蟲細胞的保存培養實驗
實驗方法原理 實驗材料 草地夜蛾（Sf 9）細胞試劑、試劑盒 70％乙醇0.4％(m V)臺盼藍儀器、耗材 無血清昆蟲細胞培養基60 mm 培養皿或 25 cm2 培養瓶 27℃ 培養箱旋轉細胞培養瓶多轉瓶的攬拌臺離心機帶螺口蓋的凍存管液氮罐實驗步驟 1. 將 3 ml 含 10％ 胎牛血清的昆蟲細
昆蟲細胞的保存培養實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 草地夜蛾（Sf 9）細胞
昆蟲細胞的保存和培養實驗
實驗材料 昆蟲試劑、試劑盒 胎牛血清臺盼藍乙醇儀器、耗材 培養瓶培養箱細胞計數器攪拌臺轉子離心機實驗步驟 1. ?將4 ml 含10%胎牛血清的完全昆蟲細胞培養基加入一個25 cm2 培養瓶。取出一支凍存Sf9細胞的安瓿，迅速置于37℃水浴，用手前后劇烈搖動融化之，當安瓿的內容物幾乎完全融化時，將安
昆蟲細胞的保存和培養實驗
實驗材料昆蟲試劑、試劑盒胎牛血清臺盼藍乙醇儀器、耗材培養瓶培養箱細胞計數器攪拌臺轉子離心機實驗步驟1. ?將4 ml 含10%胎牛血清的完全昆蟲細胞培養基加入一個25 cm2?培養瓶。取出一支凍存Sf9細胞的安瓿，迅速置于37℃水浴，用手前后劇烈搖動融化之，當安瓿的內容物幾乎完全融化時，將安瓿浸入7
病毒的培養方法實驗
實驗方法原理 雞胚培養方法操作簡便，適用于流感病毒，痘病毒，皰疹病毒和腦炎病毒等的培養。最常用的雞胚接種方法有四種，即絨毛尿囊膜接種法，羊膜腔（羊水囊）接種法，尿囊腔接種法和卵黃囊接種法。根據不同病毒和不同目的采用適宜的接種方法。實驗步驟 1. ?雞胚的檢查將9～11 日齡雞胚置于檢卵器上，照視觀察
病毒的培養方法實驗——雞胚培養法
病毒必須在易感的活細胞內才能增殖，因此，根據不同病毒選擇敏感動物，離體組織細胞和雞胚進行分離培養。實驗方法原理雞胚培養方法操作簡便，適用于流感病毒，痘病毒，皰疹病毒和腦炎病毒等的培養。最常用的雞胚接種方法有四種，即絨毛尿囊膜接種法，羊膜腔（羊水囊）接種法，尿囊腔接種法和卵黃囊接種法。根據不同病毒和不
動物病毒的雞胚培養實驗
實驗方法原理 本實驗用痘苗病毒和雞新城疫病毒接種雞胚。痘苗病毒適宜于在絨毛尿囊膜上生長，經培養后，產生肉眼可見的白色痘皰樣病變，似小結節或白色小片云翳狀。雞新城疫病毒適宜接種在尿囊腔和羊膜腔內，生長后，雞胚全身皮膚出現出血點，以腦后最顯著。實驗材料?痘苗病毒（Vavvinia virus）雞新城疫病
動物病毒的雞胚培養實驗
實驗方法原理本實驗用痘苗病毒和雞新城疫病毒接種雞胚。痘苗病毒適宜于在絨毛尿囊膜上生長，經培養后，產生肉眼可見的白色痘皰樣病變，似小結節或白色小片云翳狀。雞新城疫病毒適宜接種在尿囊腔和羊膜腔內，生長后，雞胚全身皮膚出現出血點，以腦后最顯著。實驗材料痘苗病毒（Vavvinia virus）雞新城疫病毒（
昆蟲細胞轉染實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 昆蟲細胞 試劑、試劑盒
昆蟲細胞轉染實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 昆蟲細胞 試劑、試劑盒
昆蟲細胞轉染實驗
實驗材料昆蟲細胞試劑、試劑盒胎牛血清脂質體轉染劑儀器、耗材培養皿錐形瓶培養箱離心機轉子實驗步驟1. ?接種2x106個Sf9細胞于60 mm 培養皿，在含10%胎牛血清的完全培養液或無血清培養液中培養，于27℃培養30~60 min，讓細胞貼壁。2. ?相應于毎一待轉染的培養皿，吸取40 ul 無菌
昆蟲細胞轉染實驗
實驗材料 昆蟲細胞試劑、試劑盒 胎牛血清脂質體轉染劑儀器、耗材 培養皿錐形瓶培養箱離心機轉子實驗步驟 1. ?接種2×106個Sf9細胞于60 mm 培養皿，在含10%胎牛血清的完全培養液或無血清培養液中培養，于27℃培養30~60 min，讓細胞貼壁。2. ?相應于毎一待轉染的培養皿，吸取40
病毒的培養方法實驗——傳代細胞培養法
實驗方法原理從人及動物某些組織，特別是腫瘤組織，經多次傳代可建立傳代細胞系，這種細胞能無限地傳代，某些傳代細胞對病毒敏感范圍較廣，可用作病毒的分離鑒定，如HeLa 細胞，Hep-2 細胞及KB 細胞。三種細胞均來自人腫瘤組織細胞，HeLa 細胞來自子宮頸癌，Hep-2 細胞來自喉癌而KB 細胞來自上
桿狀病毒昆蟲細胞表達系統
實驗步驟 一、桿狀病毒表達載體 最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒，其基因組含有一段外源核酸序列，通常為編碼目標蛋白質的dDNA，在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成
桿狀病毒昆蟲細胞表達系統
實驗步驟一、桿狀病毒表達載體最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒，其基因組含有一段外源核酸序列，通常為編碼目標蛋白質的dDNA，在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成，其位于病毒基因組多角體座位，替代了非必需的野生型多角體基因。在實驗室中
病毒的培養方法實驗—組織培養法原代細胞單層培養
實驗方法原理組織培養是目前培養病毒應用最廣的一種培養方法，其優點是①經濟適用，結果正確且敏感；②較實驗動物易于控制。原代細胞單層培養法，是指動物（包括脊椎動物和無脊椎動物）的組織自機體取出后，經胰酶或其他細胞分散劑消化處理，得到單個細胞懸液。以一定量接種到特定容器中，加入細胞生長所必需的營養液，置合
病毒的培養方法實驗——動物接種法
實驗方法原理注意選擇動物種類，年齡。按病毒侵襲部位的不同，選擇適宜的接種途徑，例如腦炎病毒以注射腦內最敏感。接種后經一定潛伏期，動物發病或死亡即進行解剖。根據動物的癥狀表現，器官病理改變，受染臟器組織懸液能在同種動物進行連續傳代，并排除其他微生物污染的可能性等，即可證明有病毒的增殖。實驗材料小白鼠實
病毒－DNA－的提取實驗——培養細胞中病毒－DNA－的提取
實驗材料細胞試劑、試劑盒裂解液TE 緩沖液儀器、耗材培養瓶EP管真空泵實驗步驟1. 貼壁培養細胞傾去培養液，加 PBS 洗 2次,加胰蛋白酶消化 (37℃, 5~10 min)后移入Ep管中，2000 r/min 離心 10 min, 棄上清液，用 PBS 懸浮細胞，離心洗滌 2~3次，用 PBS
昆蟲細胞的低MOI桿病毒感染
感染懸浮細胞是使桿病毒系統生產蛋白的普遍方法。懸浮培養的細胞很容易從10ml擴大到100L。一般來說，懸浮的細胞在無血清的培養液中培養。這種培養液許多公司有售，比如Life Technologies、Hyclone、Biowhitaker、JRH Biosciences、Expression Sys
昆蟲細胞高MOI桿病毒感染
高MOI（?Multiplicity Of Infection，等于用于感染的病毒數目與細胞數目的比值）感染是生產蛋白的最好方法。這有兩個原因。一是不用考慮DIP（Defective Interfering Particles，即只包裝入部分基因組的病毒顆粒）的形成，因為關心的是細胞或者培養液中的蛋
昆蟲利用siRNA而非miRNA抵御病毒侵染
棉鈴蟲（Helicoverpa armigera），是夜蛾科昆蟲的一種，寄主植物有20多科200余種，其中大部分為重要栽培作物，是棉花的主要害蟲之一。棉鈴蟲單核衣殼核多角體病毒（HaSNPV）是一種桿狀病毒,能專一性地感染棉鈴蟲，作為生物殺蟲劑已得到廣泛應用。近日澳大利亞昆士蘭大學的研究人員對棉鈴蟲
桿狀病毒昆蟲細胞表達系統3
七、桿狀病毒表達載體的新一代昆蟲細胞宿主最早的鱗翅類昆蟲細胞的遺傳轉化技術出現在1990年（Jarvisetal.，1990)。那時，研發該技術的初衷在于構建一個穩定轉化的昆蟲細胞系，它旨在能夠持續生產目標重組蛋白而無需使用桿狀病毒進行感染。然而, 構建這個生產用細胞系所用的載體及方法也為構建具有新
桿狀病毒昆蟲細胞表達系統2
五、親代桿狀病毒基因組的改進就像轉移質粒的改進，對親代桿狀病毒基因組的改進也是為了滿足各種不同的需要。起初，最主要的目的是找到克服重組桿狀病毒載體構建和分離低效率的方法，這也是最初的桿狀病毒-昆蟲細胞系統存在的主要問題。現在已經知道這個問題的根源在于, 在共轉染的昆蟲細胞系中，轉移質粒和親代桿狀病毒
昆蟲細胞共轉染實驗
基本方案 用線性化桿狀病毒DNA ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 草地夜蛾（Sf 9）細胞
昆蟲細胞共轉染實驗
實驗材料草地夜蛾（Sf 9）細胞含目的基因的重組桿狀病毒轉移質粒陽性對照載體：pVL 1392 - XylE試劑、試劑盒ORF 1629 缺失的線性 AcMNPV DNA轉染緩沖液 B轉染緩沖液A500 mmol／L 兒茶酚／50 mmol／L 硫酸氫鈉儀器、耗材含 10％ 胎牛血清（FBS）的 T
昆蟲細胞共轉染實驗
實驗方法原理 實驗材料 草地夜蛾（Sf 9）細胞含目的基因的重組桿狀病毒轉移質粒陽性對照載體：pVL 1392 - XylE試劑、試劑盒 ORF 1629 缺失的線性 AcMNPV DNA轉染緩沖液 B轉染緩沖液A500 mmol／L 兒茶酚／50 mmol／L 硫酸氫鈉儀器、耗材 含 10％ 胎牛