聚合酶鏈式反應（PCR）擴增DNA片段
一、實驗目的1．學習PCR基因擴增的基本原理和操作方法。2．理解PCR基因擴增在分子生物實驗技術中的重要性。3．了解引物設計的一般要求。二、實驗原理多聚酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction, PCR )：原理類似于DNA的變性和復制過程，即在高溫（93-95℃）下，待擴增的靶DNA雙鏈受熱變性成為兩條單鏈DNA模板；而后在低溫（37～65℃）情況下，兩條人工合成的寡核苷酸引物與互補的單鏈DNA模板結合，形成部分雙鏈；在Taq酶的最適溫度（72℃）下，以引物3’端為合成的起點，以單核苷酸為原料，沿模板以5’→3’方向延伸，合成DNA新鏈。這樣，每一雙鏈的DNA模板，經過一次解鏈、退火、延伸三個步驟的熱循環后就成了兩條雙鏈DNA分子。如此反復進行，每一次循環所產生的DNA均能成為下一次循環的模板，每一次循環都使兩條人工合成的引物間的DNA特異區拷貝數擴增一倍，PCR產物得以2n的批數形式迅速擴增，經過25～......閱讀全文
聚合酶鏈式反應（PCR）擴增DNA片段
一、實驗目的1．學習PCR基因擴增的基本原理和操作方法。2．理解PCR基因擴增在分子生物實驗技術中的重要性。3．了解引物設計的一般要求。二、實驗原理多聚酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction, PCR )：原理類似于DNA的變性和復制過程，即在高溫（93-95℃）下，待擴增的
PCR擴增分離目的DNA片段
一、目的了解多聚合酶鏈反應DNA 擴增技術的基本原理和實驗應用，掌握PCR反應基本技術。二、原理PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶鏈式反應是1986 年由Kallis Mullis 發現。這項技術已廣泛地應用于分子生物學各個領域，它不僅可用于基因分離克隆和核酸序列分
PCR擴增樣本DNA的HLA基因片段
一、PCR擴增體系1. 1.0uM 引物2. 300ng待測樣本基因組DNA3. 2.0U Taq多聚酶4. 200uM 各種dNTP5. 用1 X PCR緩沖液（10mM Tris-HCl，pH8.3，50mM KCl，1.5mM MgCl2，0.01%明膠）調至總體積100ul，并用50ul礦物
PCR技術（八）：擴增較大片段DNA的PCR方法
一般PCR方法在擴增大片段DNA時的局限性： 通常所用的PCR方法都在兩個方面有局限，即目標產物精確程度和合成片段的大小。Pfu(Pyrococcus furiosus)DNA聚合酶，具有完整的3'外切酶校讀活性（3'-editing-exonuclease），可以將每個循環中堿基
聚合酶鏈式反應體外擴增DNA：PCR
聚合酶鏈式反應體外擴增DNA1.????按以下次序，將各成分加在0.5 ml滅菌離心管、擴增管或滅菌滴定板的孔內混合：10×擴增緩沖液???????????????????????????????5μl20 mmol/L 4種dNTP混合液（pH 8.0）???????????1μl20?μmol/
PCR擴增分離目的DNA片段實驗原理、材料和步驟
PCR擴增法實驗材料 DNA 模板 試劑、試劑盒 電泳緩沖液 加樣緩沖液 溴化乙錠溶液 瓊脂糖 TaqDNA 多聚酶 5′反應緩沖液
PCR擴增分離目的DNA片段實驗原理、材料和步驟
PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶鏈式反應是1986 年由Kallis Mullis 發現。這項技術已廣泛地應用于分子生物學各個領域，它不僅可用于基因分離克隆和核酸序列分析，還可用于突變體和重組體的構建，基因表達調控的研究，基因多態性的分析，遺傳病和傳染病診斷，腫瘤
PCR擴增分離目的DNA片段實驗原理、材料和步驟
一、目的了解多聚合酶鏈反應DNA 擴增技術的基本原理和實驗應用，掌握PCR反應基本技術。二、原理PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶鏈式反應是1986 年由Kallis Mullis 發現。這項技術已廣泛地應用于分子生物學各個領域，它不僅可用于基因分離克隆和核
PCR擴增分離目的DNA片段實驗原理、材料和步驟（二）
三、材料（一）儀器與器皿PRC 擴增儀（PE2400），瓊脂糖凝膠電泳設備，微量取樣器，一次性指形管，凝膠成像儀,玻片（二）試劑與材料1．瓊脂糖凝膠電泳試劑1）電泳緩沖液：Tris—乙酸0.04mol/L PH8.0? 0.002mol/L EDTA2）加樣緩沖液：0.25%溴酚蘭40% w/v蔗糖
PCR擴增分離目的DNA片段實驗原理、材料和步驟（一）
一、目的了解多聚合酶鏈反應DNA 擴增技術的基本原理和實驗應用，掌握PCR反應基本技術。二、原理PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶鏈式反應是1986 年由Kallis Mullis發現。這項技術已廣泛地應用于分子生物學各個領域，它不僅可用于基因分離克隆和核酸
為什么在PCR擴增DNA片段時，要引入兩種引物
追答如圖所示，引物是用來和DNA兩端結合的，由于兩端的堿基序列一般不一樣，所以要兩種引物。???要是兩端序列一樣，用一種就可以。
目的基因片段的PCR擴增與克隆
1.PCR技術 PolymeraseChainReaction聚合酶鏈反應它是一種模擬天然DNA復制過程，在有DNA模板、DNA聚合酶（Taq酶）、RNA引物和四種dNTP的情況下，通過高溫變性（90℃－95℃，1－2min）,低溫退火（25℃－37℃，1－2min）,中溫延伸（60℃－75℃，90
高－GC－含量片段的－PCR－擴增實驗
試劑、試劑盒甜菜堿dNTP 溶液二甲基亞砜四甲基砜Taq 酶和酶緩沖引物儀器、耗材PCR 儀實驗步驟一、材料1. 試劑甜菜堿（Sigma 公司）dNTP 溶液（含四種 dNTP, 每種 25 mmol/L)二甲基亞砜（DMSO)(Sigma 公司）四甲基砜（Sigma 公司）2. 酶和酶緩沖液Taq
高－GC－含量片段的－PCR－擴增實驗
試劑、試劑盒 甜菜堿dNTP 溶液二甲基亞砜四甲基砜Taq 酶和酶緩沖引物儀器、耗材 PCR 儀實驗步驟 一、材料1. 試劑甜菜堿（Sigma 公司）dNTP 溶液（含四種 dNTP, 每種 25 mmol/L)二甲基亞砜（DMSO)(Sigma 公司）四甲基砜（Sigma 公司）2. 酶和酶緩沖液
高－GC－含量片段的－PCR－擴增實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 甜菜堿 dNTP 溶液 二甲基亞砜 四甲基砜 Taq 酶和酶緩沖引物 儀器、耗材
聚合酶鏈式反應（PCR）PCR不擴增的原因
1、PCR擴增體系問題。用其他正在進行的且擴增正常的模板和引物證明PCR擴增體系沒有問題,即PCR反應混合物、水、取液器、PCR儀、操作等都是好的(陽性對照)2、引物問題。用以前擴增產物做模板(稀釋50倍),證明引物沒有問題3、只是模板問題了。因為樣本降解的可能性比引物降解的可能性高得多。也可能是樣
聚合酶鏈式反應（PCR）擴增和擴增產物克隆
?PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈反應)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA的方法.它包括三個基本步驟：(1) 變性(Denature)：目的雙鏈DNA片段在94℃下解鏈；(2) 退火(Anneal):兩種寡核苷酸引物在適當溫度(50℃左右)下與模板上的目的序列通過
聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆
概 述? PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶鏈反應)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA的方法.它包括三個基本步驟: (1) 變性(Denature):目的雙鏈DNA片段在94℃下解鏈; (2) 退火(Anneal):兩種寡核苷酸引物在適當溫度(50℃左右)下與模板上
聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆
第一節 概 述?PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶鏈反應)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA的方法.它包括三個基本步驟: (1) 變性(Denature):目的雙鏈DNA片段在94℃下解鏈; (2) 退火(Anneal):兩種寡核苷酸引物在適當溫度(50℃
逆轉錄PCR(RTPCR)擴增基因特異片段
逆轉錄PCR(RT-PCR)擴增基因特異片段 一、實驗原理RT-PCR是將RNA的反轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成?cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR技術靈敏而且用途廣泛，可用于檢測細胞中基因表達水平，細胞中R
PCR為什么能擴增特意的基因片段
pcr擴增～獲得大量的目的片段～只有這樣才便于目的片段的分離和純化～要知道現在的分離純化手段dna損失50%都算少的
PCR擴增后的片段用什么方法檢測
聚合酶鏈式擴增反應。通過電泳進行產物定量只是相對的大概估算，一般的marker都有這樣的功能，比如你的產物小于2000bp的話，你在泳道加入5ul 的TAKARA的DL2000marker，其中最亮的一條帶750bp含量約為150ng，其他的條帶約為50ng，根據你的條帶的明暗和marker進行比較
PCR進階——GCRich片段的擴增策略
PCR早已是分子生物學實驗的常規技術，但是GC-rich擴增始終是有難度的應用。 以人基因組為例，大約3%的序列可劃為GC-rich序列，尤其是在啟動子，增強子等控制元件，GC-rich序列更為常見。因此，GC-rich片段的PCR擴增困難，也就阻礙了有關這類序列的科研進展。 GC-Rich
聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆（四）
[注意]1、純化樹脂在使用前必須充分混勻。 2、PCR產物中礦物油應盡量吸去，否則會影響提取DNA的 產量。四、載體加dT尾1、將1μg pUC19用SmaⅠ全酶切。 2、在小管中按上述PCR反應，加入各種混合物，除將4μl 4種dNTP改為4μl 25mM dTTP。 3、加入1μl(
聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆（三）
材料、設備及試劑一、材料不同來源的模板DNA。二、設備移液器及吸頭，硅烷化的PCR小管，DNA擴增儀(PE公司)，瓊脂糖凝膠電泳所需設備(電泳槽及電泳儀)，臺式高速離心機。三、試劑：1、10×PCR反應緩沖液：500mmol/L KCl， 100mmol/L Tris·Cl， 在25℃下， pH9.
聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆（二）
二、PCR反應參數1、變性：在第一輪循環前，在94℃下變性5-10min非常重要，它可使模板DNA完全解鏈，然后加入Taq DNA聚合酶(hot start)，這樣可減少聚合酶在低溫下仍有活性從而延伸非特異性配對的引物與模板復合物所造成的錯誤。變性不完全，往往使PCR失敗，因為未變性完全的DNA
聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆（一）
PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈反應)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA的方法.它包括三個基本步驟：(1) 變性(Denature)：目的雙鏈DNA片段在94℃下解鏈；(2) 退火(Anneal):兩種寡核苷酸引物在適當溫度(50℃左右)下與模板上的目
差異－DNA－的－PCR－擴增實驗
在本方案所描述的反應中，差異 DNA 被選擇性地擴增。每個實驗至少應該有 4 個反應：①已消減的檢測 DNA;②未消減的檢測者對照（1-c);③反向消減的檢測 DNA;④反向未消減的對照（2-c)。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑
差異－DNA－的－PCR－擴增實驗
實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑dNTP 溶液（包含所有 4 種 dNTP，各 10 mmol/L)2. 酶和酶緩沖液PCR 反應緩沖液，10X聚合酶混合液，50X(Advantage2，Clontech，或相當產品）3. 核酸和寡核苷
差異－DNA－的－PCR－擴增實驗
實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑dNTP 溶液（包含所有 4 種 dNTP，各 10 mmol/L)2. 酶和酶緩沖液PCR 反應緩沖液，10X聚合酶混合液，50X(Advantage2，Clontech，或相當產品）3. 核酸和寡核苷酸DNA 樣品（即方案 2 第 16 步中的各消減樣品