等電聚焦電泳色譜儀pH梯度不穩定的原因
等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同，在一個穩定的、連續的、線性的pH梯度中進行分離。等電聚焦電泳技術在不斷進步，卻一直存在著pH值梯度不穩定的現象，即存在著pH梯度的陰極和陽極漂移現象。陰極漂移是指在等電聚焦電泳中pH梯度的堿性端逐漸消失的過程。反之，如果其酸性端逐漸消失則稱為陽極漂移。為了闡明等電聚焦電泳中pH值梯度不穩定的機制，提出了各種假說：一、載體兩性電解質向陰、陽極的等速電泳遷移。二、在陰極因CO2的吸附而引起陰極液組分和濃度的變化。三、在pH梯度的中性區域生成一段純水，水的等電聚焦導致水在電泳柱中的聚集并向兩端反流。四、不同等電點的載體兩性電解質的選擇性缺陷而引起不穩定。五、載體兩性電解質帶電配體的結合或分離而引起不穩定。六、載體兩性電解質相互反應的存在而引起不穩定。七、相對遷移的氫離子和氫氧根離子濃度的不平衡。 ......閱讀全文
等電聚焦電泳色譜儀pH梯度不穩定的原因
等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同，在一個穩定的、連續的、線性的pH梯度中進行分離。等電聚焦電泳技術在不斷進步，卻一直存在著pH值梯度不穩定的現象，即存在著pH梯度的陰極和陽極漂移現象。陰極漂移是指在等電聚焦電泳中pH梯度的堿性端逐漸消失的過程。反之，如果其酸性端逐漸消失則
等電聚焦電泳色譜儀pH梯度的類型
等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同，在一個穩定的、連續的和線性的pH梯度中進行分離，具有靈敏度高、分辨率高和重復性好等特點，特別適合大批量純度檢測和真實性鑒定以及遺傳多樣性等群體生物學領域的研究。pH梯度按形成方式可分為載體兩性電解質pH梯度和固相pH梯度等。一、載體兩性電
等電聚焦電泳色譜儀pH梯度的形成過程
等電聚焦電泳色譜儀是在電泳介質中放入載體兩性電解質，當通以直流電時，載體兩性電解質形成一個由陽極到陰極逐步增加的pH梯度，不同的蛋白質移動到其相當的等電點位置上，聚焦于一個狹窄區帶中而達到分離。載體兩性電解質是一系列脂肪族多氨基多羧酸同系物和異構體組成的混合物，具有很多既不相同又十分接近的相互連接的
固相pH梯度等電聚焦電泳色譜儀概述
固相pH梯度等電聚焦電泳色譜儀比載體兩性電解質pH梯度等電聚焦電泳色譜儀具有更高的分辨率，更大的上樣量，其分辨率可達0.001pH，是目前分辨率zui高的電泳儀之一。一、工作原理：蛋白質分子按照自己的pI位置在固相pH梯度中遷移，達到自己的等電點時停止遷移。二、固相pH梯度的介質：固相pH梯度（IP
等電聚焦電泳色譜儀固相pH梯度的形成
等電聚焦電泳色譜儀固相pH梯度的介質是Immobilines試劑，不是兩性分子，在凝膠聚合時便形成pH梯度，不隨環境電場條件的改變而改變。Immobilines試劑的分子式為CH2 = CH－CO－NH－R，其中R代表羧基或第三氨基，每個分子都有一個單一的酸性或堿性緩沖基團與丙烯酰胺單連。分子一端的
等電聚焦電泳色譜儀pH梯度的建立方式
等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同，在一個穩定的、連續的和線性的pH梯度中進行分離，等電聚焦電泳的關鍵是pH梯度的建立。 01 人工建立pH梯度： 在電場下利用不同pH值緩沖液相互擴散，在混合區間形成pH梯度。此pH梯度易受緩沖液離子的遷移和擴散而變動，重復性差
等電聚焦電泳色譜儀pH梯度的建立方式
等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同，在一個穩定的、連續的和線性的pH梯度中進行分離，等電聚焦電泳的關鍵是pH梯度的建立。 一、人工建立pH梯度： 在電場下利用不同pH值緩沖液相互擴散，在混合區間形成pH梯度。此pH梯度易受緩沖液離子的遷移和擴散而變動，重復性差，已不
等電聚焦電泳色譜儀pH梯度的建立方式
等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同，在一個穩定的、連續的和線性的pH梯度中進行分離，等電聚焦電泳的關鍵是pH梯度的建立。一、人工建立pH梯度：在電場下利用不同pH值緩沖液相互擴散，在混合區間形成pH梯度。此pH梯度易受緩沖液離子的遷移和擴散而變動，重復性差，已不被采用。二、
固相pH梯度等電聚焦實驗——等電聚焦
試劑、試劑盒丙烯酰胺單體貯液過硫酸銨貯液實驗步驟打開循環水浴，設置冷卻溫度，一般為 10℃。將制好的固相 pH 梯度凝膠鋪在冷卻板上，注意正負極。其間涂以液體石蠟或煤油，避免氣泡陷入，以保證膠板和冷卻板之間的良好接觸。用合適的電極溶液（參見表 7.7) 潤濕濾紙電極條，分別放置凝膠的酸、堿側。有的儀
等電聚焦電泳的梯度組成
pH梯度的組成方式有二種，一種是人工pH梯度，由于其不穩定，重復性差，現已不再使用。另一種是天然pH梯度。天然pH梯度的建立是在水平板或電泳管正負極間引入等電點彼此接近的一系列兩性電解質的混合物，在正極端引入酸液，如硫酸、磷酸或醋酸等，在負極端引入堿液，如氫氧化鈉、氨水等。電泳開始前兩性電解質的
固相pH梯度等電聚焦實驗——pH－梯度的測定
試劑、試劑盒丙烯酰胺單體貯液過硫酸銨貯液實驗步驟由于固相 pH 梯度凝膠的導電性很低，不可能用表面電極測定凝膠表面的 pH。但對于寬范圍的固相 pH 梯度可以用等電點蛋白標準來測定，方法同載體兩性電解質等電聚焦。但目前還沒有合適的市售蛋白標準可用于測定窄范圍的固相 pH 梯度。灌制凝膠時，pH 梯度
聚丙烯酰胺等電聚焦電泳色譜儀pH梯度的形成
聚丙烯酰胺等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質具有不同等電點的特性，以聚丙烯酰胺為電泳支持物，在其中加入載體兩性電解質（一種含有各種連續pI的小分子混合物）的電泳分離技術。載體兩性電解質是一系列多氨基多羧基的混合物，pI = 3～11。在制備聚丙烯酰胺凝膠時，將其混溶其中。載體兩性電解質在溶液中的行為可從
固相pH梯度等電聚焦實驗
實驗方法原理 固相 pH 梯度凝膠是由固相 pH 梯度介質（丙烯酰胺衍生物）共價結合到聚丙烯酰胺凝膠中并形成 pH 梯度，所以制膠過程比載體兩性電解質凝膠復雜。灌膠的方法與常規聚丙烯酰胺梯度凝膠和 SDS 梯度凝膠相似。高質量的凝膠介質和固相 pH 梯度介質，聚合過程以及漂洗對固相 pH
固相pH梯度等電聚焦實驗
制膠 等電聚焦 pH 梯度的測定 檢測 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 固相 pH 梯度凝膠是由固相 pH 梯度介質（丙烯酰胺衍生物）共價結合到聚
固相pH梯度等電聚焦實驗——檢測
試劑、試劑盒丙烯酰胺單體貯液過硫酸銨貯液實驗步驟1. 各種染色方法在所述的染色方法，包括各種考馬斯亮藍方法、銀染色、熒光探針法、放射自顯影、免疫固定等均適用于固相 pH 梯度等電聚焦后的檢測。作者實驗室進行轉鐵蛋白的考馬斯亮藍 R-250 染色時，脫色困難。用 G-250 染色時，脫色同樣困難。為了
固相pH梯度等電聚焦實驗——制膠
實驗方法原理固相 pH 梯度凝膠是由固相 pH 梯度介質（丙烯酰胺衍生物）共價結合到聚丙烯酰胺凝膠中并形成 pH 梯度，所以制膠過程比載體兩性電解質凝膠復雜。灌膠的方法與常規聚丙烯酰胺梯度凝膠和 SDS 梯度凝膠相似。高質量的凝膠介質和固相 pH 梯度介質，聚合過程以及漂洗對固相 pH 梯度凝膠是非
載體兩性電解質pH梯度等電聚焦實驗—薄層分析等電聚焦
實驗方法原理利用蛋白質分子或其他兩性分子的等電點的不同，在一個穩定的、連續的、線性 pH 梯度中進行蛋白質的分離和分析。所以利用等電聚焦技術分析的對象只限于蛋白質和兩性分子。分析的條件是凝膠中有穩定的、連續的和線性的 pH 梯度。試劑、試劑盒丙烯酰胺單體貯液過硫酸銨貯液儀器、耗材注射器水浴實驗步驟一
一維固相pH梯度等電聚焦－(IEF－with－IPG)——IPG－IEF－pH－梯度的選擇
實驗材料膠條實驗步驟對一新樣品，常最先使用寬范圍、線性PH3.5-10梯度 但對大多數樣品，這樣做會喪失 pH4-7 區域的分辦率，許多蛋白質的 pI 值在該區域。利用非線性 pH3.5-10 IPG IEF 膠在一定程度緩解這個問題。 PH3.5-10 非線性膠條在 pH4-7 區域的梯度要比 p
一維固相－pH－梯度等電聚焦－(IEF－with－IPG)
實驗方法原理 IPG IEF 膠用 Immobilines制備。 lmmobilines 是擁有 結構的8 種丙烯酰胺衍生物系列，其中 R 包含羧基或叔氨基團，它們構成了分布在 pH3-10 不同值的緩沖體系。根據公布的配方估算后，將適宜的 IPG 試劑添加至混合物中用于凝膠聚合，在聚合
一維固相－pH－梯度等電聚焦－(IEF－with－IPG)
基本方案 膠條處理 加樣 IPG IEF pH 梯度的選擇 聚焦時間的優化 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 IPG
等電聚焦電泳色譜儀的特點
等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同，在一個穩定、連續和線性的pH梯度中進行分離。等電聚焦是在電泳介質中放入載體兩性電解質，當通以直流電時，載體兩性電解質形成一個由陽極到陰極逐步增加的pH梯度，不同的蛋白質移動到其相當的等電點位置上，聚焦于一個狹窄區帶中的過程。一、進行等電聚
載體兩性電解質pH梯度等電聚焦電泳儀特點
載體兩性電解質pH梯度等電聚焦電泳儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同，在一個穩定的、連續的、線性或非線性的pH梯度中進行分離，具有以下特點：一、優點：1、分辨率高，區帶清晰、窄。2、加樣部位自由，重現性好。3、可測定蛋白和多肽的等電點。二、缺點：1、載體兩性電解質合成過程復雜，影響蛋白質點
載體兩性電解質pH梯度等電聚焦電泳儀介紹
載體兩性電解質pH梯度等電聚焦電泳儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同，在一個穩定的、連續的、線性或非線性的pH梯度中進行分離。一、載體兩性電解質的概念：載體兩性電解質是兩性的，使它們在電泳柱中能達到一個平衡位置。載體兩性電解質可以作為載體。兩性電解質不能用于等電聚焦，只有載體兩性電解質，即
一維固相－pH－梯度等電聚焦－(IEF－with－IPG)——聚焦時間的優化
實驗材料蛋白樣品實驗步驟理論上講，要獲得最好的圖譜質量和重復性所需最佳時間是 IEF 分離達到穩定態所需的時間 。 若聚焦時間太短，會導致水平和垂直條紋，但要避免過度聚焦 。 雖然與經典 O'Farrell 法相比，不會導致蛋白質向陰極的遷移（陰極漂移），但卻會因為活性水轉運而導致過多水在
等電聚焦電泳色譜儀的檢測方法
等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同，在一個穩定、連續和線性的pH梯度中進行分離，檢測方法有染色法、掃描法和其它檢測方法。一、染色法：1、考馬斯亮藍染色法。2、銀染色法。3、同工酶染色法。4、專一蛋白染色法。5、熒光標記以及免疫法。二、掃描法：激光光源強度大，單色性好，掃描I
等電點聚焦電泳
中文名稱等電點聚焦電泳英文名稱isoelectric focusing electrophoresis定 義一種根據蛋白質等電點不同而將蛋白質在凝膠介質中分離的電泳方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
載體兩性電解質pH梯度等電聚焦實驗
實驗方法原理?利用蛋白質分子或其他兩性分子的等電點的不同，在一個穩定的、連續的、線性 pH 梯度中進行蛋白質的分離和分析。所以利用等電聚焦技術分析的對象只限于蛋白質和兩性分子。分析的條件是凝膠中有穩定的、連續的和線性的 pH 梯度。試劑、試劑盒?丙烯酰胺單體貯液過硫酸銨貯液儀器、耗材?注射器水浴實驗
一維固相－pH－梯度等電聚焦－(IEF－with－IPG)——加樣
實驗材料蛋白樣品實驗步驟樣品通常是加在放置在?IPG?膠陽極區或陰極區的硅橡膠框內或特殊加樣杯內（圖3. lg, h),?對不同類型的樣品，最好的加樣位置由經驗值確定。最初電壓衛限制在150V?、?30min,?從而使盡隊多的樣品進入加樣杯，然后逐漸增加電壓至3500 V?。運行時間決定了幾個不同的
制備電泳實驗——等電聚焦制備電泳
實驗方法原理等電聚焦制備電泳是一種非變性制備技術。由于等電聚焦電泳技術的特點，因而是一種理想的制備方法。試劑、試劑盒電極液兩性電解質Ultrodex實驗步驟一、液體介質垂直柱狀蔗糖密度梯度等電聚焦是原瑞典 LKB 公司早期用于制備和分析目的的等電聚焦方法。載體兩性電解質在蔗糖密度梯度柱中形成 pH
等電聚焦電泳的技術特點
是將兩性電解質加入盛有pH梯度緩沖液的電泳槽中，當其處在低于其本身等電點的環境中則帶正電荷，向負極移動；若其處在高于其本身等電點的環境中，則帶負電向正極移動。當泳動到其自身特有的等電點時，其凈電荷為零，泳動速度下降到零，具有不同等電點的物質最后聚焦在各自等電點位置，形成一個個清晰的區帶，分辨率極高。