NK細胞活性測定實驗
實驗方法原理 用放射性核素標記靶細胞，當靶細胞受到破壞時，放射性核素被釋放出來，通過測定釋放或殘留在未被破壞細胞內的放射性核素放射活性，即可計算和推測殺傷細胞的細胞毒活性。常用的放射性核素有51Cr、3H-Dr、125I-UdR等。本實驗采用51Cr釋放法檢測人NK細胞活性。實驗材料 靶細胞試劑、試劑盒 SDS生理鹽水臺盼藍染色液鉻酸鈉儀器、耗材 細胞培養板離心管平皿實驗步驟 一、材料準備1. 靶細胞制備（1）取傳代培養24~48小時對數生長期的K562，用RPMI-1640培養液洗滌2次，用10%FCS-RPMI-1640培養液調細胞濃度4×106/ml。（2）0.5 ml K562細胞懸液加3.7~7.4MBq（100~200uCi）51Cr，5%CO2，37度孵育90分鐘，每個15分鐘振搖一次。（3）RPMI-1640培養液洗滌3次，洗去未標記的游離51Cr。（4）10%FCS-RPMI-1640培養液調細胞濃......閱讀全文
酶活性的測定實驗
酶活性的測定可應用于：（1）酶動力學的研究；（2）酶抑制的研究。實驗方法原理1.酶的量或濃度可以用摩爾量表示，或者用酶單位的活性表示。酶活力=每單位時間轉化的底物摩爾數=速率×反應體積。酶活性是存在的活性酶量的量度，取決于指定的條件。SI單位是katal，1 katal = 1 mol /s，更實際
酶活性的測定實驗
連續性檢測 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 1.酶的量或濃度可以用摩爾量表示，或者用酶單位的活性表示。酶活力=每單位時間轉化的底物摩爾數=速率×反應體積。酶活性是存在的活性酶量
NK細胞的來源
?? NK細胞確切的來源還不十分清楚，一般變人直接從骨髓中衍生，其安育成熟信賴于骨髓的微環境。小鼠和人的體外實驗表明，胸腺細胞在體外IL-2等細胞因子存在條件下培養也可誘導出NK細胞。小鼠脾臟在體內IL-3誘導下可促進NK細胞的分化。NK細胞主要分布于外周血中，占PBMC5-10%，淋巴結和骨髓中也
透化細胞和退化細胞器中測定比活性實驗2
用發光分析定量測定ATP 實驗步驟 Sigma公司提供了 -種測定MP濃度的非常簡單，靈敏&又方便的方法。其原理是用熒光素酶從熒光素和ATP中產生光。在熒光素/榮光素酶濃度恒定的情況下，可以繪制一條不同ATP濃度時產光量變化的標準曲線，因此可以很容易地對來自細胞裂解物的未知樣品進行
透化細胞和退化細胞器中測定比活性實驗4
測定[γ-32P]ATP的比活性 實驗步驟 準備下列材料： 含有未知濃度mp] ATP的細胞裂解物樣品 10mg/ml激酶底物肽漸夜（Calbiochem) 0.5mraol/L cAMP 溶液 I、Calbiochem) cA-PrK (Calbiochem) cA-P
透化細胞和退化細胞器中測定比活性實驗1
從標記的細胞或者細胞裂解物中提取ATP實驗步驟1.從標記細胞提取ATP1)? 備下列材料：本實驗用到的所有溶液必須用Mlli - Q純化的水或它的等價物配制。冰冷的4%高氣酺（v/v)三-n-辛胺1,1,2-三氮三m乙烷32p標記的細胞帶螺帽的聚丙烯離心管測量范圍PH4~8的PH試紙小心：高氣酸■
透化細胞和退化細胞器中測定比活性實驗3
用高效液相層析定量測定ATP實驗步驟1)準備下列材料：Whatman Partisphere SAX高效液相層析柱和保護柱線性梯度洗脫液設定在254nm的紫外線監測儀裝配好的0.2;mi Whatman濾膜和濾器0.2^?過濾的Milli-Q水0.2/im S@_0,:5m〇l/LNH4H2ro4
趨化活性測定法測定細胞因子活性
具有趨化活性的細胞因子，也稱趨化因子，諸如IL-8、IL-16、PANTES、MCP及MIP等，能誘導中性粒細胞、單核-巨噬細胞或淋巴細胞等定向遷移。其誘導細胞遷移的方式包括趨化性和化學增活性。趨化性是誘導細胞由趨化因子低濃度處向趨化因子高濃度處做定向移動的特性，可采用瓊脂糖和Boyden盲端微
趨化活性測定法測定細胞因子活性
具有趨化活性的細胞因子，也稱趨化因子，諸如IL-8、IL-16、PANTES、MCP及MIP等，能誘導中性粒細胞、單核-巨噬細胞或淋巴細胞等定向遷移。其誘導細胞遷移的方式包括趨化性和化學增活性。趨化性是誘導細胞由趨化因子低濃度處向趨化因子高濃度處做定向移動的特性，可采用瓊脂糖和Boyden盲端微
細胞活性檢測代謝增殖測定
MTT檢測法活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶，能使額外添加的MTT還原為不溶于水的藍紫色結晶甲瓚（Formazan），并沉積在細胞中，死細胞則無此現象。接著用二甲基亞砜（DMSO）溶解沉積在細胞中的甲瓚后，可利用酶標儀490nm波長測光吸收值，依據吸光值（OD值）計算出活細胞數量。在一定細胞數范圍內，吸
自然殺傷細胞的活性測定
【中文名稱】自然殺傷細胞活性測定【概述】自然殺傷細胞（NK）介導天然免疫應答，它不依賴抗體和補體，即能直接殺傷靶細胞，如腫瘤細胞或受病毒感染的細胞等；此外，尚有免疫調節功能，也參與移植排斥反應和某些自身免疫病的發生發展。【參考值】51Cr釋放法：自然釋放率
NK細胞計數的簡介
自然殺傷細胞（natural killer cell，NK）具有本身的形態、表型及功能特征。NK細胞的確切來源還不十分清楚，一般認為直接從骨髓中衍生，其發育成熟依賴于骨髓的微環境。它分布廣泛，在外周血及脾臟中較多，淋巴結和骨髓次之。NK細胞絕大部分為大顆粒淋巴細胞，免疫表型為 CD3+、CD4+
癌癥中的NK細胞
NK細胞在防御實體瘤及其擴散方面發揮著核心作用。研究表明，外周血中的NK活性與總體癌癥風險的降低有關，腫瘤浸潤性NK細胞是多種惡性腫瘤的陽性預后標志物。盡管NK細胞對于浸潤腫瘤組織和消除實體瘤的能力較差，但NK細胞可能位于間質外圍，募集樹突狀細胞，這些細胞隨后遷移到次級淋巴器官，在那里它們加速反應性
NK細胞有什么作用？
NK細胞是天然免疫系統中一類十分重要的淋巴細胞，由于其殺傷作用是自發的，無需有抗體存在或預先加以致敏，因此將其命名為自然殺傷細胞。它通過其細胞毒活性和產生淋巴因子，在機體抗感染、抗腫瘤、免疫調節和造血調控等方面發揮重要的免疫功能。 NK細胞和殺傷T細胞在清除病原生物感染靶細胞方面有著相似的功能
自然殺傷細胞NK細胞的細胞表型
與T細胞、B細胞相比，NK細胞表面標志的特異性是相對的。人NK細胞mIg-，部分NK細胞CD2、CD3和CD8陽性，表達IL-2受體β鏈 （P75,CD122），CD11b/CD18陽性。常用檢測NK細胞的標記有CD16、CD56、CD57、CD59、CD11b、CD94和LAK-1。一種穩定表達在
自然殺傷細胞NK細胞的細胞功能
自然殺傷活性由于NK細胞的殺傷活性無MHC限制，不依賴抗體，因此稱為自然殺傷活性。NK細胞胞漿豐富，含有較大的嗜天青顆粒，顆粒的含量與NK細胞的殺傷活性呈正相關。NK細胞作用于靶細胞后殺傷作用出現早，在體外1小時、體內4小時即可見到殺傷效應。NK細胞的靶細胞主要有某些腫瘤細胞（包括部分細胞系）、病毒
關于NK細胞的細胞表型介紹
與T細胞、B細胞相比，NK細胞表面標志的特異性是相對的。人NK細胞mIg-，部分NK細胞CD2、CD3和CD8陽性，表達IL-2受體β鏈 （P75,CD122），CD11b/CD18陽性。常用檢測NK細胞的標記有CD16、CD56、CD57、CD59、CD11b、CD94和LAK-1。 一種穩
淀粉酶活性的測定實驗
實驗方法原理α-淀粉酶及β-淀粉酶，各有其一定的特性，如β-淀粉酶不耐熱，在高溫下易鈍化而α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下則發生鈍化，通常提取液同時有兩種淀粉酶存在，測定時，可根據它們的特性分別加以處理，鈍化其中之一，即可測出另一酶的活性。將提取液加熱到70℃維持15分鐘以鈍化β-淀粉酶，便可測定
淀粉酶活性的測定實驗
? 實驗方法原理α-淀粉酶及β-淀粉酶，各有其一定的特性，如β-淀粉酶不耐熱，在高溫下易鈍化而α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下則發生鈍化，通常提取液同時有兩種淀粉酶存在，測定時，可根據它們的特性分別加
淀粉酶活性的測定實驗
實驗方法原理：α-淀粉酶及β-淀粉酶，各有其一定的特性，如β-淀粉酶不耐熱，在高溫下易鈍化而α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下則發生鈍化，通常提取液同時有兩種淀粉酶存在，測定時，可根據它們的特性分別加以處理，鈍化其中之一，即可測出另一酶的活性。將提取液加熱到70℃維持15分鐘以鈍化β-淀粉酶，便可測
谷丙轉氨酶的活性測定實驗
顯色法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 血清谷丙轉氨酶（SGPT）能催化丙氨酸與酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸，丙酮酸在酸性條件下與2，4-二硝基苯肼可縮合成丙酮酸二硝基苯腙，該腙
自然殺傷細胞活性測定方法介紹
【概述】自然殺傷細胞（NK）介導天然免疫應答，它不依賴抗體和補體，即能直接殺傷靶細胞，如腫瘤細胞或受病毒感染的細胞等；此外，尚有免疫調節功能，也參與移植排斥反應和某些自身免疫病的發生發展。【參考值】51Cr釋放法：自然釋放率
自然殺傷細胞NK的功能
? （一)自然殺傷活性 由于NK細胞的殺傷活性無MHC限制，不依賴抗體，因此稱為自然殺傷活性。NK細胞漿豐富，含有較大的嗜天青顆粒，顆粒的含量與NK細胞的殺傷活性呈正相關。NK細胞作用于靶細胞后殺傷作用出現早，在體外1小時、體內4小時即可見到殺傷效應。NK細胞的靶細胞主要有某些腫瘤細胞（包括部分細
自然殺傷細胞NK的表型
?? 與T細胞、B細胞相比，NK細胞表面標志的特異性是相對的。人NK細胞mIg-，部分NK細胞CD2、CD3和CD8陽性，表達IL-2受體β鏈（P75，CD122)，CD11b/CD18陽性。目前常用檢測NK細胞的標記有CD16、CD56、CD57、CD59、CD11b、CD94和LAK-1（見表7
自然殺傷細胞NK的活化
?? NK細胞可通過多種途徑被活化，包括膜表面的CD2、CD3分子和多種細胞因子。 1.通過CD3分子的ζ鏈 NK細胞不表達TCR/CD3復合物，但部分NK細胞表達CD3ζ鏈，當用CD16抗體刺激NK細胞活化時，ζ鏈發生酪氨酸磷酸化，引起胞漿內Ca2+濃度升高，IP3水平增加，促進細胞因子合成和A
關于NK細胞的來源介紹
NK細胞確切的來源還不十分清楚，一般認為直接從骨髓中衍生，其發育成熟依賴于骨髓的微環境。小鼠和人的體外實驗表明，胸腺細胞在體外IL-2等細胞因子存在條件下培養也可誘導出NK細胞。小鼠脾臟在體內IL-3誘導下可促進NK細胞的分化。NK細胞主要分布于外周血中，占PBMC 5～10%，淋巴結和骨髓中也
NK細胞培養與優化
??因NK細胞是一種比較難培養的細胞。培養過程會涉及很多問題，如：細胞接種密度如何？NK細胞有哪些特性？NK細胞具有哪些形態特征？......? ? ? ?使用的NK細胞培養套裝為無飼養層細胞體外擴增技術，以外周血單個核細胞（PBMC）為起始種子細胞，結合多種細胞因子的誘導和刺激，實現NK細胞體外特
NK細胞的抑制和激活
NK細胞沒有主開關，它們的激活是激活性和抑制性受體相互作用以及免疫檢查點的結果(圖2)。因此，激活受體直接與轉化細胞上過表達的配體相互作用，使NK細胞具有識別和殺傷腫瘤細胞的能力，而不考慮其HLA-I的表達。為了防止NK細胞介導的攻擊，健康的宿主細胞表達高水平的MHC-1。事實上，在成熟的NK細胞中
NK與NKT細胞的異同
NK與NKT細胞的區別：1、細胞類別：NK是機體重要的免疫細胞；NKT（natural killer T)細胞是一群細胞表面既有T細胞受體TCR，又有NK細胞受體的特殊T細胞亞群。2、細胞作用：NK不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和免疫調節有關，而且在某些情況下參與超敏反應和自身免疫性疾病的發生，識別靶細
細胞活性檢測DNA合成增殖實驗
BrdU檢測法BrdU為胸腺嘧啶核苷（Thymine）的衍生物，可用于標記活細胞中新合成的DNA（細胞活性周期S期），BrdU可隨著DNA復制進入子細胞，因此在加入BrdU后分裂增殖的細胞DNA都會帶有BrdU標記，可通過抗BrdU單克隆抗體檢測，借此檢測細胞的增殖能力，但BrdU單克隆抗體檢測過程