克隆技術研究現狀
一、克隆的早期研究 克隆一詞是英文單詞clone的音譯，作為名詞，c1one通常被意譯為無性繁殖系。同一克隆內所有成員的遺傳構成是完全相同的，例外僅見于有突變發生時。自然界早已存在天然植物、動物和微生物的克隆，例如：同卵雙胞胎實際上就是一種克隆。然而，天然的哺乳動物克隆的發生率極低，成員數目太少（一般為兩個），且缺乏目的性，所以很少能夠被用來為人類造福，因此，人們開始探索用人工的方法來生產高等動物克隆。這樣，克隆一詞就開始被用作動詞，指人工培育克隆動物這一動作。 目前，生產哺乳動物克隆的方法主要有胚胎分割和細胞核移植兩種。克隆羊“多莉”，以及其后各國科學家培育的各種克隆動物，采用的都是細胞核移植技術。所謂細胞核移植，是指將不同發育時期的胚胎或成體動物的細胞核，經顯微手術和細胞融合方法移植到去核卵母細胞中，重新組成胚胎并使之發育成熟的過程。與胚胎分割技術不同，細胞核移植技......閱讀全文
單克隆抗體的克隆化方法
實驗原理經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。克隆化的陽性雜交瘤細
單克隆抗體技術：克隆化(有限稀釋法、軟瓊脂克隆化、...
經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。?克隆化的陽性雜交瘤細胞，經
白塞病診治現狀
白塞病(BD)是一種全身性、慢性、血管炎性疾病。以口腔潰瘍、生殖器潰瘍、眼炎及皮膚損害為突出表現，又稱為口-眼-生殖器綜合征(白塞綜合征、貝赫切特綜合征)。常累及神經系統、消化道、肺、腎以及附睪等器官，病情呈反復發作和緩解的交替過程。 ? 【診斷要點】1.病史：16-40歲的青壯
凝膠色譜現狀
由于歷史原因，凝膠色譜的理論發展、實驗技術和應用開發主要在生物化學和高分子化學領域內，對這項技術，不同工作者采用了不同的命名，從而造成了文獻中命名方面的混亂。文獻中用過的名稱有：凝膠過濾( Gel Filtration)、分子篩過濾(Molecular Sieve Filtration)、分子篩色譜
無損檢測現狀和無損檢測國內發展現狀
無損檢測行業在我國已有幾十年的歷史，隨著社會經濟的發展，無損檢測行業已經涉及到了人們生活當中的各個方面。曾有專家表示，無損檢測是一個朝陽行業，這個行業的發展空間很大，尤其是中國發展前景非常廣闊。 國產無損檢測設備器材大致上可以分為26大類，具體產品型號和品種則超過千種。大體上已經涵蓋了目前國內
關于單克隆抗體的克隆方法介紹
1．配2.5%的瓊脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。 2．將117ml完全DMEM液和3ml10倍濃度的DMEM液混合，置45℃水浴預熱。 3．將瓊脂糖與DMEM液混合，即為含0.5%瓊脂糖的完全DMEM液，并加75×108脾細胞。 4．每塊平皿加10ml，于室溫中凝固。 5．
單克隆抗體(monoclonal－antibody)克隆化技術
經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。?克隆化的陽性雜交瘤細胞，經
克隆經驗—幫助新手快速做出克隆3
酶切直接在回收PCR產物的試管中配置酶切體系：PCR產物酶切－制作插入片斷公用Buffer 6μL酶 I 3μL酶 II 3μLPCR產物 ——雙蒸水 48μL合計 60μL要將PCR產物接入的質粒載體A，取A質粒3μL進行酶切。A質粒酶切－制作載體片斷公用Buffer 3μL酶 I 1μL酶 II
克隆心得：幫助新手快速做出克隆1
本方法的核心部分是醫科院基礎所的生化脂蛋白組的吳剛老師所創，我在其基礎上進行了一些改動，主要是DNA回收上采取了更簡單的方法。（本方法最適用于雙酶切制作片斷并進行克隆的情況。對于分步酶切制作片斷，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。）一、片斷平移的克隆（也適用于多片斷連接）簡介：將用作載
克隆心得：幫助新手快速做出克隆2
酶切直接在回收PCR產物的試管中配置酶切體系：PCR產物酶切－制作插入片斷公用Buffer 6μl酶 I 3μl酶 II 3μlPCR產物 ——雙蒸水 48μl合計 60μl要將PCR產物接入的質粒載體A，取A質粒3μl進行酶切。A質粒酶切－制作載體片斷公用Buffer 3μl酶 I 1μl酶 II
PCR擴增產物的克隆——TA克隆法
實驗方法原理TA克隆 系統由Invitrogen公司（San Diego，CA）發展而來的商業性試劑盒，它用于PCR 產物的克隆 和測序。其原理是利用Taq酶能夠在PCR 產物的3'末端加上一個非模板依賴的A，而T載體是一種帶有3'T突出端的載體，在連接酶作用下，可以快速地、一步到位
克隆經驗:幫助新手快速做出克隆2
（提示 關于酶量的問題。通常的內切酶效價在10U/μL左右，3μL內切酶相當于30U，足夠切10μL的質粒。因為通常小提質粒的濃度在200－600ng /μL，一般濃度達不到1μg/μL。根據1U酶切1μg質粒的原則，這一酶量是足夠的。）1%瓊脂糖回收膠回收（碎膠、酚氯仿抽提法）1. 酶切產物加入1
克隆經驗—幫助新手快速做出克隆4
9. 在一新1.5mL 離心管中加入 900μL 預冷 無水乙醇、20μL 3M的醋酸鈉。將步驟8的上清小心加入本步驟離心管中。顛倒數次混勻。12000rpm 4℃ 離心15分鐘。（提示 吸取步驟8中的上清時，千萬不要將有機相吸入，寧可放棄一些上清，否則影響后面的連接反應。 另外，本方法
克隆經驗—幫助新手快速做出克隆5
1. 連接產物10μL、5×KCM溶液10μL、雙蒸水30μL，（共50μL）混勻，置冰上。2. 從-70℃冰箱中取 1支感受態細胞，置冰上。融化后立即取50μL，加入步驟1中的混合液中，輕輕吹打數次混勻（不可用力過大，不可渦旋）， 立即置冰上。3. 冰上放置20 分鐘。4. 室溫放置10分鐘。5.
克隆經驗:幫助新手快速做出克隆1
本方法的核心部分是醫科院基礎所的生化脂蛋白組的吳剛老師所創，我在其基礎上進行了一些改動，主要是DNA回收上采取了更簡單的方法。（本方法最適用于雙酶切制作片斷并進行克隆 的情況。對于分步酶切制作片斷，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。）一、片斷平移的克隆 （也適用于多片斷連接）簡介：將用
克隆的種類
1.由同一個祖先細胞分裂繁殖而形成的純細胞系（每個基因彼此相同）。2.先將含有遺傳物質的供體細胞的核移植到去除了細胞核的受體卵細胞中，利用微電流刺激等使兩者融合為一體。（與提供細胞者基因相同）
核糖克隆實驗
試劑、試劑盒 ATEN 緩沖液DNA 緩沖液（TEN)KLA 緩沖液T5E5Dpn IKlentaq LA 蛋白酶 K蛋白酶K儲存緩沖液 RNA 酶 A設計好的載體已經進行 5'端生物素-TEG 修飾并且 3'端核糖胞嘧啶或者核糖尿嘧啶修飾過的引物卡那霉素（Sigma)四
核糖克隆實驗
試劑、試劑盒ATEN 緩沖液DNA 緩沖液（TEN)KLA 緩沖液T5E5Dpn IKlentaq LA蛋白酶 K蛋白酶K儲存緩沖液RNA 酶 A設計好的載體已經進行 5'端生物素-TEG 修飾并且 3'端核糖胞嘧啶或者核糖尿嘧啶修飾過的引物卡那霉素（Sigma)四環素Ticarci
制備克隆實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 ATP -巰基乙醇 IPTG X-gal 平末端限制酶 連接緩沖液 T4DNA 連接酶 平末
核糖克隆實驗
—、材料1. 緩沖液、溶液和試劑.10XATEN 緩沖液0.5mol/LTris-HCl,pH7.92.5mol/L 氯化鈉0.25mol/L Na4EDTA,pH7.9甜菜堿（SigmaB-2629)藍色葡聚糖（bluedextran)(SigmaD
PCR產物克隆
PCR克隆主要有TA克隆法, 限制性酶切與連接法，雜交法和近期開發出來的特異性重組法等。但因為TA克隆法操作最簡單，快速和高效的原因，成為Taq聚合酶PCR產物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen發明，并擁有全球TA Cloning商標的ZL權。TA克隆方法（Original TA Cl
制備克隆實驗
試劑、試劑盒ATP-巰基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶連接緩沖液T4DNA 連接酶平末端插入物克隆載體培養基儀器、耗材FALCON 2059 多聚丙烯試管37°C 恒溫箱水浴箱實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑ATP(10 mmol/L)β-巰基乙醇（可選擇）IPTG(100 mmol/L
核糖克隆實驗
這個方案只是用 RNA 酶處理 PCR 產物的一種方法。有很多可選擇和有效的途徑來純化 PCR 產物以除去引物，接著用酶處理 PCR 產物，然后再除去酶。值得注意的是用 PCR儀設置溫浴程序是很方便的。可以在加熱步驟完成后選擇加上“冷卻”步驟，即在冷模塊中放置 5 min 甚至過夜。本實驗來源于 P
細胞克隆染色
做克隆形成率的染色非常非常簡單,因為克隆產生的細胞集落非常清晰,大的甚至肉眼可辯.對染色方法只有一個基本要求,染細胞不染培養容器就可以了.非常多的染料可以用作此用途.像是一樓所說的結晶紫也可以.
定位候選克隆
當前，人類基因組研究的重心正在由“結構”向“功能”轉移，一個以基因組功能研究為主要內容的所謂“后基因組時代”(post-genomics)，也即功能基因組(functional genomics)時代，即將到來。如何獲取基因的功能信息，即與人類重大疾病和重要生理功能相關的基因信息，就擺在了我們面前。
miRNA－－克隆實驗
實驗方法原理 在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起著非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 維持著基因的表達，還有一部分則起著調控基因表達的作用。實驗材料 寡核
靶向克隆法
靶向克隆法是一種新的基因克隆方法，該克隆方法的特點是：在基因克隆過程中不使用已有的DNA Ligase，而是使用新開發的靶向克隆酶。靶向克隆酶能夠使末端序列相同的雙鏈DNA(14bp-18bp)同源重組，從而達到克隆基因的目的。LP Recco酶，中文名：靶向克隆酶，無需傳統基因克隆所需要的限制性內
miRNA克隆實驗
在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起著非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 維持著基因的表達，還有一部分則起著調控基因表達的作用。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主
制備克隆實驗
試劑、試劑盒?ATP-巰基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶連接緩沖液T4DNA 連接酶平末端插入物克隆載體培養基儀器、耗材?FALCON 2059 多聚丙烯試管37°C 恒溫箱 水浴箱實驗步驟?一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑ATP(10 mmol/L)β-巰基乙醇（可選擇）IPTG(100 mm
什么是克隆？
“克隆”這個詞聽上去并不陌生，在我們的日常生活中也會經常用到它。比如，每當春暖花開時，有人喜歡進行植物扦插的試驗。從一棵植株上剪下的植條，通過扦插而形成許多遺傳物質的組成完全相同的植株就是克隆；又比如有一種樣子像蘋果，但滋味像梨的水果——梨蘋果就是采用樹嫁接培育而成的。嫁接形成的產物也是克隆；還有將
