雙脫氧法DNA測序實驗
測序酶進行標記測序反應 α-標記核苷酸進行熱循環測序反應 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒 寡核苷酸引物 測序酶終止混合液 測序酶緩沖液 焦磷酸酶混合液 儀器、耗材 離心機 離心管 微量滴定板 實驗步驟 1. 對于......閱讀全文
雙脫氧法DNA測序實驗
測序酶進行標記測序反應 α-標記核苷酸進行熱循環測序反應 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA
雙脫氧法DNA測序實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 寡核苷酸引物測序酶終止混合液測序酶緩沖液焦磷酸酶混合液儀器、耗材 離心機離心管微量滴定板實驗步驟 1. ?對于每個單鏈模板：將下列試劑混合于0.5 ml 微量離心管中（1）0.5 pmol 單鏈DNA模板（2）0.5 pmol 引物（3）1 μl 10×測序酶緩沖液（4
化學發光雙脫氧DNA測序實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 生物素Tris·ClMgCl2DNA聚合酶dATPdCTPdGTPdTTP儀器、耗材 熱循環儀尼龍膜濾紙離心機實驗步驟 1. ?在微量離心管中混勻下列試劑，配制DNA摸板混合物（1）1 μg 單鏈DNA模板或1~3 μg 變性雙鏈DNA模板（2）0.5 pmol 生物素
化學發光雙脫氧DNA測序實驗
利用生物素標記引物 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
化學發光雙脫氧DNA測序實驗
標準的雙脫氧DNA測序可以很容易和很有效地使用非同位索標記的化學發光法進行檢測。在測序反應中，使用生物素標記的引物。用非同位素標記如生物素衍生化的引物，可用于為5’-末端標記引物而設的入測序反應的工作方案。實驗材料DNA試劑、試劑盒生物素Tris·ClMgCl2DNA聚合酶dATPdCTPdGTPd
DNA測序——雙脫氧鏈末端終止法
實驗方法原理DNA聚合酶催化的DNA鏈延伸是在3'-OH末端上進行的。由于2’，3’-雙脫氧三磷酸核苷酸(ddNTP)的3'-位脫氧而失去游離-OH，當它參入到DNA鏈后，3'-OH末端消失，使DNA鏈的延伸終止。?本實驗根據此原理，將待測DNA片段插入單鏈噬菌體M13載體，
雙脫氧法DNA測序實驗——測序酶進行標記測序反應
在基本的雙晩氧測序反應中，寡核苷酸引物退火于單鏈DNA摸板，在4種脫氧核糖核酸三磷酸存在時，引物為DNA聚合酶所延伸。反應混合物中也含有4種雙脫氧核糖核苷三磷酸的其中一種，當它摻入到DNA的生長鏈時，可終止鏈的延伸。實驗材料DNA試劑、試劑盒寡核苷酸引物測序酶終止混合液測序酶緩沖液焦磷酸酶混合液儀器
制備DNA測序模板實驗——雙脫氧測序的雙鏈質粒DNA的堿變性
實驗材料DNA試劑、試劑盒NaOHEDTA乙酸鈉乙醇儀器、耗材離心管離心機搖床實驗步驟1. ?加入約0.5 pmol 重組質粒DNA于0.5 ml 微量離心管中，如果體積大于20 μl 應以乙醇沉淀，重溶于20 μl 水。2. ?如果體積小于20 μl，用水補足20 μl。3. ?加入2 μl 2
用－Taq－DNA－聚合酶進行雙脫氧測序反應實驗
試劑、試劑盒 去離子蒸餾水ddNTPdNTP甲酰胺加樣緩沖液。酶和緩沖液。Taq 酶或類似的熱穩定 DNA 聚合酶Taq 酶稀釋緩沖液核酸和寡核苷酸寡核苷酸引物模板 DNA(100ug ul) 溶于 TE 中放射性化合物5'32P 標記的寡核苷酸引物儀器、耗材 微量離心管（0.5 ml) 或
用－Taq－DNA－聚合酶進行雙脫氧測序反應實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 去離子蒸餾水 ddNTP dNTP 甲酰胺加樣緩沖液。酶和緩沖液。Taq 酶或類似的熱穩定 DNA 聚合酶 Taq 酶稀釋緩沖液
用－Taq－DNA－聚合酶進行雙脫氧測序反應實驗
熱穩定 DNA 聚合酶除了在 PCR 反應中應用外，還可用來替代測序酶或 Klenow 片段進行雙脫氧鏈終止法測序。它在高溫下（70°C) 進行等溫鏈終止反應的能力可減少測序反應中由于模板 DNA 上引物假結合位點與引物退火錯配產生的問題，它還可用于富含二級結構模板的測序。本實驗源于分子克隆實驗指南
雙脫氧法DNA測序實驗——α標記核苷酸進行熱循環測序反應
實驗材料DNA試劑、試劑盒DNA測序緩沖液dATPDNA聚合酶儀器、耗材熱心換反應裝置離心機實驗步驟1. ?對應于毎個待測模板，分別以A、G、C、T?標記好4個微量離心管。2. ?分別往標好A、G、C、T?的管子中，加A、G、C、T?測序混合液各3 μl。?3. ?對于單鏈模板：在0.5 ml 微量
DNA(脫氧核糖核酸)測序
DNA測序是確定特定DNA片段的核苷酸順序的過程。到目前為止，大多數的DNA測序都是使用弗雷德里克·桑格開發的鏈終止方法進行的。這種技術利用修飾的核苷酸底物通過序列特異性終止DNA的合成反應。然而，新的測序技術，如焦磷酸測序正在獲得越來越多的測序市場份額。焦磷酸測序比桑格DNA測序產生了更多的基
用－T7－噬菌體－DNA－聚合酶進行雙脫氧測序反應
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 去離子蒸餾水 二硫蘇糖醇 dNTP 和 ddNTP 標記混合液和 ddNTP 延伸 終止混合液 甲酰胺上樣緩沖液 測序酶稀釋緩沖
雙脫氧鏈終止法測定DNA序列
[目的] 掌握雙脫氧鏈終止法測定DNA序列的原理與方法[原理]DNA聚合酶催化的DNA鏈延伸是在3’-OH末端上進行的。由于2’，3’-雙脫氧三磷酸核苷酸(ddNTP)的3’-位脫氧而失去游離-OH，當它參入到DNA鏈后，3’-OH末端消失，使DNA鏈的延伸終止。本實驗根據此原理，將待測DNA片段插
用－T7－噬菌體－DNA－聚合酶進行雙脫氧測序反應實驗
本方案參照了 Tabor 和 Richardson(1987a,1989b,1990) 的方法，采用單鏈 DNA 模板進行 DNA 測序（有關單鏈 M13 噬菌體和質粒 DNA 制備，請參見第 3 章的方案 4、8 和第 12 章的方案 1)。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕
用大腸桿菌－DNA－聚合酶－I－Klenow－片段進行雙脫氧測序實驗
當 Sanger 及其同事建立第一個 DNA 鏈終止延伸法時，只有一種合適的 DNA 聚合酶可用，即大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段。它具有在模板存在時聚合 dNTP 的活性，但缺乏完整聚合酶 I 的 5'-3'外切酶活性。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，
用－T7－噬菌體－DNA－聚合酶進行雙脫氧測序反應實驗
試劑、試劑盒?去離子蒸餾水二硫蘇糖醇dNTP 和 ddNTP標記混合液和 ddNTP 延伸 終止混合液甲酰胺上樣緩沖液測序酶稀釋緩沖液測序酶反應緩沖液含MgCl2測序酶酵母無機焦磷酸酶寡核苷酸引物模板 DNA放射性化合物儀器、耗材?離心機和轉頭微量離心管或微量滴定板實驗步驟?材料緩充液和溶液去離子蒸
循環測序：利用－PCR－和引物末端標記進行雙脫氧測序實驗
試劑、試劑盒?ddNTP 延伸 終止混合物酶及其緩沖液AmpliTaq CS 或其他無外切酶活性的 DNA 聚合酶循環測序緩沖液熱穩定的 DNA 聚合酶核酸和寡核苷酸模板 DNA儀器、耗材?小離心管 或者微孔板熱循環儀實驗步驟 材料溶液和緩沖液貯存液、緩沖液和試劑的配方請參照附錄 1。將貯存液稀釋到
循環測序：利用－PCR－和引物末端標記進行雙脫氧測序實驗
本方法成功的關鍵是模板 DNA 的純度。瓊脂糖、鹽和蛋白質的污染都會導致 DNA 聚合酶的提前終止或暫停，而 DNA 和 RNA 降解所產生的寡核苷酸將造成引物錯配。這些污染會嚴重導致假陽性條帶或空白出現。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試
雙脫氧ATP末端標記雙鏈DNA的3突出端
? ? ? ? ? ? 實驗材料 限制性內切核酸酶 小牛胸腺末端轉移酶 模板 DNA 試劑、試劑盒 乙酸銨
雙脫氧鏈終止法測序用變性模板的制備實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 乙酸銨 氯仿 異戊醇 DMSO 乙醇 NaOH酚 測序反應緩沖液 瓊脂糖凝膠
雙脫氧鏈終止法測序用變性模板的制備實驗
試劑、試劑盒 乙酸銨氯仿異戊醇DMSO乙醇NaOH酚測序反應緩沖液瓊脂糖凝膠寡核苷酸引物閉環雙鏈質粒 DNA儀器、耗材 干冰-乙醇浴65°C 水浴實驗步驟 材料緩沖液和溶液試劑、緩沖液、儲液的組成參見附錄 1, 儲液使用前稀釋到適當濃度。乙酸銨（5mol/L, 非緩沖，pH~7.4)氯仿：異戊醇（2
雙脫氧鏈終止法測序用變性模板的制備實驗
雙脫氧鏈終止法變性模板 分子克隆實驗指南（第三版）下冊 第12章 方案2下面通過堿變性質粒 DNA 的方法應與方案 3 聯合使用，因在此過程中采用測序酶催化雙脫氧測序反應。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒乙酸銨氯仿異戊醇DMSO
如何看脫氧核糖核酸（DNA）測序報告單
脫氧核糖核酸,就是DNA.核酸分脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）脫氧核糖,是五碳糖的一種,脫氧核糖是脫氧核苷酸的組成成分.脫氧核苷酸是由一分子脫氧核糖,一分子含氮堿基,一分子磷酸組成.脫氧核苷酸是脫氧核糖核酸的基本單位,脫氧核糖核酸就是由許多個脫氧核苷酸縮合而成.脫氧核糖核酸（DNA），就
大腸桿菌－DNA－－I－Klenow－片段及單鏈－DNA－模板進行雙脫氧實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 dATP 去離子蒸餾水 EDTA 延伸 終止混合液 和示蹤混合液 甲酰胺上樣緩沖液 Tris-Cl
DNA測序
實驗方法原理 ABI ?PRISM 310型基因分析儀(即DNA測序儀)，采用毛細管電泳技術取代傳統的聚丙烯酰胺平板電泳，應用該公司ZL的四色熒光染料標記的ddNTP(標記終止物法)，因此通過單引物PCR測序反應，生成的PCR產物則是相差1個堿基的3'末端為4種不同熒光染料的單鏈DN
DNA測序
? ? ? ? ? ? ? ? 自動測序法 雙脫氧鏈末端終止法 非同位素銀染 鳥槍法 Maxam-Gilbert化學修飾法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法
DNA測序
DNA測序（主要內容如下）·?????????Sequencing Gel Preparation·?????????Preparation of Templates?·?????????DNA Sequencing by the Dideoxy Method·?????????DNA Sequen
DNA序列測定技術（Sanger雙脫氧鏈終止法與Maxam－Gilbert－...
選擇隨機定向測定策略的影響因素（1）計算設備 任何大規模的測序計劃將在很大程度上依賴計算機程序對原始序列資料進行分類、整理和排列（Staden，1986）。在權衡隨機法的利與弊之時，必須將與適當的計算機設備進行聯機的問題放到壓倒一切的位置上來考慮。如果這些設備尚無從適當的計算機設備進行聯機的問題