多聚酶鏈式反應PCR
多聚酶鏈式反應PCR ：(1)PCR原理：在模板DNA、引物和4種脫氧單核苷酸存在的條件下依賴于耐高溫的DNA聚合酶的酶促合成反應。以欲擴增的DNA做為模板，以和模板正鏈和負鏈末端互補的兩種寡聚核苷酸做為引物，經過模板DNA變性、模板引物復性結合、并在DNA聚合酶作用下發生引物鏈延伸反應來合成新的模板DNA。模板DNA變性、引物結合(退火)、引物延伸合成DNA這三步構成一個PCR循環。每一循環的DNA產物經變性又成為下一個循環的模板DNA。這樣，目的的DNA的數量將以2n的形式累積，在2小時內可擴增30(n)個循環，DNA量達原來的上百萬倍；(2)PCR過程：1. 模板DNA的變性：模板DNA經加熱至95℃左右一定時間后，DNA雙鏈被解離為單鏈并游離于溶液中的過程；2. 模板DNA與引物的退火(復性)：人工合成的一對引物在適合的溫度下(通常50-65℃)分別與模板DNA需要擴增區域的兩翼進行準確配對結合的過程；3. ......閱讀全文
PCR技術
? ?PCR技術www.runwelltac.comPCR技術的基本原理與操作流程聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，為zui常用的分子生物學技術之一。典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿
PCR技術
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 PCR是在模板DNA、引物和dNTPs的存在下依賴于DNA聚合酶的酶促反應。PCR技術的特異性取決于引物和模板結合的特異性。反應分為變性、退火、延伸三步，經過一定的循環，介于兩個引物之間的特異DNA片段得到大量擴增。?
菌落PCR
菌落PCR可用于：（1）重組體的篩選；（2）重組體DNA測序分析。實驗方法原理直接挑取菌落進行PCR，PCR的95℃加熱可以破胞，釋放基因組DNA或質粒，成為PCR體系的模板，然后進行鏈式擴增。實驗材料菌落樣品試劑、試劑盒dNTPPCR混合液儀器、耗材PCR儀實驗步驟1. ?PCR混合液的制備（1）
反向PCR
標準 PCR 技術應用于定位在兩個引物之間（指向內部）的一段 DNA 片段的擴增。與此相反，反向 PCR (inverse PCR) 應用于擴增和克隆與已知 DNA 序列某一個末端相鄰的側翼的未知 DNA 序列，這種未知序列沒有引物可以利用。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原
簡并PCR
簡并PCR就是引物合成的時候在某個位置用兩種以上的堿基代替原來的單堿基滲入oligo鏈合成的是一堆混和物實際上能夠起做用的在其中占一定比例這個比例一般用簡并度表示比如agctN合成的時候最后一位用4種堿基反應真正用的agctc，占總數的1/4agctNN其中agctCC就占1/16一般公司推薦3‘端
降落PCR
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40
菌落PCR
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 直接挑取菌落進行PCR，PCR的95℃加熱可以破胞，釋放基因組DNA或質粒，成為PCR體系的模板，然后進行鏈式擴增。 實驗材料 菌落樣品
Long－PCR
Two long PCR steps:First round of the nested PCR step of the end point dilution procedure to quantitate the cDNA.First round of the nested PCR step of
反向PCR
實驗方法原理?標準 PCR 技術應用于定位在兩個引物之間（指向內部）的一段 DNA 片段的擴增。與此相反，反向 PCR (inverse PCR) 應用于擴增和克隆與已知 DNA 序列某一個末端相鄰的側翼的未知 DNA 序列，這種未知序列沒有引物可以利用。該項技術由幾個研究小組開發（Ochm
實時－PCR
試劑、試劑盒 cDNA 樣品rRNA 引物和探針目的基因的引物和探針Tag Man Universal PCR Master Mix 超純水儀器、耗材 序列監測儀實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑來自方案 5 的 cDNA 樣品20X18SrRNA 引物和探針（AppliedBiosyste
PCR步驟
1、?DNA變性（90℃-96℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下， 氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。2、退火（25℃-65℃）：系統溫度降低，引物與DNA模板結合，形成局部雙鏈。3、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP為原料，從引物的5′端→3′端延伸，合成與模板互
菌落PCR
實驗方法原理 直接挑取菌落進行PCR，PCR的95℃加熱可以破胞，釋放基因組DNA或質粒，成為PCR體系的模板，然后進行鏈式擴增。實驗材料 基因樣品試劑、試劑盒 dNTPPCR混合液儀器、耗材 PCR儀實驗步驟 1. ?PCR混合液的制備（1）Taq buffer（10×） 180 ul（2）dNT
PCR引物
PCR Primer Design and Reaction Optimization?(Molecular Biology Techniques Manual)??PCR Primer Design?(Newman Lab)??PCR Primer Design?(Eppendorf)Detail
pcr原理
PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在DNA聚合酶的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈
pcr原理
PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在DNA聚合酶的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈
反向PCR
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 標準 PCR 技術應用于定位在兩個引物之間（指向內部）的一段 DNA 片段的擴增。與此相反，反向 PCR (inverse PCR) 應用于擴增和克隆與已知 DNA 序列某一個末端相鄰的側翼的未知 DNA 序列，這種未知
原位PCR
實驗概要原位PCR技術自上世紀90年代初建立至今，科學家就一直對原位PCR的技術和應用進行研究，目前該項技術已日臻完善。原位PCR既能分辨帶有靶序列的細胞又能標出靶序列在細胞內的位置，在分子和細胞水平上研究疾病的發病機理、臨床過程以及病理的轉歸，其特異性和敏感性均高于一般PCR技術。在病毒學、病理學
反向PCR
主要內容如下：·?????????RT-PCR·?????????Competitive and Quantative RT-PCR·?????????In Situ RT-PCR·?????????RL-PCR·?????????DNA Contamination·?????????RT-PCR
定量PCR
定量PCR可以用于：（1）以外參或內參為標準，通過對PCR終產物的分析或PCR過程的監測，進行PCR起始模板量的定量；（2）用外標法（熒光雜交探針保證特異性）通過監測PCR過程（監測擴增效率）達到精確定量起始模板數的目的，同時以內對照有效排除假陰性結果（擴增效率為零）。實驗方法原理定量PCR（即時聚
免疫PCR
免疫PCR ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 主要由兩個部分組成，第一部分的免疫反應類似于普通的酶聯免疫吸附試驗（ELISA）的測定過程；第二部分即通常的PCR檢測，抗原分子的量
定量PCR
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 定量PCR（即時聚合酶鏈鎖反應，Real-time Polymerase Chain Reaction，簡稱 Real-time PCR、即時PCR），又稱定量即時聚合酶鏈鎖反應（Quantitative real time
水浴PCR
PCR技術的誕生 1985年，美國科學家Kary Mullis發明了具有劃時代意義的PCR技術他因此在1993年獲得諾貝爾獎 PCR是什么？ PCR是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應組成一個周期,循環進行,使目的DNA得以迅速擴增,具有特異性強
降落PCR
降落PCR（touchdown PCR），一種PCR技術，主要用于PCR的條件的優化。實驗方法原理基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40 ～60℃，引物退火并結合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在Taq
免疫PCR
免疫PCR (Immuno PCR, Im-PCR) 是利用抗原抗體反應的特異性和PCR擴增反應的極高靈敏性而建立的一種微量抗原檢測技術。是用一段已知DNA分子標記抗體作為探針，用此探針與待測抗原反應，PCR擴增粘附在抗原抗體復合物上的這段DNA分子，電泳定性，根據特異性PCR產物的有無，來判斷待測
PCR技術
?PCR常見問題總匯?PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及，?④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模
熒光PCR/實時定量PCR技術應用簡介
一．熒光PCR原理1．熒光共振能量傳遞?(FRET)某熒光標記基團在激發光刺激下生成某波長的發射光，當另一屏蔽基團與其距離合適時，原發射光將會被屏蔽基團所吸收，并轉化為其他波長的發射光或熱能，稱之為FRET。2．熒光化學：熒光定量PCR所使用的熒光化學可分為兩種：熒光探針和熒光染料。PCR擴增時在加
An－Economic－PCR－Enhancer－for－GCRich－PCR－Templates
Since PCR is often problematic on GC-rich templates, we have evaluated different PCR enhancing additives and generated an Combinatorial Enhancer Solut
PEQLAB推出最新PCR技術與PCR儀
PEQLAB是一家專注于分子生物學領域試劑、儀器及耗材研發、生產及銷售的德國公司。旗下的全資子公司Clemens 成立于1989年，是德國三大PCR儀器制造商之一，擁有近20年的PCR儀研發及生產經驗。其新近研發的peqSTAR是集高通量，快速，多功能，觸摸屏設計于一體的高端PCR儀，引領21s
PCR產物的檢測PCRELISA法
在一個引物的5’端標記上生物素以便使其能與包被板上的親合素結合而固定PCR產物，而在另一引物的5’端標記FITC，用HRP標記的抗FITC抗體與之結合顯色，即可進行常規ELISA檢測。如設立標準對照，此技術還可用于定量分析。 【試劑與配置】 包被液：4.3mmol/L Na2HPO4,
實時熒光定量pcr儀的PCR優勢
樣品到達域值水平所經歷的循環數稱為Ct值（限制點的循環數）。域值應設定在使指數期的擴增效率為最大，這樣可以獲得最準確，可重復性的數據。如果同時擴增的還有標有相應濃度的標準品，線性回歸分析將產生一條標準曲線，可以用來計算未知樣品的濃度。