在低熔點瓊脂糖中連接質粒和目的DNA實驗
在低熔點瓊脂糖中連接質粒和目的DNA實驗 實驗方法原理 質粒克隆操作最費時間的步驟是用電泳的方法對預期大小的外源 DNA 片段和質粒 DNA 片段進行純化，在以下的方案中（取自Struhl 1985)，質粒和外源 DNA 的連接可在低熔點球脂糖存在的條件下完成。 實驗材料 限制性內切核酸酶 外源 DNA 片段 質粒 DNA 試劑、試劑盒 Tris-Cl MgCl2 DTT ATP T4 噬菌體 DNA 連接酶 儀器、耗材 低熔點瓊脂糖凝膠 恒溫板 ......閱讀全文
瓊脂糖凝膠電泳實驗——瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳可應用于：（1）DNA切膠回收；（2）DNA分離；（3）佐證DNA是否重組，質粒等是否切開以及其他分子生物學研究。實驗方法原理用瓊脂糖作支持介質的一種電泳方法。其分析原理與其他支持物電泳的最主要區別是：它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。瓊脂糖凝膠具有網絡結構，物質分子通過時會受到阻
β瓊脂糖酶的類型
海洋及其他環境中可以分離出能夠降解瓊脂的瓊脂糖酶.按照作用方式的不同，可將瓊脂糖酶分為α-瓊脂糖酶和β-瓊脂糖酶兩種類型。不同的瓊脂糖酶具有不同的生物學特性。瓊脂糖酶在海藻單細胞的制備、海藻原生質體的制備、瓊脂寡糖的制備、海藻多糖結構的研究及分子生物學研究方面具有重要的應用價值。
β瓊脂糖酶的來源
重組E. coli?菌株，此菌株的質粒上攜帶有β-瓊脂糖酶I的基因編碼。
瓊脂糖電泳protocol
試劑:? 試樣20μl??? DNA ladder??? 瓊脂糖?? TAE緩沖液?? 上樣緩沖液含0.5μg/ml EB的電泳緩沖液50×TAE貯存液:?? Tris??????????????????? 242g冰乙酸????????????????? 57.1ml0.5mol/LEDTA(pH
瓊脂糖凝膠配方
瓊脂糖凝膠是以瓊脂糖為支持介質制備的凝膠。瓊脂糖分為一般瓊脂糖和經化學修飾后熔點降低的低熔點瓊脂 糖，瓊脂糖的熔點在62?65°C之間，融化后在37°C下可維持液態數小時，30°C時凝固成膠。多用于對染色體DNA在凝膠內進行原位酶切及DNA片段回收。瓊脂糖凝膠 由于孔徑大常用于大分子蛋白質、DNA的
低熔點瓊脂糖凝膠中DNA的回收（用瓊脂糖酶消化）
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 可用瓊脂糖酶消化的方法從低熔點瓊脂糖凝膠中回收 DNA ( Bumeister and lehrach 1989)。在這種方法中，瓊脂糖酶使瓊脂糖多聚體水解為雙糖。這樣獲得的 DNA 再經酚抽提、乙醇沉淀進行純化。由于該
低熔點瓊脂糖凝膠中DNA的回收（用瓊脂糖酶消化）
可用瓊脂糖酶消化的方法從低熔點瓊脂糖凝膠中回收 DNA ( Bumeister and lehrach 1989)。在這種方法中，瓊脂糖酶使瓊脂糖多聚體水解為雙糖。這樣獲得的 DNA 再經酚抽提、乙醇沉淀進行純化。由于該法較為溫和，因此特別適用從脈沖場瓊脂糖凝膠中 回收高分子質量的 DNA，從恒強電
低熔點瓊脂糖凝膠中DNA的回收（用瓊脂糖酶消化）
實驗方法原理 可用瓊脂糖酶消化的方法從低熔點瓊脂糖凝膠中回收 DNA ( Bumeister and lehrach 1989)。在這種方法中，瓊脂糖酶使瓊脂糖多聚體水解為雙糖。這樣獲得的 DNA 再經酚抽提、乙醇沉淀進行純化。由于該法較為溫和，因此特別適用從脈沖場瓊脂糖凝膠中 回收高分子質
關于瓊脂糖酶的簡介
β-瓊脂糖酶切割瓊脂糖亞單位或未置換的新瓊脂乙糖（3,6-酐-α-L-吡喃型半乳糖基-1-3-D-半乳糖）生成新瓊脂-寡糖（1）。β-瓊脂糖酶 I 消化瓊脂糖，形成不能再成膠的碳水化合物分子，同時釋放所俘獲的 DNA。通常殘留的碳水化合物分子或 β-瓊脂糖酶 I 不會影響隨后的限制性內切酶消化、
什么是瓊脂糖凝膠？
瓊脂糖凝膠是以瓊脂糖為支持介質制備的凝膠。瓊脂糖分為一般瓊脂糖和經化學修飾后熔點降低的低熔點瓊脂 糖，瓊脂糖的熔點在62?65°C之間，融化后在37°C下可維持液態數小時，30°C時凝固成膠。多用于對染色體DNA在凝膠內進行原位酶切及DNA片段回收。瓊脂糖凝膠 由于孔徑大常用于大分子蛋白質、DN
瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳1.??????用封邊帶封住塑料托盤開放的兩邊或清潔干燥的玻璃板的邊緣形成一個模具，置一個水平支架上。2.??????配制足量的電泳緩沖液（1×TAE或0.5×TBE）用以灌滿電泳槽和配制凝膠。?配膠和灌滿電泳槽使用同一批緩沖液。3.??????根據欲分離DNA片段大小用電泳緩沖液配制
瓊脂糖凝膠電泳
實驗方法原理 瓊脂糖是 D- 和 L- 半乳糖殘基通過 α (1→3)和 β (1→4) 糖苷鍵交替構成的線狀聚合物。L- 半乳糖殘基在 3 和 6 位之間形成脫水連接。瓊脂糖鏈形成螺旋纖維，后者再聚合成半徑 20~30 nm 的超螺旋結構。實驗材料 DNA 樣品DNA 大小標準品試劑、試劑盒 瓊脂
DNA瓊脂糖核酸電泳
核酸電泳是進行核酸研究的重要手段，可以用于：（1）核酸探針；（2）核酸擴增；（3）序列分析等技術。實驗方法原理帶電荷的物質在電場中的趨向運動稱為電泳。核酸電泳是進行核酸研究的重要手段，是核酸探針、核酸擴增和序列分析等技術所不可或缺的組成部分。核酸電泳通常 在瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠中進行，濃度不同
瓊脂糖凝膠怎么配制
把瓊脂糖，即幾乎不含硫酸根的主要成分為多糖的瓊脂，溶于熱水，倒入玻璃杯中，冷卻制成的凝膠。融化后在37°C下可維持液態數小時，30°C時凝固成膠。即完成瓊脂糖凝膠的配置。制成的小顆粒用于凝膠過濾，適于用sephadex不能分級分離的大分子的凝膠過濾，若使用5%以下濃度的凝膠，也能夠分級分離細胞顆粒、
DNA瓊脂糖核酸電泳
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 帶電荷的物質在電場中的趨向運動稱為電泳。核酸電泳是進行核酸研究的重要手段，是核酸探針、核酸擴增和序列分析等技術所不可或缺的組成部分。核酸電泳通常 在瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠中進行，濃度不同的瓊脂糖和聚丙烯酰胺可形成分子篩網
DNA瓊脂糖核酸電泳
1. 用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈，放在制膠平板上，封閉模具邊緣，架好梳子；2. 根據欲分離 DNA 片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠：準確稱量瓊脂糖干粉，加入到配膠用的三角燒瓶內，定量加入電泳緩沖液（一般20~30 ml） ；3. 放入到微波爐內加熱熔化。冷卻片刻，加入一滴熒光染料
瓊脂糖凝膠電泳
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 瓊脂糖是 D- 和 L- 半乳糖殘基通過 α (1→3)和 β (1→4) 糖苷鍵交替構成的線狀聚合物。L- 半乳糖殘基在 3 和 6 位之間形成脫水連接。瓊脂糖鏈形成螺旋纖維，后者再聚合成半徑 20~30 nm 的超螺旋結構。
瓊脂糖核酸電泳實驗
瓊脂糖核酸電泳實驗1.用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈，放在制膠平板上，封閉模具邊緣，架?好梳子；2.根據欲分離?DNA?片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠：準確?稱量瓊脂糖干粉，加入到配膠用的三角燒瓶內，定量加入電泳緩沖液（一般20~30?ml）；3.放入到微波爐內加熱熔化。冷卻片刻，加
瓊脂糖的用途介紹
瓊脂、瓊脂糖因為有特殊的膠凝性質，尤其有顯著的穩固性、滯度和滯后性，并且易吸收水分，有特殊的穩定效應；已經廣泛使用于食用、醫藥、化工、紡織、國防等領域，據不完全統計，瓊脂、瓊脂糖的用途已有1000多種，被國際上稱為“新奇的東亞產品”。在食品工業中可用于生產：水晶軟糖、定型軟糖、水產品、肉類罐頭、果汁
瓊脂糖凝膠電泳
在凝膠電泳中，首先應用的是瓊脂電泳，它具有下列優點：（1）瓊脂含液體量 大，可達98-99%，近似自由電泳，但是樣品的擴散度比自由電泳小，對蛋白質的吸附 極微。（2）瓊脂作為支持體有均勻，區帶整齊，分辨率高，重復性好等優點。（3） 電泳速度快。（4）透明而不吸收紫外線，可以直接用紫外檢測儀作定量測定
瓊脂糖凝膠電泳
學習瓊脂糖凝膠電泳的基本原理； （2） 掌握使用水平式電泳儀的方法； （3）掌握核酸瓊脂糖凝膠電泳的基本操作 2實驗原理 瓊脂糖凝膠具有網絡結構，物質分子通過時會受到阻力，大分子物質在涌動時受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質和數量，而且還取決于分子大小
瓊脂糖凝膠怎么配制
把瓊脂糖，即幾乎不含硫酸根的主要成分為多糖的瓊脂，溶于熱水，倒入玻璃杯中，冷卻制成的凝膠。融化后在37°C下可維持液態數小時，30°C時凝固成膠。即完成瓊脂糖凝膠的配置。制成的小顆粒用于凝膠過濾，適于用sephadex不能分級分離的大分子的凝膠過濾，若使用5%以下濃度的凝膠，也能夠分級分離細胞顆粒、
瓊脂糖凝膠的特點
天然瓊脂（agar）是一種多聚糖，主要由瓊脂糖（agarose，約占80%）及瓊脂膠（agaropectin）組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質，不帶電荷，而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖，由于這些基團帶有電荷，在電場作用下能產生較強的電滲現象，加之硫酸根可與某些蛋白質作用而影響
瓊脂糖凝膠的簡介
瓊脂糖凝膠是以瓊脂糖為支持介質制備的凝膠。瓊脂糖分為一般瓊脂糖和經化學修飾后熔點降低的低熔點瓊脂 糖，瓊脂糖的熔點在62?65°C之間，融化后在37°C下可維持液態數小時，30°C時凝固成膠。多用于對染色體DNA在凝膠內進行原位酶切及DNA片段回收。瓊脂糖凝膠 由于孔徑大常用于大分子蛋白質、DN
瓊脂糖凝膠的制備
一、瓊脂糖凝膠的瓊脂糖凝膠的制備特點?天然瓊脂（agar）是一種多聚糖，主要由瓊脂糖（agarose，約占80％）及瓊脂膠（agaropectin）組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質，不帶電荷，而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖，由于這些基團帶有電荷，在電場作用下能產生較強的電滲現
瓊脂糖凝膠怎么配制
把瓊脂糖，即幾乎不含硫酸根的主要成分為多糖的瓊脂，溶于熱水，倒入玻璃杯中，冷卻制成的凝膠。融化后在37°C下可維持液態數小時，30°C時凝固成膠。即完成瓊脂糖凝膠的配置。制成的小顆粒用于凝膠過濾，適于用sephadex不能分級分離的大分子的凝膠過濾，若使用5%以下濃度的凝膠，也能夠分級分離細胞顆粒、
瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳可以用于：（1）檢測PCR結果；（2）分離不同大小的DNA條帶。實驗方法原理瓊脂糖是 D- 和 L- 半乳糖殘基通過 α (1→3)和 β (1→4) 糖苷鍵交替構成的線狀聚合物。L- 半乳糖殘基在 3 和 6 位之間形成脫水連接。瓊脂糖鏈形成螺旋纖維，后者再聚合成半徑 20~30 n
瓊脂糖凝膠的配制
稱量、溶膠、倒膠、拔梳。配置步驟如下：1、稱量，小膠板0.8%的膠需要瓊脂粉0.104gTBE13mL。2、熔膠，將所稱量的瓊脂粉與TBE在錐形瓶中混合，在微波爐內反復加熱2到3次至瓊脂粉溶解并無氣泡。3、倒膠，干凈的膠槽內擺好梳子，往膠內滴加1uL左右核酸染料，混勻，待冷卻至不燙手，輕輕倒入膠板內
瓊脂糖凝膠的制備
一、瓊脂糖凝膠的特點 天然瓊脂（agar）是一種多聚糖，主要由瓊脂糖（agarose，約占80％）及瓊脂膠（agaropectin）組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質，不帶電荷，而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖，由于這些基團帶有電荷，在電場作用下能產生較強的電滲現象，加之硫
瓊脂糖凝膠怎么配制
把瓊脂糖，即幾乎不含硫酸根的主要成分為多糖的瓊脂，溶于熱水，倒入玻璃杯中，冷卻制成的凝膠。融化后在37°C下可維持液態數小時，30°C時凝固成膠。即完成瓊脂糖凝膠的配置。制成的小顆粒用于凝膠過濾，適于用sephadex不能分級分離的大分子的凝膠過濾，若使用5%以下濃度的凝膠，也能夠分級分離細胞顆粒、