OsAGAP的Northern雜交
實驗概要本實驗參照Sambrook等(1989)的方法進行轉膜，雜交。實驗步驟1. RNA樣品的電泳轉膜將適量的瓊脂糖溶于水，微波爐加熱使之完全溶解，并冷卻至60℃；將甲醛溶液、瓊脂糖水溶液、5X甲醛凝膠電泳緩沖液按1:3.5:1.1比例混合，灌制凝膠。將不同材料的上樣量調成一致，均為35ug，與樣品buffer混合制樣，65℃溫育15min，冰浴冷卻后，加入loading buffer上樣。DEPC水浸泡過的電泳槽中，加入1X甲醛凝膠電泳緩沖液((5X甲醛凝膠電泳緩沖液：MOPS 10.3g；乙酸鈉2.72g；EDTA(0.5M pH8.0)5ml；ddH2O加至500mI；pH 7.0)，3-4v/cm電泳。待溴酚藍遷移至凝膠的2/3處，停止電泳。將凝膠轉移至一個培養皿內，切去凝膠左上角以作標記；將凝膠用滅菌的DEPC水淋洗3-4次，然后浸泡于數倍體積的20 X SSC溫和搖動45min；利用毛細作用轉膜(轉移緩沖液......閱讀全文
OsAGAP的Northern雜交
實驗概要本實驗參照Sambrook等(1989)的方法進行轉膜，雜交。實驗步驟1. RNA樣品的電泳轉膜將適量的瓊脂糖溶于水，微波爐加熱使之完全溶解，并冷卻至60℃；將甲醛溶液、瓊脂糖水溶液、5X甲醛凝膠電泳緩沖液按1:3.5:1.1比例混合，灌制凝膠。將不同材料的上樣量調成一致，均為35ug，與樣
OsAGAP－mRNA原位雜交
實驗概要本實驗以OsAGAP mRNA為試材介紹了原位雜交技術，包括：原位雜交正義、反義探針制備，原位雜交探針半定量，植物材料的固定與石蠟包埋，切片與粘片，雜交和顯色等過程。實驗步驟1. OsAGAP原位雜交正義、反義探針制備對OsAGAP cDNA全長在GenBank中做BLAST分析，選取特
OsAGAP在擬南芥中的功能分析
實驗概要本實驗對水稻小G蛋白ArfGTPase激活蛋白OsA GAP在擬南芥中的功能進行了分析，首先構建了OsAGAP在擬南芥中的正義表達載體，利用農桿菌介導的真空抽濾法轉化擬南芥，篩選擬南芥陽性苗，然后用組織PCR和 Southern雜交做了檢測。實驗材料1. 所用擬南芥((Arabidopsis
OsAGAP蛋白的Arf－GTPase激活活性測定
實驗概要本實驗誘導表達了Arf-GST和OsAGAP-GST融合蛋白，純化后測定了OsAGAP蛋白的Arf GTPase激活活性。主要試劑1. GST融合蛋白純化試劑盒(Pharmacia公司)2. Enzcheck TM Phosphate檢測試劑盒(Molecular ProbesCo.)實驗步
基因槍轟擊洋蔥表皮觀察GFP瞬時表達
實驗概要本實驗在構建了OsAGAP瞬時表達載體的基礎上，采用基因槍轟擊洋蔥表皮觀察了GFP的瞬時表達。主要試劑高滲培養液(MS無機鹽、40g/L甘露醇)，高滲固體培養基(MS無機鹽、40g/L甘露醇、0.7% agar)，無水乙醇，無菌去離子水，12.5 M CaCl2，0.1 M亞精胺，等滲培養基
基因槍轟擊洋蔥表皮觀察GFP瞬時表達
實驗試劑高滲培養液(MS無機鹽、40g/L甘露醇)，高滲固體培養基(MS無機鹽、40g/L甘露醇、0.7% agar)，無水乙醇，無菌去離子水，12.5 M CaCl2 ，0.1 M亞精胺，等滲培養基(MS培養基)實驗設備高速離心機，1.5 ml Ep管，渦旋器，超凈臺，基因槍，氣瓶，激光共聚焦顯微