地高辛標記cRNA探針實驗方法
1．組織前處理在組織制片中以冷凍切片（厚10～30μm）最佳。切片貼在預先清潔，高溫處理并涂以粘附劑載玻片上，先在37℃預干燥4h，然后置于37℃烤箱中過夜。經過上述處理的切片如在-20℃可保存2～3周，在-70℃可保存數月之久，有報告可保存數年之久的。但仍以新鮮制片為好。如為石蠟包埋切片，應脫蠟經梯度酒精入水。一般不提倡浸入二甲苯溶液。但在細胞內mRNA含量高時應用二甲苯脫蠟后仍能顯示。經水洗后入37℃烤箱4h或過夜，然后進行雜交前處理。 在烘烤及低溫保存時，為防塵埃及空氣中RNA酶的污染，宜用錫箔紙（foilpaper）包被，內加少許干燥劑（變色硅膠）。 下列步驟所需玻璃器皿均需消毒，操作者需戴手套。 （1）PBS洗2×3min。 （2）選擇少數幾張切片作為“RNA酶對照片”。 其它切片暫放于PBs 內。 RNA酶對照片處理方法：加RNA酶（100μg/ml）在預熱37℃的溶液內。放在潮濕的盛有少許2×SSC......閱讀全文
地高辛標記cRNA探針實驗方法
1．組織前處理在組織制片中以冷凍切片（厚10～30μm）最佳。切片貼在預先清潔，高溫處理并涂以粘附劑載玻片上，先在37℃預干燥4h，然后置于37℃烤箱中過夜。經過上述處理的切片如在-20℃可保存2～3周，在-70℃可保存數月之久，有報告可保存數年之久的。但仍以新鮮制片為好。如為石蠟包埋切片，應脫
地高辛對探針的標記
實驗概要本實驗擬通過隨機引物及PCR方法，將DNA探針片段用DIG標記，進一步掌握探針的標記技術。實驗原理帶有地高辛標記的dUTP（圖1）通過缺口翻譯、隨機翻譯或PCR等反應而使探針核酸片段帶有地高辛，進一步可與帶有AP、CSP等各種抗地高辛抗體復合物發生免疫反應，使探針上帶有AP等分鐘，進一步能催
地高辛標記探針的化學發光檢測實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 抗體實驗步驟 1. ?用地髙辛標記探針與帶DNA或RNA印跡的正電荷尼龍膜雜交。?2. ?根據廠商的推薦條件，封閉和結合抗體。3. ?對X光片曝光約20 min。
地高辛標記探針的化學發光檢測實驗
地高辛系統是過提供的另一種非同位素標記方法，其檢測方法是通過偶聯上一種或數種熒光染料或酶的抗地高辛抗體，或用間接免疫熒光來測定。實驗材料DNA試劑、試劑盒抗體實驗步驟1. ?用地髙辛標記探針與帶DNA或RNA印跡的正電荷尼龍膜雜交。?2. ?根據廠商的推薦條件，封閉和結合抗體。3. ?對X光片曝光約
地高辛標記探針的化學發光檢測實驗
化學發光法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
地高辛配基隨機標記DNA探針
1．標記DNA探針 每次標準的反應可標記10ng至3μg線性的DNA，也可標記更大量的DNA，但所有的成分和體積要相應增加。 （1）DNA探針熱變性，煮沸10min，迅速冷卻于冰/乙醇中5min以上，待用。 （2）取Eppendorf管（1.5ml）置于冰上，加下列及試劑：
雜交信號的放大實驗——地高辛標記探針的信號
實驗材料雜交信號試劑、試劑盒地高辛SSCBSA熒光素儀器、耗材加濕盒水浴鍋培養箱實驗步驟1. ?用地高辛標記的探針與切片雜交并洗片（見“熒光原位雜交實驗”基本方案步驟1~6）。?2. ?加50 μl 10 μg/ml?的羊抗地高辛抗體Fab片段于玻片上，蓋以22 mm2?大小的Parafilm 膜，
非放射性地高辛標記DNA探針法
實驗概要掌握非放射性地高辛標記DNA探針法。??實驗原理以往人們是用放射性同位素來標記探針DNA。近年來，非同位素標記方法發展很快，已有取代同位素標記法的趨勢。地高辛配基隨機標記DNA探針法，是較為成功的一種非同位素標記方法（Saiki等，1985）。其原理是：用化學方法把類固醇類半抗原地高辛分子連
非同位素探針進行原位雜交實驗地高辛標記探針信號放大
試劑、試劑盒10μg ml 羊抗地筒辛抗體 Fab 片段 溶于 4×SSC 1% m VBSA (組分V)地高辛信號放大溶液：3. 5?7. 0 ug ml熒光素標記的兔抗羊IgG (Sigma) 溶于 4×SSC 1% m V BSA (組分 V)儀器、耗材Parafilm 膜玻片實驗步驟1) 用
地高辛配基隨機標記DNA探針試劑盒成份
1．無標記對照DNA1 此管內有20μl pBR328 DNA100μg/ml,pBR328分別用BamHⅠ,BglⅠt HinfⅠ消化，它們的混合比例為2：3：3，共有16個Pbr328片段，這些片段的大小分別為：4907，2176，1766，1230，1033，653，517，453，
地高辛配基隨機標記DNA探針試劑盒成份
1．無標記對照DNA1 此管內有20μl pBR328 DNA100μg/ml,pBR328分別用BamHⅠ,BglⅠt HinfⅠ消化，它們的混合比例為2：3：3，共有16個Pbr328片段，這些片段的大小分別為：4907，2176，1766，1230，1033，653，517，453，
簡述探針標記方法
①缺口平移標記法。利用的是DNA聚合酶I能修復DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機切出切口，然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´；端核苷酸，同時在3´；端修復加入被標記核苷酸，切口平行推移。缺口平移法快速、簡便、成本相對較低、比活性相對較高、標記均勻，多用于大分
地高辛標記RNA常用的方法介紹
地高辛標記RNA常用的方法是將DIG與UTP共價結合形成DIG-UTP，以DIG-UTP、ATP、CTP、GTP為底物通過RNA聚合酶T7、SP6經體外轉錄合成標記RNA。此法多用于RNA探針的制備，一般每20~25個核苷酸可引入一個地高辛分子。5'末端標記法5'末端標記法是通過化學
cRNA探針在原位雜交組織化學
Angerer及其同事們首先應用RNA探針于原位雜交（見Cox et al 1984），核酸探針為單鏈的RNA分子，產生自具有質粒逆轉錄系統的cDNA克隆（圖20-2）。由于它是單鏈的，不像雙鏈的DNA探針，在溶液中不會再退火（reanneal），因此，較大百分比的探針可參與雜交反應，較cDNA探針
原位雜交組織化學實驗技術4
二、生物素標記cRNA探針在原位雜交組織化學中的應用 （一）光敏生物素標記cRNA探針的應用 以線性質粒DNA為模板合成未加標記物的cRNA探針，使其最終濃度為0.5～1.0μg/μl(500~1000ng/μl),再與等體積的光敏生物素（1μg/μl）混合。在150瓦鹵素燈下，距離光源20c
基因探針的標記方法
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交，有必要對探針加以標記，以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素、地高辛配體等作為標記物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。
核酸探針標記的實驗過程
?實驗原理分子生物研究中，zui常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應用于轉基因植物拷貝數的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可
DNA探針的標記實驗
探針標記法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 分子雜交是核酸鏈以堿基配對規則的一種結合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測，必須將雜交鏈中的一
DNA探針的標記實驗
核酸探針分子雜交是指具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下可按堿基互補原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針；根據標記物不同，可分為放射性標記探針和非放射性標記探針兩大類；根據是否存在互補鏈，可分為單鏈和雙鏈探針；根據放射性標記物摻入情況，可分為均勻
核酸探針標記的實驗過程
實驗原理分子生物研究中，zui常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應用于轉基因植物拷貝數的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將
DNA探針的標記實驗
實驗方法原理?分子雜交是核酸鏈以堿基配對規則的一種結合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測，必須將雜交鏈中的一條用某種可以檢測的進行標記，這條鏈就稱為核酸探針。因此，核酸探針的制備是分子雜交技術的關鍵。放射性同位素標記是最早采用的也是目前最常用的核酸探針標記方法。
核酸探針標記的實驗過程
實驗原理分子生物研究中，最常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應用于轉基因植物拷貝數的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將
高地辛標記的DNA探針制備實驗——基本方法
實驗材料DNA試劑、試劑盒dTTPdUTPEDTASDS儀器、耗材水浴鍋培養箱實驗步驟1. ?建立一個標準100 μl 反應體系，用10 μl，10×地高辛·11-dUTP/dTTP貯液，DNA酶Ⅰ酶量不變，15℃溫育2 h。2. ?取小份在微型膠中進行電泳以檢測探針大小。3. ?繼續反應直到獲得大
原位雜交組織化學技術的基本方法（二）
如前所述，雜交前的準備只是為雜交的成功奠定基礎，要獲得滿意的實驗結果，在雜交這一實驗過程中還須注意以下的環節。1．探針的濃度 很難事先確定每一種實驗探針的濃度，但要掌握一個原則，即探針濃度必須給予該實驗zui大的信/噪比值。背景染色的高低也與探針濃度有關。根據國內外實驗工作者的經驗，認為zui佳原
基因探針的標記方法介紹
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交，有必要對探針加以標記，以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素、地高辛配體等作為標記物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。
關于探針標記方法的介紹
①缺口平移標記法。利用的是DNA聚合酶I能修復DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機切出切口，然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´；端核苷酸，同時在3´；端修復加入被標記核苷酸，切口平行推移。缺口平移法快速、簡便、成本相對較低、比活性相對較高、標記均勻，多用于大分
基因探針的標記方法介紹
①缺口平移標記法。利用的是DNA聚合酶I能修復DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機切出切口,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5′端核苷酸,同時在3′端修復加入被標記核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、簡便、成本相對較低、比活性相對較高、標記均勻,多用于大分子DNA標記,(>100
共聚焦熒光探針標記方法
（一）BCECF測定pH值 1. 儲存液配制 BCECF-AM溶于DMSO配成1mmol/L溶液，等份分裝后，－20℃避光保存。 2. 染色步驟 將培養細胞用PBS（含Ca2+、Mg2+）洗2遍。加入BCECF-AM（終濃度1～5μmol/L），37℃孵育30～60min。PBS（含Ca2+、M
末端標記法介紹DNA探針的標記方法
末端標記法不是將DNA進行全長標記，只在其5'端或3’端導入標記物進行部分標記。該標記方法可得到全長DNA探針，因為攜帶的標記分子較少，所以標記比活性不高。
原位雜交組織化學實驗技術1
第一節 原位雜交組織化學概述 一、核酸分子雜交技術 1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質