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實驗方法原理 當菌體在NaOH和 SDS溶液中裂解時，蛋白質與DNA發生變性，當加入中和液后，質粒DNA分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中；蛋白質與染色體DNA不變性而呈絮狀，離心時可沉淀下來。堿裂解法是最常用的小量制備質粒DNA的方法。實驗材料 細菌克隆試劑、試劑盒 LB培養基抗生素葡萄糖TrisEDTA NaOHSDS乙酸鉀乙醇水儀器、耗材 離心機試管離心管制冰機實驗步驟 1. 接種一個單菌落于5 ml無菌LB培養液中，在37°C培養至飽和狀態（過夜）。2. 取1.5 ml培養液以最大轉速離心20 s。棄上清。3. 沉淀用100 μl GTE溶液徹底重懸并于室溫靜置5 min。4. 加人200 μl NaOH/SDS溶液，用指頭敲擊管壁混勻，于冰上放置5 min。5. 加人150 μl乙酸鉀溶液，在渦旋混合器上振蕩2 s混勻，于冰上放置5 min。6. ......閱讀全文
第一章質粒DNA 的分離、純化和鑒定 第二章DNA 酶切及凝膠電泳 第三章大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重組質粒的連接、轉化及篩選 第六章基因組DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技術 第八章聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆 第九章分
實驗概要本實驗介紹了氯化銫-溴化乙錠梯度平衡離心法(即連續梯度法)純化閉環DNA的原理及操作步驟等。實驗原理用含氯化銫和溴化乙錠的懸浮密度梯度離心法分離質粒和染色體 DNA 的方法，取決于線性 DNA 和閉環 DNA 結合的溴化乙錠的量的差異。許多年來，純化大量質粒 DNA 的首選方法是
導論質粒DNA的小量制備質粒ＤＮＡ的大量制備質粒ＤＮＡ的純化一、導論 已經提出過許多方法用于從細菌中提純質粒DNA， 這些方法都含有以下3個步驟：細菌培養物的生長。細菌的收獲和裂解質粒DNA的純化。（一）細菌培養物的生長 從瓊脂平板上挑取一個單菌落，接種到培養物中(有含有行當抗生素
現在較常用的質粒提取方法有三種:堿裂解法、煮沸法和去污劑裂解法，前兩種方法較為劇烈，適用于較小的質粒（＜15Kb），而去污劑裂解法則比較溫合，一般用于分子量較大的質粒（＞15Kb）。 堿裂解法是一種廣泛使用的制備質粒DNA的方法。其原理為：染色體DNA遠遠大于質粒DNA，染色體DNA為線狀
本方案和方案 4 是以變性質粒 DNA 為模板，使用兩條寡核苷酸和高保真聚合酶引導 DNA 合成。本方案中，經多輪熱循環全長雙鏈質粒 DNA 將以線性形式擴增，產生一種 DNA 雙鏈上帶交錯缺口的突變質粒（Hemsleyetal.1989)。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J
本方法中，兩條寡核苷酸引物雜交到變性重組質粒 DNA 雙鏈的同一條鏈上。一條引物（誘變引物）攜帶一個擬引進靶 DNA 序列的突變，第二條引物攜帶一個能破壞質粒單一限制酶位點的突變。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料帶 mutS 表型（
用含氯化銫和溴化乙錠的懸浮密度梯度離心法分離質粒和染色體 DNA 的方法，取決于與線狀 DNA 和閉環 DNA 結合的溴化乙錠的量的差異。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。連續梯度法實驗方法原理用含氯化銫和溴化乙錠的懸浮密度梯度離心法分離質粒和染色體 DNA 的方法，取決于與線狀 DN
實驗材料 帶 mutS 表型（例如 BMH71-18) 的轉化用大腸桿菌感受態 帶 mut+表型的轉化用大腸桿菌感受態
實驗材料 帶 hsdR17 基因型的感受態大腸桿菌菌株 試劑、試劑盒 AT
實驗材料 帶 mutS 表型（例如BMH71-18) 的轉化用大腸桿菌感受態帶 mut+表型的轉化用大腸桿菌感受態試劑、試劑盒 退火緩沖液貯存液合成緩沖液噬菌體 T4DNA 連接酶噬菌體 T4DNA 聚合酶或測序酶單一位點的限制性內切核酸酶瓊脂糖凝膠誘變引物選擇引物質粒 DNA儀器、耗材 70°C
連續梯度法 不連續梯度法 實驗方法原理 用含氯化銫和溴化乙錠的懸浮密度梯度離心法分離質粒
實驗材料 帶 hsdR17 基因型的感受態大腸桿菌菌株試劑、試劑盒 ATP含有四種 dNTF 的混合溶液誘變緩沖液NaOHNaACTE噬菌體 T4DNA 連接酶噬菌體 T4 多核苷酸激酶DpnI 限制性內切酶熱穩定 DNA 聚合酶瓊脂糖凝膠寡核苷酸引物質粒 DNA儀器、耗材 帶障蔽的自動微量移液器用
實驗方法原理 用含氯化銫和溴化乙錠的懸浮密度梯度離心法分離質粒和染色體 DNA 的方法，取決于與線狀 DNA 和閉環 DNA 結合的溴化乙錠的量的差異。實驗材料 粗制質粒試劑、試劑盒 CsCl CsCl 再分帶溶液乙醇溴化乙錠 石蠟油儀器、耗材 皮下注射針頭折光儀一次性注射器實驗步驟 一、材料1.
一、導論已經提出過許多方法用于從細菌中提純質粒DNA，這些方法都含有以下3個步驟:細菌培養物的生長。細菌的收獲和裂解質粒DNA的純化。(一)細菌培養物的生長從瓊脂平板上挑取一個單菌落，接種到培養物中(有含有行當抗生素的液體培養基中生長)，然后從中純化質粒，質粒的提純幾乎總是如此。現在使用的許多質粒載
實驗概要本實驗包括大腸桿菌質粒DNA的提取，質粒DNA瓊脂糖凝膠電泳鑒定，大腸稈菌感受態細胞的制備及質粒DNA高頻轉化大腸桿菌。實驗步驟1. 大腸桿菌質粒DNA的提取堿裂解法：此方法適用于小量質粒DNA的提取，提取的質粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下：
操作步驟 一、 細菌的培養和收集 將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基（含50μg/ml Amp）中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基（含50μg/ml Amp）中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。&n
一、導論已經提出過許多方法用于從細菌中提純質粒DNA，這些方法都含有以下3個步驟:細菌培養物的生長。細菌的收獲和裂解質粒DNA的純化。(一)細菌培養物的生長從瓊脂平板上挑取一個單菌落，接種到培養物中(有含有行當抗生素的液體培養基中生長)，然后從中純化質粒，質粒的提純幾乎總是如此。現在使用的許多質粒載
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
實驗概要通過本實驗學習瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的方法和技術。 實驗原理 DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負電荷在電場中向正極移動。由于糖－磷酸骨架在結構上的重復性質，
質粒是存在于細菌染色體外的一個或多個能獨立復制并穩定遺傳的小型環狀雙鏈DNA分子，其分子量一般在0.2-10KD范圍內。由于質粒分子小，便于分離和提取，可以攜帶目的基因進入細菌、動物細胞或植物體內進行擴增與表達。 質粒提取方法即去除 RNA，將質粒與細菌基因組 DNA分開，去除蛋白質及其它雜質
細菌質粒的發現是微生物學對現代分子生物學發展的重要貢獻之一。特別是自 70 年代末以來，根據質粒分子生物學特性而構建的一系列克隆和表達載體更是現代分子生物學發展、改良生物品種和獲得基因工程產品不可缺少的分子載體，發展十分迅速，而質粒的分離和提取則是最常用和最基本的實驗技術，其方法很多。僅大腸桿菌質粒
實驗概要本實驗介紹了堿裂解法提取質粒DNA的實驗原理和操作步驟。實驗原理堿裂解法是一種應用最為廣泛的制備質粒DNA的方法，堿變性抽提質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH值高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大
實驗目的 1、掌握最常用的提取質粒DNA的方法和檢測方法； 2、了解制備原理及各種試劑的作用。 實驗原理 堿裂解法是基于DNA的變性與復性差異而達到分離目的的。堿性使質粒DNA
實驗目的1、掌握最常用的提取質粒DNA的方法和檢測方法；2、了解制備原理及各種試劑的作用。實驗原理堿裂解法是基于DNA的變性與復性差異而達到分離目的的。堿性使質粒DNA變性，再將pH值調至中性使其復性，復性的為質粒DNA，而染色體DNA不會復性，纏結成網狀物質，通過離心除去。細菌質粒是一類雙鏈、閉環
實驗概要本文介紹了DNA酶切及凝膠電泳的實驗原理、儀器試劑和操作步驟等。實驗原理DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負電荷在電場中向正極移動。由于糖－磷酸骨架在結構上的重復性質，相同數量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此他們能以相同的速度向正
一、簡述近代質粒DNA分離純化以從大腸桿菌中分離為代表，鑒于大局桿菌（E.coli）在分子生物學研究中的重要地位，從E.coli中分離純化質控DNA〈Piasmid DNA〉成為近年來超離心技術中一個重要課題。而質粒DNA的快速分離純化又對超離心設備（超速離心機、轉頭和附屬設備）提出了更高要求。E.
一）用CSCL-E.B.梯度分離大腸桿菌中質粒DNA、染色體DNA、蛋白質及RNA的詳細步驟（1） 溶液制備：溶液Ⅰ：50mM葡萄糖，10mM EDTA,25 mM Tris-HCL (PH8.0)。溶液Ⅱ：0.2M NaOH，1%SDS。溶液Ⅲ：3M醋酸鈉（PH4.8）TE緩沖液：10 mM Tr
細菌質粒是一類雙鏈、閉環的DNA，大小范圍從1kb至200kb以上不等。各種質粒都是存在于細胞質中、獨立于細胞染色體之外的自主復制的遺傳成份，通常情況下可持續穩定地處于染色體外的游離狀態，但在一定條件下也會可逆地整合到寄主染色體上，隨著染色體的復制而復制，并通過細胞分裂傳遞到
實驗方法原理堿裂解法是一種應用最為廣泛的制備質粒DNA的方法，堿變性抽提質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH值高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會完全分離
如今質粒純化不再是什么難題，那么做了這么次質粒抽提的你了解質粒純化的原理嗎？你知道哪些步驟對質粒純化的成功起著關鍵作用嗎？QIAGEN質粒抽提簡單原理：在堿性條件下裂解細菌之后，將裂解液以指定的鹽濃度加入QIAGEN-tip當中。質粒DNA將發生選擇性的結合而從RNA、蛋白質及其他細胞污染物中被分離